Приложение 4. Приборно-инструментальное обеспечение токсикологических исследований воздействия химических веществ и смесей на их основе

Приложение 4

Приборно-инструментальное обеспечение токсикологических исследований воздействия химических веществ и смесей на их основе

1. Область применения

1.1. Требования к приборно-инструментальному обеспечению токсикологических исследований воздействия химических веществ и смесей на их основе разработаны с целью обеспечения качества токсикологических исследований воздействия химических веществ и смесей и на их основе на организм человека.

2. Общие положения

2.1. Оборудование и инструменты по характеристикам и расположению должны соответствовать целям и задачам исследования.

2.2. Оборудование, используемое в исследовании, должно периодически технически обслуживаться, включая регулярный профилактический осмотр, уход, калибровку в соответствии со стандартными операционными процедурами испытательного центра. Все работы должны сопровождаться соответствующими записями в индивидуальном журнале. Калибровку следует проводить в соответствии с национальными или международными стандартами измерения.

2.3. Оборудование до ввода его в эксплуатацию должно быть проверено на предмет установления его соответствия техническим требованиям, действующим в лаборатории, и соответствующим стандартам. Должна быть протестирована его работоспособность на рабочем месте после инсталляции. Данные работы должны сопровождаться соответствующими записями.

2.4. С оборудованием должен работать уполномоченный персонал. Актуализированные инструкции по использованию и обслуживанию оборудования (включая любые соответствующие руководства, предоставленные производителем оборудования) должны быть всегда доступны для использования персоналом лаборатории.

2.5. Оборудование и материалы, используемые в исследовании, не должны влиять на состояние тест-систем.

2.6. Оборудование, используемое при проведении токсикологических исследований воздействия химических веществ и продукции на их основе, подразделяется на монтируемое и немонтируемое.

2.7. К монтируемому оборудованию относятся системы, обеспечивающие качество микроклиматических условий (системы вентиляции и кондиционирования), светильники ультрафиолетового и инфракрасного облучения, лифты, централизованные установки дезинфекционно-моечного оборудования, мусоропроводы и т.д.

2.8. К немонтируемому оборудованию относятся вспомогательные приборы, общелабораторное измерительное оборудование, компьютеризированное аналитическое оборудование.

2.9. Каждый вид оборудования и его программное обеспечение, используемые при проведении испытаний и оказывающие влияние на результат проводимых исследований, должны быть однозначно идентифицированы.

2.10. Оборудование, используемое в исследовании, можно классифицировать следующим образом:

а. Вспомогательные приборы:

- холодильники;

- вортексы;

- центрифуги и др.;

б. Общелабораторное измерительное оборудование:

- весы;

- термометры;

- оборудование для контроля параметров окружающей среды и др.;

в. Компьютеризированное аналитическое оборудование:

- биохимические анализаторы;

- гематологические анализаторы;

- хромато-масс-спектрометры и др.

2.11. Оборудование каждого вида и его программное обеспечение, существенные для проведения испытаний, должны быть зарегистрированы. Регистрационные данные должны включать, следующие сведения:

- идентификацию оборудования каждого вида и его программного обеспечения;

- наименование изготовителя, идентификацию типа, серийный номер или другую уникальную идентификацию;

- результаты проверок соответствия оборудования нормативным документам;

- местонахождение на данный момент, если уместно;

- инструкции изготовителя, при их наличии, или данные о месте их нахождения;

- даты, результаты и копии отчетов и сертификатов всех калибровок, регулировок, критериев приемки и планируемую дату очередной калибровки;

- план обслуживания, при необходимости, и проведенное обслуживание;

- описание любых повреждений, неисправностей, модификаций или ремонта оборудования.

3. Приборно-инструментальное обеспечение

3.1. Оборудование, обеспечивающее постоянные микроклиматические условия помещений.

3.1.1. Комплекс оборудования, обеспечивающий в автоматическом режиме поддержание нормативных показателей газового состава воздуха, температуры, влажности, скорости движения воздуха и др., должно обеспечивать нормируемые параметры микроклимата и воздушной среды помещений.

