Межгосударственный стандарт ГОСТ ISO/TS 21872-1-2013 "Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Горизонтальный метод обнаружения потенциально энтеропатогенных Vibrio spp. Часть 1. Обнаружение бактерий Vibrio parahaemoliticus и Vibrio cholerae" (введен в действие приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 17 марта 2014 г. N 157-ст)

Microbiology of food and animal feeding stuffs. Horizontal method for the detection of potentially enteropathogenic Vibrio spp. Part 1. Detection of Vibrio parahaemolyticus and Vibrio cholerae

Дата введения - 1 июля 2015 г.

Введен впервые

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены"

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Для гарантии здоровья лабораторного персонала необходимо, чтобы тесты для выявления Vibrio spp. и особенно токсигенного Vibrio cholerae проводились только в лабораториях, специально оснащенных для этих целей, и под руководством опытного микробиолога, и чтобы уделялось особое внимание обеззараживанию зараженного материала.

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты и корма для животных и устанавливает горизонтальный метод выявления двух главных патогенных видов Vibrio, вызывающих кишечные болезни у человека: Vibrio parahaemolyticus и Vibrio cholerae.

Метод применим также для выявления данных микроорганизмов в объектах окружающей среды в сфере пищевого производства и оборота пищевых продуктов.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ISO 6887-1 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination - Part 1: General rules for the preparation of the initial suspension and decimal dilutions (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Приготовление проб для испытаний, исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований. Часть 1. Общие правила приготовления исходной суспензии и десятичных разведений)

ISO 6887-2 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination - Part 2: Specific rules for the preparation of meat and meat products (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Подготовка проб, исходной суспензии и десятикратных разведений для микробиологических исследований. Часть 2. Специальные правила подготовки мяса и мясных продуктов)

ISO 6887-3 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination - Part 3: Specific rules for the preparation of fish and fishery products (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Приготовление проб для испытаний, исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований. Часть 3. Специальные правила для приготовления рыбы и рыбных продуктов)

ISO 6887-4 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination - Part 4: Specific rules for the preparation of products other than milk and milk products, meat and meat products, and fish and fishery products (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Приготовление проб для испытаний, исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований. Часть 4. Специальные правила для приготовления продуктов, кроме молока и молочных продуктов, мяса и мясных продуктов и рыбы и рыбопродуктов)

ISO 7218 Microbiology of food and animal feeding stuffs - General requirements and guidance for microbiological examinations (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям)

ISO 8261 Milk and milk products. General guidance for the preparation of tests samples, initial suspensions and decimal dilutions for microbiological examination (Молоко и молочные продукты - Общие правила приготовления проб для испытаний, исходных суспензий и десятикратных разведений для микробиологических исследований)

3 Термины и определения

В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:

3.1 потенциально энтеропатогенные Vibrio parahaemolyticus и Vibrio cholerae: Микроорганизмы, которые образуют типичные колонии на плотной селективной среде и которые обладают описанными биохимическими характеристиками при проведении испытания в соответствии с настоящим стандартом.

3.2 обнаружение потенциально энтеропатогенных Vibrio parahaemolyticus и Vibrio cholerae: Определение присутствия или отсутствия Vibrio parahaemolyticus и Vibrio cholerae в определенном количестве продукта, после проведения испытания в соответствии с настоящим стандартом.

4 Сущность метода

4.1 Общие положения

Метод обнаружения Vibrio parahaemolyticus и Vibrio cholerae состоит из четырех последовательных этапов (см. также приложение А).

Примечание - Vibrio parahaemolyticus и Vibrio cholerae могут присутствовать в небольших количествах, часто вместе с гораздо большим количеством других микроорганизмов, относящихся к семейству Vibrionaceae или к другим семействам, поэтому два последовательных обогащения необходимы для выявления определяемых микроорганизмов.

4.2 Первичное обогащение в селективной жидкой среде

Среду для обогащения (щелочную солевую пептонную воду, ASPW) (5.1) инокулируют навеской при комнатной температуре. Посевы инкубируют при 37°С в течение (61) ч для глубоко замороженных продуктов или при 41,5°С в течение (61) ч. для свежих продуктов.

4.3 Вторичное обогащение в жидкой селективной среде

Среду для обогащения (ASPW) инокулируют культурой, полученной по 4.2. Посевы инкубируют при 41,5°С в течение (181) ч.

4.4 Выделение и идентификация

Культуры, полученные по 4.2 и 4.3, пересевают на две селективные плотные среды:

- тиосульфат, цитратный, желчный, сахарозый (TCBS) агар;

- другая плотная селективная среда выбирается параллельно среде TCBS, позволяющей выделить Vibrio parahaemolyticus и Vibrio cholerae.

