Приложение А (обязательное). Меры предосторожности при работе в ПЦР-лаборатории

Приложение А
(обязательное)

Меры предосторожности при работе в ПЦР-лаборатории

Для исключения ложноположительных результатов исследования и неправильной интерпретации полученных данных, а также чтобы предотвратить неконтролируемое распространение амплифицированных фрагментов, при работе в лаборатории необходимо соблюдать следующие требования.

А.1 ПЦР-лаборатория должна включать следующий набор рабочих зон:

- зона приема и регистрации;

- зона первичной обработки материала;

- зона выделения ДНК;

- зона проведения ПЦР;

- зона детекции продуктов амплификации (отсутствует в случае, если детекция продуктов ПЦР осуществляется по методике ПЦР в реальном времени).

А.1.1 Зона приема и регистрации предназначена для регистрации и хранения поступающего материала.

А.1.2 Зона первичной обработки материала предназначена для сортировки и маркировки образцов, обработки лизирующим буфером, а также первичной инактивации остатков биоматериала.

А.1.3 Зона выделения ДНК предназначена для экстракции ДНК из исследуемого материала, прошедшего первичную обработку в зоне приема и первичной обработки образцов, а также временного хранения проб выделенной ДНК.

А.1.4 Зона проведения ПЦР предназначена для внесения ДНК в реакционную смесь для ПЦР и проведения амплификации. В этой зоне запрещается проводить все другие виды работ с образцами ДНК, растительным материалом, микробиологические и другие виды исследований.

А.1.5 Зона детекции продуктов амплификации предназначена для анализа продуктов ПЦР методом электрофореза. Зона детекции должна быть изолирована в отдельном помещении с тамбуром для смены рабочей одежды и УФ-боксом для проведения электрофореза.

А.2 В ПЦР-лаборатории должны быть предусмотрены вспомогательные помещения [гардероб, кабинет заведующего лабораторией, комната приема пищи, подсобные (складские) помещения, туалет]. Вспомогательные помещения могут быть общими с другими подразделениями учреждения.

А.3 Планировочные решения и размещение оборудования должны обеспечивать поточность движения исследуемого материала. Следует полностью исключить воздухообмен между зоной детекции продуктов амплификации и другими зонами.

А.4 Лаборатория должна быть оборудована водопроводом, канализацией, электричеством, отоплением и приточно-вытяжной или вытяжной вентиляцией. Все помещения лаборатории обеспечиваются достаточным естественным и искусственным освещением. При необходимости в ПЦР-лаборатории могут быть установлены кондиционеры.

А.5 Поверхности стен, пола и потолка в лабораторных помещениях должны быть гладкими, без щелей, легко обрабатываемыми, устойчивыми к действию моющих и дезинфицирующих средств. Полы не должны быть скользкими. Лабораторная мебель должна иметь покрытие, устойчивое к действию моющих и дезинфицирующих средств. Поверхность столов не должна иметь трещин и швов.

А.6 Помещения на всех этапах ПЦР-анализа должны быть оборудованы бактерицидными лампами в соответствии с документами, действующими на территории государства, принявшего стандарт.

А.7 Помещения лаборатории должны быть непроницаемы для грызунов и насекомых.

А.8 ПЦР-лабораторию обеспечивают средствами пожаротушения.

А.9 Каждую зону ПЦР-лаборатории оснащают индивидуальным набором соответствующего лабораторного оборудования, расходных материалов и рабочей одежды, используемых только в данной зоне. Комплект лабораторного оборудования определяют с учетом используемых методик проведения ПЦР-анализа, наборов реагентов для выделения нуклеиновых кислот, амплификации и детекции результатов исследований.

А.9.1 Приборы, оборудование и средства измерения, используемые в ПЦР-лаборатории, должны быть технически исправны, иметь паспорт и инструкцию по эксплуатации. Средства измерения регулярно подвергают метрологическому контролю. Используемые приборы должны соответствовать нормам безопасности и электромагнитной совместимости.

