Межгосударственный стандарт ГОСТ 32044.1-2012 (ISO 5983-1:2005) "Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Определение массовой доли азота и вычисление массовой доли сырого протеина. Часть 1. Метод Къельдаля" (введен в действие приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 28 июня 2013 г. N 305-ст)

Feeds, mixed feeds and raw material. Determination of mass fraction of nitrogen and calculation of mass fraction of crude protein. Part 1. Kjeldahl method

Дата введения - 1 июля 2014 г.

Введен впервые

ГАРАНТ:

Курсив в тексте не приводится

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 Подготовлен Открытым акционерным обществом "Всероссийский научно-исследовательский институт комбикормовой промышленности" (ОАО "ВНИИКП")

2 Внесен Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (ТК 004)

3 Принят Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (от 3 декабря 2012 г. протокол N 54-П)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97	Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97	Сокращенное наименование национального органа по стандартизации
Армения	AM	Минэкономики Республики Армения
Беларусь	BY	Госстандарт Республики Беларусь
Казахстан	KZ	Госстандарт Республики Казахстан
Киргизия	KG	Кыргызстандарт
Россия	RU	Росстандарт
Узбекистан	UZ	Узстандарт

4 Настоящий стандарт модифицирован по отношению к международному стандарту ISO 5983-1:2005 Animal feeding stuffs. Determination of nitrogen content and calculation of crude protein content. Part 1: Kjeldahl method (Корма для животных. Определение содержания и расчет содержания сырого белка. Часть 1. Метод Къельдаля).

Техническая поправка ISO 5983-1:2005/Cor.1:2008, принятая после официального издания, внесена в текст стандарта и выделена двойной вертикальной линией на полях слева и справа от соответствующего текста.

Обозначение и год принятия технической поправки приведены в скобках после соответствующего текста.

Уточненные отдельные слова, фразы, абзацы внесены в текст межгосударственного стандарта для приведения в соответствие с требованиями ГОСТ 1.5, отраслевой терминологией и выделены курсивом. Дополнительные примечания, раздел и приложения выделены полужирным курсивом.

Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного стандарта в соответствии с требованиями межгосударственной системы стандартизации и общепринятой отраслевой терминологией Российской Федерации.

Официальные экземпляры международного стандарта, на основе которого подготовлен настоящий межгосударственный стандарт, и международных стандартов, на которые даны ссылки, имеются в Федеральном агентстве по техническому регулированию, стандартизации и метрологии.

В настоящем стандарте ссылки на международные стандарты, используемые в примененном международном стандарте, заменены на межгосударственные стандарты, гармонизированные с международными.

Сведения о соответствии межгосударственных стандартов ссылочным международным стандартам приведены в приложении ДА.

Сравнение структуры международного стандарта со структурой межгосударственного стандарта приведено в дополнительном приложении ДБ.

Перевод с английского языка (en).

Степень соответствия - модифицированная (MOD)

5 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 28 июня 2013 г. N 305-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 32044.1-2012 (ISO 5983-1:2005) введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2014 г.

6 Введен впервые

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на корма, комбикорма и комбикормовое сырье и устанавливает определение массовой доли азота и вычисление массовой доли сырого протеина методом Къельдаля.

Примечания

1 Данным методом не определяют окисленные формы азота или гетероциклические соединения азота.

2 Данный метод не позволяет различить белковый и небелковый азот.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие межгосударственные стандарты:

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 4145-74 Реактивы. Калий сернокислый. Технические условия

ГОСТ 4165-78 Реактивы. Медь II сернокислая 5-водная. Технические условия

ГОСТ 4204-77 Реактивы. Кислота серная. Технические условия

ГОСТ 4328-77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия

ГОСТ ИСО 5725-1-2003 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения

ГОСТ ИСО 5725-2-2003 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений

ГОСТ 5833-75 Реактивы. Сахароза. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 13496.0-80 Комбикорма, сырье. Методы отбора проб

ГОСТ 16539-79 Реактивы. Меди (II) оксид. Технические условия

ГОСТ 18300-87 Спирт этиловый ректификованный технический. Технические условия

ГОСТ 18704-78 Кислота борная. Технические условия

ГОСТ 21669-76 Комбикорма. Термины и определения

ГОСТ 24104-2001 Весы лабораторные. Общие технические требования

ГОСТ 25794.1-83 Реактивы. Методы приготовления титрованных растворов для кислотно-основного титрования

ГОСТ 31218-2003 (ИСО 6498:1998) Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Подготовка испытуемых проб (ISO 6498:1998, MOD)

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети "Интернет" или по ежегодно издаваемому указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3 Термины и определения

В настоящем стандарте применены термины с соответствующими определениями по ГОСТ 21669 со следующим дополнением:

3.1 сырой протеин: Суммарное содержание всех азотистых веществ исследуемой пробы, определяемое по количеству общего азота, умноженному на коэффициент 6,25.