3.1.2. Эксплуатация (обслуживание) комплекса оборудования кондиционирования осуществляется ответственным лицом организации или другой специализированной организацией.

3.1.3. Проверка эффективности работы, текущие ремонты (при необходимости), а также очистка и дезинфекция комплекса проводится один раз в год или в соответствии с технической документацией.

3.1.4. Проектирование и эксплуатация вентиляционных систем должны исключать перетекание воздушных масс из "грязных" помещений в "чистые".

3.1.5. Данное оборудование располагается в инженерно-технической зоне.

3.2. Оборудование, автоматически обеспечивающее световой режим, должно постоянно поддерживать уровень естественного и искусственного освещения в соответствии с санитарными нормами и правилами. Искусственная освещенность (общая и местная), источник света, тип лампы принимаются в соответствии с действующими нормами. Контроль освещенности осуществляется люксметром.

3.3. Дезинфекционно-моечное и стерилизационное оборудование для паровой, воздушной, ультрафиолетовой, инфракрасной и прочих видов стерилизации:

- автоматические и/или ультразвуковые дезинфекционно-моечные машины;

- паровые дезинфекционные камеры;

- плазменный низкотемпературный стерилизатор;

- бактерицидные облучатели для обеззараживания воздуха в помещениях (настенные, потолочные, переносные);

- проходные автоклавы;

- сухожаровые камеры;

- воздушный ультрафиолетовый шлюз;

- ранцевый опрыскиватель, противогаз;

- утилизаторы медицинских отходов и пр.

3.4. Оборудование, обеспечивающее физико-химические исследования:

- титриметрические исследования (автоматический титратор, вольюмометрический, автоматический титратор кулонометрический и т.п.);

- ВЖЭХ-анализ, ГЖХ, ГХ-МС, ТСХ (хроматографы для различных целей - аналитические, препаративные, газовые, жидкостные и т.п.);

- ИК-спектрометрия (Фурье-спектрометр и т.п.);

- ЯМР-спектроскопия (спектрометр ядерного магнитного резонанса и т.п.).

3.5. Оборудование, обеспечивающее проведение микробиологических (выделение, культивирование, окраска, идентификация микроорганизмов), вирусологических (получение, идентификация, выделение вирусов) и паразитологических (получение, идентификация, выделение паразитов) исследований должно соответствовать требованиям нормативных и методических документов на данный вид деятельности, действующих на территории Российской Федерации и Таможенного союза.

3.6. Оборудование, обеспечивающее содержание лабораторных животных.

3.6.1. Для содержания лабораторных животных используется клеточное оборудование, соответствующее видовым и возрастным особенностям и обеспечивающее требуемые комфортные и санитарно-гигиенические условия содержания животных.

3.6.2. В помещениях для животных не должно находиться никаких предметов, не имеющих отношения к содержанию животных и уходу за ними.

3.6.3. Оборудование и инвентарь должны размещаться таким образом, чтобы не способствовать загрязнению помещений, не затемнять клетки с животными, не нарушать воздухообмен.

3.6.4. Клеточное оборудование включает в себя собственно клетку и стеллажи для их размещения. В комплект одной клетки входят:

- ванночка из полипропилена или поликарбоната;

- крышка из нержавеющей стали с бункером для корма;

- бутылка для поения;

- канюля;

- резиновая пробка;

- держатель для этикетки из нержавеющей стали.

3.6.5. Вспомогательное оборудование и инвентарь:

- стеллажи настенные или передвижные;

- передвижные тележки для транспортирования клеток, бутылок и инвентаря;

- передвижные тележки с бункером для транспортирования кормов и подстилки;

- машина для мытья клеток, бутылок;

- ванна для замачивания грязных клеток, бутылок;

- индивидуальные рассадочные камеры для животных и т.д.

