4. Приложение

4. Приложение

4.1. Питательные среды

1. Основная среда (сахарно-дрожжевой питательный агар). Сухого питательного агара Дагестанского НИИ питательных сред 35 г, дрожжевого автолизата 20 мл, глюкозы 10 г, дистиллированной воды 1000 мл. Расплавляют при нагревании, фильтруют и стерилизуют при 112°С 15 мин. Среда должна иметь рН 7,2-7,4.

2. Подтверждающая среда (ПС). Основной среды 1000 мл, лимоннокислого натрия 20 г, хлористого натрия 55 г. Стерилизуют автоклавнрованием при 112°С 15 минут. В охлажденный до 40-50°С агар вносят лошадиную сыворотку 50 мл, налидиксовую кислоту 0,1 г, затем перемешивают и разливают в стерильные чашки.

3. Желчно-щелочной агар (для выделения и количественного учета энтерококков). Компоненты основной среды, рассчитанные на 1000 мл, растворяют в 600 мл дистиллированной воды, вносят свежую бычью желчь 400 мл, карбонат натрия 5 г. Стерилизуют автоклавированием при 112°С 15 минут. При отсутствии свежей бычьей желчи можно использовать желчь медицинскую, желчь сухую обезвоженную или вносить эквивалентное количество желчных солей. Перед разливкой в чашки добавляют 50 мл свежей (консервированной) крови человека или животного, 12,5 мл 0,01%-ного раствора кристаллического фиолетового и 20 мл 10%-ного раствора гидроксида калия (КОН). Для выделения и идентификации энтерококков эту среду можно использовать и в жидком виде.

4. Еф-агар (для выделения и количественного учета Str. faecalis). Основной питательной среды 1000 мл, лимоннокислого натрия 5 г. Стерилизуют при 112°С 15 минут. Перед разливкой среды в стерильные чашки добавляют 50 мл лошадиной сыворотки, 0,1 г налидиксовой кислоты и 0,7 г (35 мл 2%-ного водного раствора) теллурита калия.

5. Энтерококковая дифференциально-диагностическая среда (среда ЭДДС). Компоненты основной среды, рассчитанные на 1000 мл, растворяют в 800 мл дистиллированной воды. Стерилизуют автоклавированием при 112°С 15 минут. Перед разливкой в чашки добавляют ТТХ 0,1 г, 12,5 мл 0,01%-ного водного раствора кристаллического фиолетового, 0,1 г налидиксовой кислоты, стерильного обезжиренного молока, подогретого до 40-50°С 200 мл, свежей дефибринированной или консервированной человеческой крови 50 мл. Перемешивают и разливают по 7 мл в стерильные чашки.

4.2. Способ приготовления дрожжевого автолизата

На простых питательных средах энтерококки растут плохо. Для стимуляции роста этих бактерий в состав сред обязательно включают углеводы и дрожжевой автолизат. Дрожжевой автолизат можно приготовить в любой бактериологической лаборатории. Измельчают 1 кг прессованных хлебопекарских дрожжей, помещают в пятилитровую бутыль и ставят в сушильный электрический шкаф при 60°С на 72 часа. По мере разжижения дрожжей содержимое бутыли перемешивают несколько раз в сутки. Конец автолиза характеризуется полным разжижением дрожжей, а автолизат приобретает коричневый оттенок и приятный запах. По окончании автолиза в бутыль наливают 3 литра теплой воды, содержимое перемешивают, разливают в небольшие колбы или флаконы и автоклавируют при 112°С 20 минут. После стерилизации пробки флаконов или колб для герметичности закрывают парафинированной бумагой и хранят в холодильнике. Для постоянного применения отстоявшийся в течение недели просветленный автолизат сливают в стерильную колбу или флакон и консервируют хлороформом. На 100 мл авто- лизата берут 5-10 мл хлороформа.

Автолизат дрожжевой для приготовления питательных сред (ТУ 6-09-3979-75) в настоящее время выпускается научно-производственным объединением "Биохимреактив". Представляет собой аморфный порошок желтовато-коричневого цвета; содержание аминного азота - 2,5%, воды - 10%, потери при высушивании - 9%. Цена - 110 руб. за килограмм.

Вместо автолизата дрожжевого можно использовать Экстракт дрожжевой для приготовления питательных сред (ТУ 6-09-3462-73), выпускаемый этим же объединением. Содержание аминного азота - не менее 1,5%; содержание воды - не более 9%. Цена - 125 руб. за 1 кг.

Заказы направлять по адресу: 229014 гор. Олайне Латвийской ССР, НПО "Биохимреактив". Расчетный счет N 324402 в Ленинском отделении Госбанка гор. Риги.