4 Сущность метода

Сущность метода заключается в озолении органического вещества анализируемой пробы серной кислотой в присутствии катализатора, подщелачивании продукта реакции, отгонке и титровании выделяющегося аммиака, вычислении массовой доли азота и расчете массовой доли сырого протеина путем умножения полученного результата на коэффициент пересчета массовой доли азота на массовую долю сырого протеина, равный 6,25.

5 Реактивы и материалы

5.1 Калий сернокислый по ГОСТ 4145.

5.2 Катализатор: по 4.2.1 или по 4.2.2.

5.2.1 Оксид меди (II) (CuO) по ГОСТ 16539.

5.2.2 5-водная сернокислая медь (II) () по ГОСТ 4165.

5.3 Кислота серная по ГОСТ 4204 молярной концентрации c() = 18 , плотностью = 1,84 .

5.4 Парафин.

5.5 Сахароза по ГОСТ 5833.

5.6 Стандартные вещества: по 5.6.1 или по 5.6.2.

5.6.1 Ацетанилид с точкой плавления 114°С и с массовой долей азота (N) 103,6 г/кг.

5.6.2 Триптофан с точкой плавления 282°С и с массовой долей азота (N) 137,2 г/кг. Перед использованием триптофан необходимо высушить.

5.7 Гидроокись натрия по ГОСТ 4328, раствор с массовой долей w (NaOH) = 33%.

5.8 Растворы для поглощения аммиака: по 5.8.1 или по 5.8.2.

5.8.1 Кислота серная стандарт-титр молярной концентрации c() = 0,05 или c() = 0,125 .

5.8.2 Кислота борная по ГОСТ 18704, раствор массовой концентрации с() = 40 .

5.9 Растворы для титрования:

5.9.1 Гидроокись натрия стандарт-титр молярной концентрации c(NaOH) = 0,1 или c(NaOH) = 0,25

5.9.2 Кислота серная стандарт-титр молярной концентрации c(1/2) = 0,05 (0,1н) или c() = 0,125 .

5.10 Индикатор смешанный, интервал перехода при 4,4 - 5,8 ед. рН.

Растворяют 2 г метилового красного и 1 г метиленовой сини в 1000  этилового спирта по ГОСТ 18300 объемной долей 95%.

5.11 Бумага индикаторная.

5.12 Средства для обеспечения равномерного кипения, такие как гранулированная пемза, стеклянные шарики диаметром от 5 до 7 мм или карборундовая крошка, промытые в концентрированной соляной кислоте и дистиллированной воде и прокаленные.

Примечания

1 Используемые реактивы должны быть квалификации х.ч. или ч.д.а.

2 Реактивы, за исключением стандартных веществ (см. 5.6), практически не должны содержать азотистых соединений.

3 Все растворы готовят на дистиллированной или деионизированной воде по ГОСТ 6709.

4 Молярная концентрация растворов для титрования должна быть известна с точностью до четвертого десятичного знака.

5 Допускается приготовление раствора серной кислоты с(1/2 ) = 0,05 из концентрированной серной кислоты в соответствии с требованиями ГОСТ 25794.1.

6 Оборудование

Используют обычное лабораторное оборудование и, в частности, следующее:

6.1 Весы лабораторные по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 200 г и допускаемой погрешностью 0,001 г.

6.2 Установки для озоления, отгонки и титрования или системы приборов для определения массовой доли азота.

6.3 рН-метр.

6.4 Цилиндры 1(2, 3, 4) - 25(250, 500) по ГОСТ 1770.

7 Отбор проб

Отбор проб - по ГОСТ 13496.0.

Поступающая в лабораторию проба должна быть действительно представительной, не поврежденной и не претерпевшей изменений во время транспортирования и хранения.

Пробу хранят в условиях, предотвращающих ее порчу и изменение состава.

8 Подготовка проб

Подготовка проб - по ГОСТ 31218.

9 Проведение испытаний

9.1 Взвешивание анализируемой пробы

Массу анализируемой пробы выбирают в соответствии с ожидаемым содержанием азота. Чтобы анализируемая проба содержала от 0,005 до 0,2 г азота, ее масса должна быть более 0,2 г.

Масса однородных воздушно-сухих проб должна составлять от 0,5 до 2,0 г, масса влажных или неоднородных проб должна составлять от 2,5 до 5,0 г.

9.2 Определение

9.2.1 Озоление органического вещества

Предупреждение. Испытания следует выполнять в хорошо вентилируемом вытяжном шкафу или под хорошо вентилируемым колпаком, которые устойчивы к воздействию серной кислоты.

Анализируемую пробу количественно переносят в колбу Къельдаля соответствующего размера (обычно 800 ).

