Приложение 2. Отбор, транспортировка и подготовка к исследованию образцов внешней среды

Приложение 2

Отбор, транспортировка и подготовка к исследованию образцов внешней среды

1. Отбор проб

Для исследования пробы воды берут из разнообразных естественных и искусственных водоемов: рек, ручьев, озер, прудов, мелиоративных каналов; сточных вод, термальных источников, а также из систем водоснабжения горячей и холодной водой, водных систем охлаждения, технологических циклов, емкостей для хранения воды, бассейнов и др.

Из одной точки необходимо брать по 2 и более пробы. Воду в количестве 1000 мл отбирают в стерильные бутыли, закрывают пробкой с бумажной прокладкой или резиновой пробкой, закрывают бумажным колпачком и обвязывают шпагатом. При большом количестве образцов во избежание трудностей, связанных с транспортировкой, объем образцов воды может быть уменьшен до 100 мл. Бутыли с водой помещают в клеенчатые или полиэтиленовые мешки и упаковывают в ящик для доставки в лабораторию.

Для исследования берут конденсат и смывы с внутренней поверхности кондиционеров, санитарно-технического и больничного оборудования, водопроводных кранов, головок душа, шлангов замкнутых водных систем охлаждения, емкостей для хранения воды, медицинских и бытовых приборов, связанных с распылением или разбрызгиванием, а также с открытых поверхностей в зданиях или в других местах предполагаемых вспышек или спорадических случаев легионеллеза.

Отбор проб производят с помощью стерильных ватных тампонов. Тампоном, увлажненным стерильным физиологическим раствором, проводят по поверхности и помещают в стерильную пробирку, содержащую 5 мл физиологического раствора. Помимо физиологического раствора для смывов можно использовать воду из анализируемой системы водоснабжения, предварительно профильтрованной через фильтры с диаметром пор 0,45 мкм.

2. Условия хранения и транспортировки

Возбудитель хорошо сохраняется в водной среде. Образцы воды, содержащие возбудитель в концентрации клеток на литр, могут храниться в течение 3 месяцев при температуре 20-25°C. Смывы с поверхности могут храниться при тех же условиях в течение 30 дней. Кратковременные температурные изменения при транспортировке образцов в диапазоне от +4° до 30°C не влияют на сохранность образцов.

Для последующих исследований образцы концентрируют. Образец может быть сконцентрирован непосредственно после отбора проб или после доставки в лабораторию на исследование. Предварительная концентрация упрощает доставку образцов для лабораторных исследований. Концентрированные образцы также можно хранить в течение 30 дней при +4°С.

3. Концентрация образцов

Для концентрации образцов применяют центрифугирование или фильтрацию: образцы предварительно фильтруют через 2-слойную марлю для освобождения от крупных частиц, после чего воду центрифугируют 20 минут при 7000-8000 об./мин. Осадок ресуспендируют в 5 мл стерильного физиологического раствора или в том же объеме анализируемой воды, предварительно профильтрованной через фильтр с диаметром пор 0,45 мкм. Для концентрации смывов и образцов воды объемом менее 20-30 мл может быть использована фильтрация через фильтры диаметром пор 0,22-0,3 мкм. Фильтры хранятся в пробирках с 2-3 мл воды исследуемого образца.

4. Подготовка образца к исследованию

Для инактивации посторонней микрофлоры концентрированный образец прогревают 30 мин при +50°C (или проводят обработку образца 0,1 N раствором KCl-HCl (pH-2,2). После этого исследуемый материал высевают на угольно-дрожжевой агар с антибиотиками в соответствии с методическими рекомендациями МЗ СССР по лабораторной диагностике легионеллеза (Москва, 1987).