3.6.6. Установка для эвтаназии животных (тележка для баллона с углекислым газом; система шлангов, вентилей и ограничителей потока газа; прозрачные крышки на клетки, баллон с газом) предназначена для безболезненного усыпления лабораторных животных методом ингаляции углекислым газом.

3.6.7. Морозильная камера (-40°С) для временного хранения трупов животных.

3.7. Оборудование для экспозиции изучаемых химических веществ.

- метаболические клетки;

- клетки для индивидуального содержания;

- затравочные камеры;

- зонды для введения вещества и т.д.

3.8. Оборудование для изучения поведенческих реакций:

- "Открытое поле" - установка предназначена для изучения поведения грызунов в новых (стрессогенных) условиях и позволяет оценить: выраженность и динамику отдельных поведенческих элементов; уровень эмоционально-поведенческой реактивности животного ("седацию-ажитацию"); стратегию исследовательского/оборонительного поведения; привыкание (habituation); запоминание обстановочных стимулов; симптомы неврологического дефицита; локомоторную стереотипию, вызванную введением ДА-миметиков;

- "Приподнятый крестообразный лабиринт" - установка предназначена для изучения поведения грызунов в условиях переменной стрессогенности (при свободном выборе комфортных условий) и позволяет оценить: уровень тревожности животного (по предпочтению темноты/света, боязни высоты, выраженности и динамике поведения "выглядывания"); симптомы неврологического дефицита; привыкание (habituation);

- "Экстраполяционное избавление" - установка предназначена для изучения когнитивных функций грызунов в условиях острого стресса и позволяет оценить: индивидуальные различия когнитивного стиля решения задачи (поиска пути избавления из острой стресс-ситуации); становление когнитивных функций в онтогенезе;

- "Т-лабиринт" - установка позволяет исследовать рабочую память грызунов, лежащую в основе поведения чередования рукавов (спонтанного или подкрепленного) и чувствительную к дисфункции септо-гиппокампальной системы;

- "Темно-светлая камера" - установка предназначена для изучения поведения грызунов в условиях переменной стрессогенности (при свободном выборе комфортных условий) и позволяет оценить: предпочтение темноты и света; выраженность и динамику поведения "выглядывания"; привыкание (habituation);

- установка для тестов "Поведение отчаяния" по Porsolt и "Вынужденное плавание". Данные тесты предназначены для выявления соединений с антидепрессантной и психостимулирующей активностью, а также позволяют оценить способность животных к обучению;

- "Веаm-walking" или "Сужающаяся дорожка" - установка предназначена для оценки моторного дефицита главным образом задних конечностей и в меньшей степени передних. Тест широко используется при моделировании различных патологических состояний мозга, связанных с повреждением моторной коры (фокальная ишемия, компрессионная ишемия, ишемия/гипоксия мозга новорожденных крысят);

- "Темная камера с отверстиями" - установка предназначена для изучения поведения грызунов в условиях свободного выбора комфортных условий и позволяет оценить: предпочтение темноты/света, выраженность и динамику поведения выглядывания, принятие решения выхода из камеры. Используется как тест-предиктор индивидуального уровня эмоциональной реактивности (в сочетании с тестом "Открытое поле" и др.), а также может служить источником дополнительной информации относительно анксиогенных/анксиолитических свойств исследуемых соединений;

- "Staircase test" - установка предназначена для изучения моторики передних конечностей у крыс. "Staircase" является высокочувствительным тестом, позволяющим оценить незначительные нарушения в работе самой конечности, а также кисти и пальцев. Тест широко используется для оценки неврологического дефицита у крыс при моделировании различных патологических состояний.

3.9. Оборудование для неинвазивных методов исследования:

- ЭКГ;

- ультразвуковое исследование;

- рентгенография;

- магнитно-резонансная томография (МРТ) и т.д.

3.10. Оборудование для гематологических исследований (автоматический гематологический анализатор, коагулометр, аппарат для электрофореза и т.д.).

