Приложение 6.5.2.1. Стандарты соответствия для оценки кожной сенсибилизации в предложенном или модифицированном тесте LLNA

Приложение 6.5.2.1

Стандарты
соответствия для оценки кожной сенсибилизации в предложенном или модифицированном тесте LLNA

1. Введение

1.1. Цель Стандартов Соответствия (СС) состоит в том, чтобы проинформировать пользователей о той основе, на которой новые экспериментальные методы, запатентованные (то есть защищенные авторским правом, имеющие официально зарегистрированную торговую марку, зарегистрированные) и незапатентованные, могут быть определены как имеющие достаточную точность и надежность для специфических целей эксперимента. Данные СС, основанные на ратифицированных и принятых методах испытания, могут использоваться для оценки надежности и точности других аналогичных экспериментальных методов (в разговорной речи именуемых методами "Я тоже"), базирующихся на аналогичных научных принципах и оценивающих или прогнозирующих тот же биологический или токсический эффект.

1.2. До принятия модифицированных методов испытания (то есть предложенных потенциальных усовершенствований к одобренному методу испытания) следует провести оценку эффективности предложенных изменений и степени, в которой эти изменения влияют на другие компоненты процесса валидации. В зависимости от количества и природы предложенных изменений, полученных с использованием данных и соответствующей сопроводительной документации, измененный метод или проходит полный процесс валидации, как все новые тесты, или, если это будет признано возможным, только сокращенную процедуру оценки надежности и правомерности с использованием утвержденных СС.

1.3. Сходные или модифицированные методы тестирования, предложенные для использования в рамках данного документа, должны быть подвергнуты оценке для выявления их надежности и точности с использованием стандартных химических соединений, соответствующих полному диапазону шкалы баллов LLNA. Во избежание необоснованного использования животных настоятельно рекомендуется, чтобы разработчики модели вошли в контакт с OECD до начала валидационного исследования в соответствии со СС и руководством, представленными в данном документе.

1.4. Данные СС основаны на гармонизации документов "Координационных комитетов по утверждению альтернативных методов (CCVAM)" - USA-ICCVAM, EC-ECVAM и Japanese-JaCVAM - для оценки валидности аналогичных или модифицированных вариантов LLNA. СС состоят из описания основных компонентов метода тестирования, компонентов метода тестирования стандартных эталонов (позитивных контролей), списка рекомендованных эталонов и стандартов для оценки степени точности и надежности, которые предлагаемый усовершенствованный метод должен обеспечить или превысить.

2. Основные компоненты метода испытания

2.1. Чтобы гарантировать, что аналогичный или модифицированный метод LLNA является функционально и механистически соответствующим данному методу LLNA и оценивает тот же самый биологический эффект, в протокол метода должны быть включены следующие компоненты:

- тестируемое вещество должно быть нанесено накожно на оба уха мыши;

- пролиферацию лимфоцитов следует оценивать в лимфоузлах, дренирующих участок аппликации тестируемого вещества;

- пролиферацию лимфоцитов следует оценивать в течение фазы индукции кожной сенсибилизации;

- самая высокая доза тестируемого вещества должна быть максимальной концентрации, еще не вызывающей проявлений системной токсичности и/или чрезмерного местного раздражения кожи мышей; для позитивных контролей самая высокая доза должна давать значение ИС не менее 3 (см. предлагаемые эталонные соединения в таблице) и при этом не вызывать симптомов системной токсичности и/или чрезмерного местного раздражения кожи мышей;

- в каждое исследование следует включать параллельно контроль на растворитель и, где предусмотрено, параллельный ПК;

- следует использовать группу, как минимум, из четырех животных на каждую дозу;

- можно отбирать биологический материал как от каждой мыши отдельно, так и объединяя его по группам.

Если нет соответствия по любому из этих критериев, данный СС не может быть использован для валидации аналогичного или модифицированного метода испытания.

3. Минимальный список веществ-эталонов

3.1. Гармонизация СС USA-ICCVAM, EC-ECVAM и Japanes-JaCVAM позволяет создать список из 18 основных веществ-эталонов, которые рекомендовано использовать, и четырех дополнительных опциональных эталонов (веществ, которые давали ложноположительные или ложноотрицательные эффекты в LLNA при сравнении с результатами, полученными на людях и морских свинках (см. МР 406), и тем самым давали равноценную или лучшую результативность, чем LLNA). Критерии для выбора этих веществ нижеследующие:

- в список эталонов включены вещества, неоднократно тестировавшиеся на потенциальную возможность вызывать состояние кожной сенсибилизации в диапазоне эффектов, которые LLNA способен оценить или предсказать;

- все вещества имели точно определенные химические структуры;

- для этих веществ были доступны данные LLNA, полученные в опытах на морских свинках (см. МР 406), и (где возможно) данные, полученные на людях;

- все эти вещества можно было приобрести в виде коммерческих препаратов.

