Приложение 6.1.6. Оценка острой токсичности при накожном поступлении

Приложение 6.1.6

Оценка острой токсичности при накожном поступлении

Идентичен международному документу OECD TG N 402 "Acute Dermal Toxicity" (ОЭСР Руководство N 402 "Острая токсичность при накожном поступлении"). Международный документ разработан Организацией Экономического Сотрудничества и Развития (ОЭСР/OECD) 24 февраля 1987 г. Перевод с английского языка (еn). Степень соответствия - модифицированный (MOD).

1. Область применения

1.1. Настоящий метод исследования обеспечивает получение информации об опасных свойствах вещества при однократном накожном поступлении и позволяет оценить и классифицировать вещество в соответствии с Согласованной на глобальном уровне системой классификации и маркировки (СГС) по данному виду воздействия.

1.2. До проведения эксперимента должна быть рассмотрена вся доступная об исследуемом веществе информация. Такая информация включает данные о составе и химическом строении вещества; его физико-химические свойства; результаты токсикологических испытаний in vivo и in vitro; токсикологические данные по структурно родственным веществам и предполагаемые пути использования вещества. Эта информация является необходимой для подтверждения того, что испытание является важным для защиты здоровья человека и способствует обоснованному выбору начальной дозы.

2. Общие положения

2.1. В изучении и оценке токсичности вещества определение острой кожной токсичности является важным особенно в тех случаях, когда накожный путь поступления является приоритетным.

2.2. Данные об острой кожной токсичности могут служить основой для классификации и маркировки.

2.3. Эти исследования являются первым шагом при установлении доз для подострого и других видов испытаний, а также предоставляют информацию о кожной абсорбции и токсичном воздействии вещества при данном пути поступления.

3. Принцип тестового метода

3.1. Несколько групп подопытных животных подвергаются воздействию исследуемого вещества через кожу в установленных дозах, на каждой группе испытывается определенная доза вещества. Затем проводятся наблюдения за биологическими эффектами и случаями гибели. Животные, погибшие во время эксперимента, подвергаются вскрытию, по завершении эксперимента выжившие животные также подвергаются вскрытию.

3.2. Животные, демонстрирующие признаки невыносимой боли и недомогания, должны быть умерщвлены гуманным способом. Не следует наносить испытываемое вещество, о котором заведомо известно, что оно вызовет сильную боль и тяжелые нарушения в силу своих разъедающих (коррозионных) или раздражающих свойств.

4. Описание тестового метода

4.1. Подготовка

4.1.1. Животные проходят подготовку к исследованию (содержание в лабораторных клетках в соответствующих условиях и специальное кормление) в течение не менее пяти дней до начала исследования. Перед тем как приступить к проведению исследования, здоровые молодые особи в случайном порядке распределяются по группам. Приблизительно за 24 часа до начала исследования шерстка должна быть удалена - выстрижена или выбрита - со спинной части тела животного. При стрижке или бритье необходимо быть осторожным, чтобы не повредить кожу животного, так как это может повлиять на процесс всасываемости. Не меньше 10% поверхности тела должны быть очищены для нанесения испытываемого вещества.

4.1.2. Если исследуется твердое вещество, которое можно измельчить, его надо измельчить и затем развести водой или, при необходимости, подходящим разбавителем, чтобы обеспечить лучшее проникновение через кожу животного. При использовании разбавителя необходимо учесть его влияние при воздействии испытываемого вещества на кожу. Жидкие тестируемые вещества, как правило, не разбавляют.

4.2. Условия проведения

Подопытные животные

4.2.1. Исследования проводятся на взрослых особях крыс, кроликов или морских свинок. Могут быть привлечены и другие виды животных, но их использование требует обоснования.

4.2.2. Для эксперимента необходимы животные массой:

крысы - 200-300 г;

кролики - 2-3 кг;

морские свинки - 350-450 г.

4.2.3. Для каждого уровня дозировки должны быть использованы не менее пяти животных. Все они должны быть одного пола. Исследования не проводятся на рожавших и беременных самках. Испытанию должны подвергнуться животные того пола, который, по имеющейся информации, более чувствителен.

Примечание: В исследованиях острой токсичности с животными более высшего порядка, чем грызуны, целесообразно использование меньшего количества животных. Доза вводимого вещества должна быть тщательно продумана, и не превышать умеренно токсичную. В подобных экспериментах следует избегать введения испытываемого вещества в смертельных дозах.

4.2.4. Животные должны содержаться отдельно. В лабораторной комнате температура должна быть для грызунов, для кроликов, относительная влажность 30-70%, искусственное освещение с последовательностью: 12 часов - свет, 12 часов - темнота.

4.2.5. При кормлении может быть использована обычная лабораторная диета с неограниченным количеством питьевой воды.

Уровень вводимых доз

4.2.6. Дозы должны быть в количестве не менее трех и распределены соответственно, чтобы продуцировать подопытную группу с диапазоном токсических воздействий и летального исхода. Данных должно быть достаточно для построения кривой зависимости смертности животных от дозы вещества и, где возможно, для определения величины .

Исследование предельной (наивысшей) дозы

4.2.7. Исследование предельной (наивысшей) дозы с уровнем не ниже 2 000 мг/кг массы тела может быть проведено в подопытной группе из пяти самцов и пяти самок. Процедуры проведения испытания описаны ниже. В случае гибели вследствие воздействия вещества может понадобиться всестороннее изучение.