3.11. Оборудование для биохимического и иммунологического анализа биологических жидкостей (автоматический биохимический анализатор, спектрофотометр, иммуноферментный анализатор, иммунохимический анализатор, фотометр, иммунохемилюминесцентный анализатор, анализатор иммуногематологический, проточный цитофлюориметр и т.д.).

3.12. Оборудование для проведения цитогенетических исследований.

а. Основное:

- стерильный бокс с предбоксником или ламинарный бокс;

- микроскоп бинокулярный с встроенным осветителем (видимый свет) с набором из 4-5 объективов от 10х до 100х (масляная иммерсия), возможностью анализа изображения в фазовом контрасте и системой фиксации изображения (видеокамера 5-7 МП, фотоаппарат 14 МП), подключенный к компьютеру, снабженному системой анализа изображения;

- микроскоп люминесцентный со встроенным осветителем с набором из 4-5 объективов от 10х до 100х (масляная иммерсия) и системой фиксации изображения (видеокамера 5-7 МП, фотоаппарат 14 МП), подключенный к компьютеру, снабженному системой анализа изображения;

- микроскоп с видеоприставкой для морфометрии, соединенный с компьютером;

- проточный цитометр;

- сортер клеток;

- система для гель-электрофореза одиночных клеток (Comet assay, тест комет) и анализа изображения в этом тесте;

- система для флуоресцентной in situ гибридизации (FISH) хромосом;

- центрифуга низкоскоростная (300-1 500 g) с бакет-ротором без охлаждения для пробирок;

- центрифуга низкоскоростная (300-1 500 g) с бакет-ротором с охлаждением, стаканы 100-500 мл;

- центрифуга низкоскоростная (300-1 500 g) с угловым охлаждением и стаканами 100 мл;

- центрифуга для микропробирок типа Эппендорф;

- термостат суховоздушный 37°С;

б. Вспомогательное:

- персональные компьютеры;

- автоклав для стерилизации лабораторной посуды;

- автоклав для стерилизации растворов;

- облучатели бактерицидные потолочные в зависимости от количества помещений и их площади;

- облучатель бактерицидный переносной (передвижной);

- холодильник для хранения реактивов;

- холодильник-морозильник для хранения реактивов (-18°С);

- холодильник электрический бытовой;

- счетчик-калькулятор для подсчета форменных элементов крови электронный;

- набор автоматических пипеточных дозаторов жидкостей на переменный объем со штативом (5 мкл - 10 мл) с расходными материалами и пр.;

- набор лабораторной посуды;

- фильтры для стерилизации малых объемов жидкостей;

- шкаф для хранения реактивов и пр.

3.13. Оборудование для проведения молекулярно-генетических исследований.

а. Основное:

- ламинарный шкаф (бокс);

- блок для сбора ПЦР-смесей;

- ПЦР-бокс для стерильных работ с рециркулятором;

- автоматическая система для выделения нуклеиновых кислот и программное обеспечение;

- генетический анализатор (секвенатор) и программное обеспечение;

- амплификатор и программное обеспечение;

- система гель-документации и программное обеспечение;

- оборудование для горизонтального и вертикального электрофореза;

- персональные компьютеры;

- ;

- спектрофотометр.

б. Вспомогательное:

- термостат с функциями охлаждения и нагрева в диапазоне от -10 до 100°С для пробирок Эппендорф;

- термошейкер для пробирок Эппендорф;

- автоклав паровой;

- система получения ультрачистой воды;

- бидистиллятор;

- pH-метр в комплекте с комбинированным электродом и стандартами;

- весы аналитические 320 г/0,1 мг;

- мини-центрифуга с функцией охлаждения;

- магнитная мешалка с подогревом;

- холодильник для хранения реактивов;

- холодильник-морозильник для хранения реактивов (-18°С);

- холодильник электрический бытовой;

- источники питания;

- набор автоматических пипеточных дозаторов жидкостей на переменный объем со штативом (10 мкл - 10 мл) и расходные материалы.