Добавляют 15 г сернокислого калия (см. 5.1) и катализатор: 0,3 г оксида меди (см. 5.2.1) или от 0,9 до 1,2 г 5-водной сернокислой меди (см. 5.2.2).

Добавляют 25  серной кислоты молярной концентрации c() = 18 (см. 5.3) на первый грамм сухого вещества анализируемой пробы и от 6 до 12  на каждый дополнительный грамм сухого вещества. Раствор тщательно перемешивают, обеспечивая полное смачивание анализируемой пробы.

Устанавливают колбу наклонно под углом от 30° до 45° к вертикали. На протяжении всего процесса нагревания колба должна находиться в этом положении. Горло колбы прикрывают поплавком или маленькой стеклянной воронкой для уменьшения улетучивания серной кислоты во время минерализации.

Колбу нагревают умеренно для предотвращения подъема пены в горло колбы или ее выброса из колбы.

Примечание - Целесообразно добавить противовспенивающий агент, например парафин (см. 5.4).

При умеренном нагревании содержимое колбы время от времени перемешивают вращательными движениями колбы до тех пор, пока масса не обуглится, а пена не исчезнет. Затем нагревают более интенсивно до равномерного кипения.

Примечание - Нагрев должен проходить так, чтобы кипящая кислота конденсировалась в середине горла колбы Къельдаля.

Нельзя допускать перегрева стенок колбы, не контактирующих с жидкостью.

Примечание - Если используется открытое пламя, то такой перегрев можно предотвратить, помещая колбу на лист жаростойкого материала с отверстием, диаметр которого немного меньше диаметра колбы на уровне жидкости.

После того, как жидкость станет прозрачной бесцветной (или зеленовато-голубого оттенка), колбу нагревают еще в течение 2 ч. Затем оставляют остывать. Если продукт озоления начинает затвердевать, добавляют немного воды и перемешивают круговыми движениями.

9.2.2 Отгонка аммиака

9.2.2.1 Осторожно добавляют в колбу Къельдаля от 250 до 350  дистиллированной воды до полного растворения осадка. При необходимости ускоряют растворение, нагревая колбу на водяной бане. Перемешивают круговыми движениями и оставляют остывать. Добавляют немного средства для обеспечения равномерного кипения (см. 5.12).

У некоторых специфических проб осадок может не полностью раствориться в добавленной воде. В этом случае рекомендуется повторить озоление с меньшей массой сернокислого калия (см. 5.1).

Далее отгонку аммиака проводят по 9.2.2.2 или по 9.2.2.3.

9.2.2.2 В приемную колбу установки для отгонки наливают 25  серной кислоты (см. 5.8.1) молярной концентрации c() = 0,05 или c() = 0,125 , выбирая молярную концентрацию в соответствии с ожидаемым содержанием азота в анализируемой пробе. Добавляют от 100 до 150  дистиллированной воды и несколько капель смешанного индикатора (см. 5.10). Продолжают в соответствии с 9.2.2.4.

9.2.2.3 В приемную колбу установки для отгонки наливают от 100 до 150  борной кислоты (см. 5.8.2). Добавляют несколько капель смешанного индикатора (см. 5.10).

Рекомендуется проводить непрерывное титрование аммиака по 9.2.3.3 во время отгонки, так как это позволяет определить конец дистилляции.

9.2.2.4 Погружают конец холодильника в жидкость, находящуюся в приемной колбе, на глубину около 1 см. Медленно по стенкам приливают в колбу Къельдаля 100  раствора гидроокиси натрия (см. 5.7). Сразу же подсоединяют эту колбу к установке для отгонки и нагревают с такой интенсивностью, чтобы за 30 мин собрать около 150  дистиллята. По истечении этого времени проверяют рН дистиллята на конце холодильника, используя индикаторную бумагу (см. 5.11). Если реакция щелочная, продолжают отгонку.

Примечание - Вынимают холодильник из жидкости непосредственно перед окончанием отгонки, чтобы предотвратить противоток.

Если во время отгонки с использованием серной кислоты в качестве поглощающего раствора содержимое приемной колбы становится щелочным, определение повторяют, делая соответствующие корректировки.

9.2.3 Титрование

9.2.3.1 Рекомендуется проводить титрование с автоматическим указанием конечной точки с помощью рН-метра. В противном случае, конечную точку титрования определяют по изменению окраски смешанного индикатора, добавленного в 9.2.2.2 или 9.2.2.3.

9.2.3.2 Если в качестве поглощающего раствора используется серная кислота, избыток серной кислоты в приемной колбе титруют раствором гидроокиси натрия (см. 5.9.1) до достижения конечной точки титрования, определяемой по рН-метру или изменению окраски раствора с фиолетовой на зеленую.

9.2.3.3 Если в качестве поглощающего раствора используется борная кислота, титруют аммиак серной кислотой (см. 5.9.2) до достижения конечной точки титрования, определяемой по рН-метру или изменению окраски раствора с зеленой на фиолетовую.