Посевы на среде TCBS инкубируют при 37°С, посевы просматривают через (243) ч. Посевы на второй селективной среде инкубируют в соответствии с рекомендациями изготовителя этой среды.

4.5 Подтверждение

Типичные колонии Vibrio parahaemolyticus и Vibrio cholerae, выделенные по 4.4, пересевают и затем подтверждают с помощью биохимических тестов.

5 Реактивы и среды

Примечание - В связи с большим количеством питательных сред и реагентов и для удобства пользования их состав и приготовление представлены в приложении В.

5.1 Среда для обогащения: щелочная солевая пептонная вода (ASPW) См. В.1.

5.2 Плотные среды для выделения

5.2.1 Первая среда: тиосульфат, цитратный, желчный, сахарозный (TCBS) агар; см. В.2.

5.2.2 Вторая среда

Выбор второй среды остается за выбором лаборатории, проводящей тест. Приготовление среды должно строго соответствовать инструкциям изготовителя этой среды.

Примечание - Соя пептон трифенил тетразолий хлорид агар (TSAT) и натрия додецил сульфат, полимиксин, сахароза агар (SDSPS), (mCPC, СРС, СС) агары не рекомендуются для выделения Vibrio parahaemolyticus.

5.3 Солевой питательный агар (SNA)

См. В.3.

5.4 Реактив для определения оксидазы

См. В.4.

5.5 Солевой трехсахарный железистый (TSA) агар

См. В.5.

5.6 Солевая среда для определения орнитин декарбоксилазы (ODC)

См. В.6.

5.7 Солевая среда для определения лизин декарбоксилазы (LDC)

См. В.7.

5.8 Солевая среда для определения аргинин дегидролазы (ADH)

См. В.8.

5.9 Реактив для определения -галактозидазы

См. В.9.

5.10 Солевая среда для определения индола

См. В.10.

5.11 Солевые пептонные воды

См. В.11.

5.12 Раствор хлорида натрия

См. В.12.

6 Аппаратура и материалы

Примечание - Инструменты одноразового применения - приемлемая альтернатива стеклянной посуде многократного пользования, если они имеют подходящие технические характеристики.

Оборудование обычной микробиологической лаборатории (см. ISO 7218) и, в частности, следующее:

6.1 Термостат, регулируемый до (371)°С.

6.2 Термостаты или водяные бани, регулируемые до (41,5 1)°С.

6.3 Водяная баня, регулируемая от 44°С до 47°С.

6.4 Водяная баня, регулируемая до (371)°С.

Рекомендуется использовать водяные бани (6.2, 6.3 и 6.4), содержащие антибактериальный агент.

7 Отбор проб

Важно, чтобы для испытания в лабораторию поступила представительная проба, не поврежденная и не измененная в ходе транспортирования или хранения.

Отбор проб не является частью метода, установленного в настоящем стандарте. Отбор проб - по стандарту на конкретный продукт. В случае отсутствия конкретного стандарта на отбор проб продукта рекомендуется, чтобы заинтересованные стороны достигли согласия по процедуре отбора проб.

8 Приготовление испытуемой пробы

Пробу для испытания готовят в соответствии с определенной частью ISO 6887 и/или ISO 8261 или стандарту на конкретный продукт. В случае отсутствия конкретного стандарта рекомендуется, чтобы заинтересованные стороны достигли согласия по данному вопросу.

10 Выражение результатов

В зависимости от результатов интерпретации указывают присутствие или отсутствие потенциально энтеропатогенных Vibrio spp. в пробе для испытания х г или х продукта (см. ISO 7218), указав название соответствующих бактериальных видов.

11 Протокол испытаний

Протокол испытаний должен содержать:

- всю информацию, необходимую для полной идентификации пробы;

- используемый метод отбора проб, если он известен;

- любое отклонение в плане характеристик среды для обогащения или использованных условий инкубирования;

- все рабочие детали, не установленные в настоящем стандарте или рассматриваемые как дополнительные, вместе с деталями любых инцидентов, которые могли бы повлиять на результат испытаний;

- полученные результаты и, в частности, информация о том, была ли подтверждена патогенность изолированных видов.

Протокол испытаний должен также содержать информацию о том, были ли получены положительные результаты только при использовании среды для изоляции (5.2), не указанной в настоящем стандарте.

______________

* В зависимости от желирующих свойств агара.

Библиография

[1]	ISO/TS 11133-1 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Guidelines on preparation and production of culture media - Part 1: General guidelines on quality assurance for the preparation of culture media in the laboratory
[2]	ISO/TS 11133-2 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Guidelines on preparation and production of culture media - Part 2: Practical guidelines on performance testing of culture media