Рекомендованные эталоны перечислены в таблице. Исследования с использованием предложенных эталонов следует проводить с растворителями, перечисленными в таблице. В случае недоступности перечисленных веществ можно использовать другие вещества, удовлетворяющие вышеупомянутым критериям отбора, с соответствующим обоснованием.

4. Определенные стандарты надежности и точности

4.1. Точность аналогичного или модифицированного теста LLNA должна быть не ниже точности исходного метода LLNA, причем сравнение должно проводиться по результатам тестирования полной минимальной базы из 18 эталонных веществ. Новый или модифицированный метод LLNA должен дать правильную классификацию этих эталонов, основанную на заключениях "да/нет". Однако новый или модифицированный метод LLNA может правильно классифицировать не все основные эталоны, которые следует использовать. Если, например, один из слабых сенсибилизаторов был неправильно классифицирован, необходимо представить разумное объяснение неправильной классификации данного эталона и соответствующие дополнительные данные (например, результаты испытаний, давших правильную классификацию других веществ, сходных с неверно классифицированным эталоном по физическим, химическим и сенсибилизирующим свойствам), чтобы показать равноценность сравниваемых методов. При таких обстоятельствах валидация нового или модифицированного метода LLNA должна будет проводиться в каждом конкретном случае заново.

Таблица

Рекомендованные вещества - эталоны для стандартизации соответствия LLNA

N	Вещество*(1)	CAS N	Форма	Раств.*(2)	ЕС3%*(3)	N*(4)	0,5х-2,0х ЕС3	Актуальный диапазон ЕС3	LLNA vs. м/св.	LLNA vs. человек
1	5-хлор-2-метил-4-изотиазолин-3-он (ХМИ)/2-метил-4-изотиазолин-3-он (МИ)*(5)	26172-55-4/ 2682-20-4	Ж	ДМФ	0,009	1	0,0045-0,018	NC	+/+	+/+
2	ДНХБ	97-00-7	С	АОМ	0,049	15	0,025-0,099	0,02-0,094	+/+	+/+
3	4-фенилендиамин	106-50-3	С	АОМ	0,11	6	0,055-0,22	0,07-0,16	+/+	+/+
4	хлорид кобальта	7646-79-9	С	ДМСО	0,6	2	0,3-1,2	0,4-0,8	+/+	+/+
5	изоэйгенол	97-54-1	Ж	АОМ	1,5	47	0,77-3,1	0,5-3,3	+/+	+/+
6	2-меркаптобензотиазол	149-30-4	С	ДМФ	1,7	1	0,85-3,4	NC	+/+	+/+
7	цитраль	5392-40-5	Ж	АОМ	9,2	6	4,6-18,3	5,1-13	+/+	+/+
8	ГКА	101-86-0	Ж	АОМ	9,7	21	4,8-19,5	4,4-14,7	+/+	+/+
9	эйгенол	97-53-0	Ж	АОМ	10,1	11	5,05-20,2	4,9-15	+/+	+/+
10	фенилбензоат	93-99-2	С	АОМ	13,6	3	6,8-27,2	1,2-20	+/+	+/+
11	коричный спирт	104-54-1	С	АОМ	21	1	10,5-42	NC	+/+	+/+
12	имидазолидинилмочевина	39236-46-9	С	ДМФ	24	1	12-48	NC	+/+	+/+
13	метил метакрилат	80-62-6	Ж	АОМ	90	1	45-100	NC	+/+	+/+
14	хлорбензол	108-90-7	Ж	АОМ	25	1	NA	NA	-/-	-/*(6)
15	изопропанол	67-63-0	Ж	АОМ	50	1	NA	NA	-/-	-/+
16	молочная кислота	50-21-5	Ж	ДМСО	25	1	NA	NA	-/-	-/*(6)
17	метил салицилат	119-36-8	Ж	АОМ	20	9	NA	NA	-/-	-/-
18	салициловая кислота	69-72-7	С	АОМ	25	1	NA	NA	-/-	-/-
Опциональные стандарты для демонстрации улучшения характеристик LLNA
19	натриевая соль лау- рилсульфата	151-21-3	С	ДМФ	8,1	5	4,05-16,2	1,5-17,1	+/-	+/-
20	этиленгликоль диметакрилат	97-90-5	Ж	МЭК	28	1	14-56	NC	+/-	+/+
21	ксилол	1330-20-7	Ж	АОМ	95,8	1	47,9-100	NC	+/*(7)	+/-
22	хлорид никеля	7718-54-9	С	ДМСО	5	2	NA	NA	-/+	-/+

Сок