Методические рекомендации по отбору проб почвы для бактериологического исследования на наличие возбудителя сибирской язвы и актиномицетов-антагонистов (утв. Министерством здравоохранения СССР 27 сентября 1984 г.)

Введение

Возбудитель сибирской язвы, попадая в почву, на протяжении многих десятилетий не только сохраняется, но и накапливается за счет многократных вегетаций и споруляций. При этом состояние инфицированности почвы представляет собой явление динамическое, подверженное изменчивости во времени количественном и качественном отношении под влиянием меняющихся условий окружающей среды. Наиболее благоприятными являются следующие физико-химические характеристики почв: температура не ниже 12-15°С, влажность в пределах 29-85%, рН - 5,3-7,3; наличие 1-14% гумуса, присутствие 14-38 мг фосфора# 6-18 мг калия на 100 г почвы. В зависимости от перечисленных и целого ряда других факторов (антропогенное воздействие, наличие актиномицетов-антагонистов, влияние ризосферы высших растений) происходит накапливание возбудителя сибирской язвы в почве или сохранение единичных микробов с измененными культурально-морфологическими свойствами и сниженной вирулентностью.

Возбудитель сибирской язвы преимущественно находится в почве на глубине от 1,2 до 2 м, так как именно на этом уровне осуществлялось в прошлом захоронение трупов сибиреязвенных животных. В результате ливневых паводковых потоков, эрозионных процессов или антропогенного воздействия возможен вынос возбудителя в поверхностный слой почвы, составляющий до 40 см и наиболее опасный в эпизоотическом и эпидемическом отношении. Кроме того, поверхностное загрязнение почвы происходит при падеже и вынужденном убое сибиреязвенных животных.

Систематическое бактериологическое исследование почвы в местах падежа, вынужденного убоя или захоронения сибиреязвенных животных является важным моментом в системе противоэпидемических мероприятий и позволяет осуществлять оперативное слежение за состоянием очагов сибирской язвы.

До настоящего времени отсутствуют унифицированные подходы к отбору проб почвы и соблюдению противоэпидемического режима при работе на участках, зараженных возбудителем сибирской язвы.

В настоящих методических рекомендациях излагаются методика отбора проб почвы с применением бура Малькова модифицированного авторами, меры личной профилактики, способы обеззараживания инструментария и остатков проб почвы.

Методика отбора проб почвы для бактериологического исследования на наличие возбудителя сибирской язвы и актиномицетов-антагонистов

Отбор проб почвы для бактериологического исследования на участках захоронения, в местах падежа или вынужденного убоя сибиреязвенных животных проводится по эпидемиологическим показаниям, а также при осуществлении динамического наблюдения за очагом. При контроле активности очага в местах захоронения отбор проб почвы следует проводить в летне-осенний период, наиболее благоприятный для вегетации возбудителя сибирской язвы. Необходимо максимально охватывать исследованиями весь участок очага как по площади, так и по глубине. Так как вероятность бактериологической находки возбудителя сибирской язвы в местах захоронения составляет 1-2%, число проб из одного очага должно составлять не менее 100.

Работа по отбору проб проводится в защитном костюме II типа с применением дезинфицирующих средств.

Бригада отборщиков проб почвы состоит из двух человек. К месту отбора проб она направляется на выделенном транспорте со специальной укладкой (приложение 1).

1. На территории очага выбирается участок размером от 8 до 16 в зависимости от площади захоронения.

2. Намечаются 5 точек отбора проб почвы (4 точки по углам и одна в центре) при отборе проб почвы на глубину до 2-х м или 6 точек (4 точки по углам и две в центре) при отборе проб на глубину до 1,6 м. При захоронении сибиреязвенных животных в траншеи отбор проб необходимо проводить в 5 или 6 точках (в зависимости от глубины отбора проб), расположенных по ходу траншеи.

3. Совком (ножом) производится расчистка намеченных точек отбора проб от мусора, листьев и травы.

4. Отбор проб почвы осуществляется при помощи модифицированного бура Малькова (приложение 2).

5. У места отбора проб почвы расстилается полиэтиленовая пленка размером не менее 100X100 см, над которой отобранная почва ссыпается в мешочки.