А.9.2 Для проведения исследования используют приборы и расходные материалы (микропробирки, наконечники к автоматическим дозаторам), исключающие возможность перекрестной контаминации (загрязнения выявляемой ДНК) исходного материала, экстрактов ДНК. Для этого используют:

- термостаты с твердотельным термоблоком;

- пробирки с плотно закрывающимися крышками;

- одноразовые пробирки, микропробирки и наконечники к автоматическим дозаторам (наконечники должны соответствовать автоматическим дозаторам, а микропробирки для амплификации - амплификаторам (в соответствии с рекомендацией фирмы - производителя прибора);

- специальные контейнеры для сброса использованных наконечников и пробирок, устанавливаемые на рабочих местах.

А.9.3 Приборы, оборудование и упаковки с расходными материалами должны быть маркированы в соответствии с этапами ПЦР-анализа, для которых они предназначены.

А.9.4 Автоматические дозаторы, рабочие поверхности корпусов приборов должны быть устойчивы к действию моющих и дезинфицирующих средств и ультрафиолетового излучения.

А.10 Не допускается хранение исследуемых проб и экстрактов ДНК в одном холодильнике с наборами реагентов.

А.11 В ПЦР-лаборатории используют дезинфицирующие средства, разрешенные к применению на территории государства, принявшего стандарт, и вызывающие деградацию ДНК.

А.12 Перед началом проведения исследований рабочие поверхности, оборудование и материалы обрабатывают ультрафиолетом в течение необходимого времени (время работы УФ-ламп отражают в специальном журнале по учету работы бактерицидных ламп).

А.13 Весь поступающий материал направляют в зону приема и регистрации, где проводят анализ сопроводительных документов, сличение маркировки доставленных проб и информации, указанной в сопроводительных документах, визуальную оценку качества проб и регистрацию в специальном журнале. В случае выявления нарушений составляют акт о возврате материала владельцу или об его уничтожении.

А.14 В зону выделения ДНК пробы материала доставляют в закрытых одноразовых пробирках в виде маркированных аликвот после обработки лизирующим буфером.

А.15 Использованные наконечники для автоматических дозаторов, микропробирки и отработанные расходные материалы подвергают химической обработке дезинфицирующими растворами, вызывающими деградацию ДНК. Обработку проводят в зоне, где непосредственно использовались расходные материалы (используя контейнеры для сброса наконечников и микропробирок, установленные на рабочих местах).

А.16 Соблюдают поточность продвижения исследуемого материала и его производных (экстракты ДНК, продукты амплификации).

А.17 Не допускается использование наборов реагентов с истекшим сроком годности или хранившихся в условиях, не соответствующих требованиям, изложенным в инструкциях к наборам.

А.18 По окончании работы пробы материала, подлежащие хранению, экстракты ДНК и наборы реагентов убирают в соответствующие хранилища (холодильники, шкафы и т.д.) с соблюдением требований, указанных в А.17, после чего рабочие поверхности обрабатывают реагентами, вызывающими разрушение ДНК.

А.19 Во всех помещениях лаборатории ежедневно проводят влажную уборку. Каждую зону ПЦР-анализа обеспечивают индивидуальным набором уборочного инвентаря. После завершения уборки проводят обработку ультрафиолетовым излучением в течение необходимого времени.

А.20 Сотрудников обеспечивают спецодеждой для каждой зоны ПЦР-лаборатории. При работе в зоне детекции продуктов амплификации следует использовать бахилы и одноразовые перчатки. Перемещение спецодежды из зоны в зону не допускается. Возможно использование одноразовой спецодежды.

А.21 Каждую зону лаборатории обеспечивают аптечкой стандартной комплектации для оказания первой медицинской помощи.

А.22 Всю необходимую методическую литературу и нормативную документацию следует систематизировать и хранить в зоне приема и регистрации. Инструкции к приборам и наборам реагентов должны находиться по месту использования.

А.23 При возникновении загрязнения продуктами ПЦР зон ПЦР-лаборатории проводят следующие мероприятия:

- утилизацию всех находящихся в загрязненной зоне реактивов;

- утилизацию исследуемых материалов на всех промежуточных стадиях обработки (кроме исходной);

- генеральную уборку, химическую и ультрафиолетовую обработку всех поверхностей лабораторных помещений;

- обработку мебели, рабочих поверхностей, поверхностей корпусов приборов и оборудования, а также спецодежды.

Проведение ПЦР-исследований до завершения вышеназванных мероприятий не допускается.