Приложение А (обязательное). Подготовка колонки и определение ее эффективности

Приложение А
(обязательное)

Подготовка колонки и определение ее эффективности

А.1 Подготовка колонки при первоначальной организации работы на приборе

А.1.1 Заполнение колонки

А.1.1.1 Насадочную колонку заполняют насадкой, состоящей из носителя и неподвижной фазы. Неподвижная фаза составляет от 5% до 20% массы насадки:

- носитель: диатомитовая земля, промытая кислотой и силанизированная или другой инертный носитель с узким диапазоном величины частиц (в диапазоне от 125 до 200 мкм с интервалом 25 мкм). Величина частиц носителя должна соответствовать внутреннему диаметру и длине колонки;

- неподвижная фаза: полярная жидкость полиэфирного типа (полидиэтиленгликольсукцинат, полибутандиолсукцинат, полиэтиленгликольдипинат и др.), цианосиликоны или какая-либо другая жидкость, обеспечивающая требуемое хроматографическое разделение.

А.1.1.2 Внутреннюю поверхность капиллярной колонки перед нанесением покрытия неподвижной фазой обрабатывают для инактивации. Толщина покрытия - от 0,1 до 0,2 мкм.

Неподвижная фаза типа полигликоля (полиэтиленгликоль 20000), полиэфира (полибутандиолсукцинат) или полярные полисилоксаны (цианосиликоны).

А.1.2 Кондиционирование колонки

А.1.2.1 Насадочную колонку отсоединяют от детектора. Термостат нагревают до 185°С и пропускают ток инертного газа через свежеприготовленную колонку со скоростью от 20 до 60  в течение 16 ч и 2 ч при температуре 195°С.

А.1.2.2 Капиллярную колонку осторожно устанавливают в термостате. При сборке выполняют следующие условия:

- колонку устанавливают в термостате (с опорой);

- все соединения должны быть герметичны;

- концы колонки соединяют с инжектором и детектором с учетом сокращения мертвого объема до минимума. Через колонку пропускают поток газа-носителя.

Кондиционирование капиллярной колонки проводят в режиме программирования температуры термостата со скоростью 3°С/мин от температуры окружающего воздуха до температуры на 10°С ниже температурного предела расщепления неподвижной фазы.

Колонку выдерживают при этой температуре в течение 1 ч до стабилизации нулевой линии. Затем температуру термостата доводят до 180°С для работы в изотермических условиях.

Примечание - В промышленности выпускаются соответствующие предварительно кондиционированные капиллярные колонки.

А.1.3 Определение количества теоретических тарелок (эффективности) и разрешающей способности (см. рисунок А.1)

"Рисунок А.1 - Хроматограмма для определения количества теоретических тарелок колонки (эффективности) разрешающей способности"

Проводят анализ смеси метилстеарата и метилолеата в метиловых эфирах жирных кислот масла известного состава (подсолнечного масла или масла-какао).

Условия проведения измерения подбирают так, чтобы максимум пика метилстеарата был зарегистрирован через 15 мин после пика растворителя. Пик метилолеата должен занимать 3/4 всей шкалы, количество теоретических тарелок должно быть не менее 2000 на метр длины колонки для метилстеарата, разрешающая способность не менее 1,25.

Количество теоретических тарелок n вычисляют по формуле

,

(А.1)

где - расстояние удерживания от начала хроматограммы до максимума пика метилстеарата, мм;

- ширина пика метилстеарата, измеренная между точками пересечения касательных в точках изгиба кривой с нулевой линией, мм.

Разрешающую способность R вычисляют по формуле

,

(А.2)

где - ширина пика метилолеата, измеренная между точками пересечения касательных в точках изгиба кривой с нулевой линией, мм;

- расстояние между максимумами пиков метилстеарата и метилолеата.

А.1.4 Периодичность подготовки колонки

В дальнейшем подготовку и кондиционирование колонки проводят при снижении разделительной способности колонки или замене неподвижной фазы.