6. По эпидпоказаниям (при падеже или прирезке сибиреязвенного животного) определяется поверхностное загрязнение почвы возбудителем сибирской язвы путем отбора проб в каждой намеченной точке на глубине до 40 см. При этом количество проб составляет не более 20.

При динамическом наблюдении за очагом (в местах захоронения сибиреязвенных животных) отбор проб почвы производится на глубине 1,6-2 метров через каждые 10 см (рис. 1).

7. Вес каждой пробы, взятой в одной точке отбора, должен быть равен 40-50 г (2 столовых ложки).

8. Отобранные на каждой глубине из 5 или 6 точек пробы объединяются в один матерчатый мешочек, на котором простым карандашом отмечается глубина отбора пробы (10, 20, 30 см и т.д.). Полиэтиленовые мешочки не используются, так как это может привести к гибели возбудителя или изменению его свойств.

9. Пробу почвы для лабораторного исследования на наличие актиномицетов-антагонистов следует отбирать в одной из пяти точек на глубине 20 см весом 10 г в отдельный полиэтиленовый мешочек с целью создания благоприятных условий для сохранения и накопления актиномицетов-антагонистов.

10. Для определения химического состава почв пробу весом 100 г отбирают в матерчатый мешочек в одной точке на глубине 20 см на контрольном участке с однотипной структурой почв, расположенном в 100 м от скотомогильника.

11. Пронумерованные мешочки с пробами почвы для исследования на наличие возбудителя антракса помещают по 5-6 штук в металлические пеналы. В один из этих пеналов помещают пробу почвы, предназначенную для исследования на наличие актиномицетов. Пробу для химического анализа помещают в отдельный пенал.

12. После отбора проб остатки почвы, находящиеся на полиэтиленовой пленке, ссыпают в образовавшиеся шурфы. Сверху засыпают хлорной известью (200 г на каждый шурф) и увлажняют. Использованную полиэтиленовую пленку протирают ветошью, смоченной в 6% растворе перекиси водорода с 0,5% раствором моющего средства.

13. Пеналы с наружной стороны обрабатывают 6% раствором перекиси водорода с 0,5% раствором моющего средства.

14. Бур, лопатку и совок (нож) обжигают пламенем паяльной лампы, затем обрабатывают ветошью, смоченной 6% раствором перекиси водорода с 0,5% раствором моющего средства.

15. Отборщики обрабатывают обувь 6% раствором перекиси водорода с 0,5% раствором моющего средства и отправляются к месту стоянки транспорта, где снимают защитную одежду (маски, халаты, косынки) и помещают ее в клеенчатый мешок, обрабатывая руки в резиновых перчатках 6% раствором перекиси водорода с 0,5% моющего средства после каждой манипуляции. После снятия перчаток моют руки с мылом.

16. Пеналы оклеивают лейкопластырем, бур и лопатку помещают в чехол, выписывают направления.

Отобранные пробы почвы должны быть доставлены в лаборатории для исследования в течение 1-3 суток.

Примечание. В случае травмы с нарушением кожных покровов в процессе отбора проб почвы в очаге сибирской язвы необходимо промыть рану водой с мылом, обработать настойкой йода и наложить повязку. В дальнейшем предпринять меры по экстренной профилактике заболевания сибирской язвой.

При составлении "Рекомендаций" использованы:

1. Инструкция и методические указания по лабораторной и клинической диагностике, профилактике и лечению сибирской язвы у людей.

Москва, 1980.

2. Организация мероприятий по профилактике сибирской язвы (методические рекомендации).

Кишинев, 1980.

3. Методические указания по обнаружению возбудителя сибирской язвы в сырье животного происхождения и объектах внешней среды. Утв. Главным управлением ветеринарии МСХ СССР 1.II#.79 г.

4. Инструкция о противоэпидемическом режиме работы с материалом, зараженным или подозрительным на зараженность возбудителями инфекционных заболеваний I-II групп.

Саратов, 1979.

5. Методические рекомендации по использованию актиномицетов-антагонистов для обеззараживания почв, загрязненных возбудителем сибирской язвы.

Киев, 1978.

Зам. начальника Главного управления карантинных инфекций Министерства здравоохранения СССР

Ю.М. Федоров