Если автоматическое титрование невозможно (см. 9.2.2.3), титрование следует выполнять как можно скорее после завершения отгонки, при этом температура дистиллята не должна превышать 25°С с целью избежания потерь аммиака.

9.3 Контрольный опыт

Контрольный опыт выполняют, используя вместо анализируемой пробы приблизительно 1 г сахарозы (см. 5.5).

9.4 Проверочный опыт

Проверочный опыт выполняют, определяя содержание азота в ацетанилиде (см. 5.6.1) или триптофане (см. 5.6.2) после добавления 1 г сахарозы.

Если анализируемые пробы озоляются легко, то используют ацетанилид, в противном случае - триптофан.

Извлечение азота при озолении ацетанилида должно составлять не менее 99,5%, при озолении триптофана - не менее 99,0%.

10 Обработка результатов

10.1 Вычисление массовой доли азота

10.1.1 Вычисление массовой доли азота при отгонке аммиака в серную кислоту

Массовую долю азота в анализируемой пробе, , г/кг, вычисляют по формуле

,

(1)

где , - объемы растворов гидроокиси натрия, использованные для титрования в контрольном опыте и при испытании пробы соответственно, ;

- молярная концентрация раствора гидроокиси натрия, используемого для титрования, ;

М - молярная масса азота (М = 14 г/моль), г/моль;

m - масса анализируемой пробы, г.

Результат записывают с точностью до 1 г/кг или 0,1% (массовая доля). (ISO 5983-1:2005/Cor.1:2008)

10.1.2 Вычисление массовой доли азота при отгонке аммиака в борную кислоту

Массовую долю азота в анализируемой пробе, , г/кг, вычисляют по формуле

,

(2)

где 2 - коэффициент;

, - объемы серной кислоты, использованные для титрования при испытании пробы и в контрольном опыте соответственно, ;

- молярная концентрация серной кислоты, используемой для титрования, ;

М - молярная масса азота (М = 14 г/моль), г/моль;

m - масса анализируемой пробы, г.

Результат записывают с точностью до 1 г/кг или 0,1% (массовая доля). (ISO 5983-1:2005/Cor.1:2008)

10.2 Расчет массовой доли сырого протеина

Массовую долю сырого протеина в анализируемой пробе, , г/кг, рассчитывают по формуле

,

(3)

где 6,25 - коэффициент пересчета массовой доли азота на массовую долю сырого протеина;

- массовая доля азота в анализируемой пробе ( или ), г/кг;

Массовую долю сырого протеина в анализируемой пробе, %, рассчитывают по формуле

,

(4)

где 6,25 - коэффициент пересчета массовой доли азота на массовую долю сырого протеина;

- массовая доля азота в анализируемой пробе ( или ), г/кг;

0,1 - коэффициент пересчета единиц массовой доли, грамм на килограмм на процент.

Результат записывают с точностью до 1 г/кг или 0,1% (массовая доля). (ISO 5983-1:2005/Cor.1:2008)

11 Прецизионность

11.1 Межлабораторные испытания

Результаты межлабораторных испытаний в отношении прецизионности метода определения массовой доли сырого протеина приведены в приложении А. Значения, полученные в этих испытаниях, не могут быть применены образцам, отличающимся от описанных в настоящем стандарте и содержащим другую массовую долю сырого протеина.

11.2 Повторяемость (сходимость)

Абсолютное расхождение между результатами двух отдельных независимых испытаний, полученными одним и тем же методом на одной лабораторной пробе в одной и той же лаборатории одним и тем же оператором на одном и том же экземпляре оборудования в течение короткого промежутка времени, не должно превышать более чем в 5% случаев предел повторяемости, r, %, рассчитанный по формуле

,

(5)

где 0,3 - постоянная величина, %;

0,008 - коэффициент;

- среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений массовой доли сырого протеина, %.

11.3 Воспроизводимость

Абсолютное расхождение между результатами двух отдельных испытаний, полученными одним и тем же методом на одной лабораторной пробе в разных лабораториях разными операторами на различных экземплярах оборудования, не должно превышать более чем в 5% случаев предел воспроизводимости, R, %, рассчитанный по формуле

,

(6)

где 1,3 - постоянная величина, %;

0,027 - коэффициент;

- среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений массовой доли сырого протеина, %.

12 Протокол испытания

Протокол испытания должен включать следующее:

- всю информацию, необходимую для полной идентификации пробы;

- используемый метод отбора проб, если известен;

- используемый метод испытания со ссылкой на настоящий стандарт;

- все обстоятельства, не указанные в настоящем стандарте или рассматриваемые как необязательные, которые могли повлиять на результат(ы) испытания;

- полученный результат испытания или среднеарифметическое значение двух испытаний, если проверена повторяемость.