Период наблюдения

4.2.8. Период наблюдения должен составлять не менее 14 дней. Между тем, продолжительность периода наблюдения не должна быть жестко фиксированной и зависит от токсических реакций, их интенсивности и длительности периода восстановления; при необходимости период наблюдения может быть увеличен. Несомненную важность имеют время появления и исчезновения признаков токсичности, а также время смерти, особенно если наблюдается тенденция к замедленной смерти.

Процедура

4.2.9. Животные должны содержаться в одиночных клетках. Вещество равномерно наносится на поверхность, составляющую приблизительно 10% от общей поверхности тела животного. При работе с высоко токсичными веществами поверхность покрытия может быть меньше, но вещество должно быть, насколько возможно, равномерно распределено тонким слоем.

4.2.10. Исследуемое вещество должно контактировать с кожей на протяжении 24-часового периода воздействия посредством марлевой повязки, зафиксированной не вызывающей раздражения лентой. Участок тела, через который воздействует испытываемое вещество, на который сверху наложена марлевая повязка, должен быть покрыт способом, позволяющим удерживать испытываемое вещество и не позволяющим животному его проглотить. Можно использовать ограничители движения, чтобы животное не смогло слизнуть вещество, но полная иммобилизация не рекомендуется.

4.2.11. Остаток исследуемого вещества по окончании периода экспозиции должен быть удален при помощи воды или другими методами очищения кожи животного.

4.2.12. Наблюдения должны регистрироваться систематически, а записи вестись по каждому животному в отдельности. Наблюдения необходимо вести часто в течение первого дня исследования. Тщательный клинический осмотр должен проводиться не реже одного раза каждый рабочий день, другие наблюдения - вестись ежедневно с выполнением соответствующих действий, направленных на минимизацию потерь животных для исследования. Среди них - вскрытие или замораживание животных, найденных мертвыми или изолированными, умерщвленными по медицинским показателям или вследствие агонии.

4.2.13. Наблюдения должны включать изменения в состоянии кожи и шерсти, глаз, слизистых оболочек, дыхательной, кровеносной, вегетативной и центральной нервной систем, соматомоторной деятельности и поведении. Внимание должно фокусироваться на явлениях тремора, конвульсий, слюноотделения, диареи, летаргии, сна и комы. Время смерти должно быть зафиксировано максимально точно. Масса тела каждой особи должна измеряться до начала эксперимента, еженедельно, после периода воздействия и на момент гибели. Изменения массы должны калькулироваться и записываться.

Патологическая анатомия.

4.2.14. Все подопытные животные необходимо подвергнуть аутопсии. Патологические изменения каждого животного регистрируются.

Оценка токсичности другого пола.

4.2.15. После завершения полного изучения одного пола группа животных другого пола (в составе не менее пяти) подвергается воздействию вещества с целью установить большую чувствительность этого пола к свойствам вещества. В отдельных случаях может быть рекомендовано использование меньшего количества животных. Если по имеющейся соответствующей информации животные этого пола более чувствительны, можно исключить тестирование вещества на животных другого пола.

5. Данные

5.1. Все данные на каждую подопытную группу должны быть оформлены в виде таблиц, содержащих сведения о количестве животных на начало эксперимента, времени смерти каждого животного, количестве животных, демонстрирующих признаки токсичности, описание токсического действия, результаты вскрытия. Индивидуальная масса тела каждого животного должна быть установлена и зафиксирована незадолго до нанесения тестируемого вещества, затем неделю спустя и после гибели; в случае, если животное выжило и прожило более одного дня, колебания в массе тела должны быть вычислены и зафиксированы. Животные, умерщвленные гуманным способом вследствие острой боли или сложных случаев недомогания, должны быть отмечены как случаи сложной смерти. должна быть установлена известным методом, например, Литчфилда и Вилкоксона, Блисса, Финней, Вейла, Томпсона, Миллера и Тейтнера.

5.2. Оценка данных должна включать в себя сведения, если они имеются, о воздействии испытываемого вещества на животное, объеме и интенсивности аномальных проявлений, включая поведенческие и клинические отклонения, значительные поражения органов, колебания массы тела, смертельный исход и другие токсические эффекты.

6. Отчет

Отчет об исследовании должен содержать, по возможности, следующие данные:

- вид, род, происхождение, условия содержания, питание и пр.;

- условия тестирования (включая метод очищения кожи и вид одежды: закрытой защитной или нет);

- уровень дозировки (с наполнителем (если таковой использовался) и концентратами);

- пол животных, подвергшихся воздействию вещества;

- сведение в таблицу данных о реакции полов и уровень экспозиции (т.е. количество погибших или умерщвленных по время исследования животных, количество животных с симптомами токсичности, количество животных, подвергшихся воздействию вещества);

- время смерти после приема вещества, причины и критерии гуманного умерщвления животных;

- все данные наблюдений;

- величина , установленная по окончании наблюдения для каждого пола (вычисленная установленным методом);

- 95%-й доверительный интервал для (если таковой возможно предусмотреть);

- график и кривая взаимосвязи доза/летальный исход (в рамках метода определения);

- результаты вскрытия;

- все результаты гистопатологического исследования;

- результаты любых испытаний с животными другого пола;

- обсуждение результатов (уделить особое внимание тому, что по вычислении величины может понадобиться прибегнуть к гуманному умерщвлению животных).

7. Интерпретация результатов

7.1. Изучение острой токсичности при накожном поступлении и установление обеспечивает оценку относительной токсичности вещества при накожном пути поступления.

7.2. Экстраполяция на человека результатов изучения острой токсичности при накожном поступлении и величин , установленных на животных, допустима только в ограниченной степени. Результаты изучения острой токсичности при накожном поступлении должны учитываться в совокупности с данными об острой токсичности при других путях воздействия.