Методические рекомендации по проведению бактериологических исследований при пищевых отравлениях (Утв. Начальником Главного управления эпидемиологии и гигиены Министерства здравоохранения РСФСР от 17 августа 1990 г. N 17 РС-14/5735)

Направляем для сведения и использования в работе бактериологических лабораторий методические рекомендации по проведению бактериологических исследований при пищевых отравлениях, разработанные специалистами Красноярской краевой санэпидстанции, прошедшие апробацию в бактериологических лабораториях санэпидстанций г.г. Москвы, Ленинграда, Липецкой, Астраханской, Свердловской, Московской и Ленинградской областей. Настоящие рекомендации, дополненные с учетом высказанных замечаний, одобрены Лабораторным Советом при Главном управлении эпидемиологии и гигиены Минздрава РСФСР 28.05.90 года.

Л.Г. Подунова.

Методические рекомендации по проведению бактериологических исследований при пищевых отравлениях*

Настоящие методические рекомендации разработаны на основании нормативно-технических документов:

1. Инструкция о порядке расследования, учета и проведения лабораторных исследований в учреждениях санитарно-эпидемиологической службы при пищевых отравлениях, утв. МЗ СССР 20 декабря 1973 г. N 1135-73.

2. Методические указания по диагностике заболеваний, вызываемых энтеробактериями, утв. М3 СССР 17 декабря 1984 г. N 04-23/3-84.

3. Письмо ГСЭУ М3 РСФСР по количественному определению стафилококков в пищевых продуктах, N 08 с/б-3-1310 от 14.06.75 г.

4. ГОСТ 10444.7-86 "Продукты пищевые. Методы выявления ботулинических токсинов и С. botulinum".

5. ГОСТ 10444.9-88 "Продукты пищевые. Метод определения С. perfringens".

6. ГОСТ 10444.8-88 "Продукты пищевые. Метод определения B. cereus".

Настоящие методические рекомендации имеют цель при ограниченных возможностях лабораторий выполнить максимальный объем исследований по сокращенной схеме на все потенциально-опасные, известные виды микроорганизмов-возбудителей пищевых отравлений (при наличии методик исследований) качественно или количественно. Для эффективного использования результатов бактериологических исследований при пищевых отравлениях необходимо иметь ввиду:

1. Не следует направлять на бактериологическое исследование продукты и другие материалы, неблагоприятные по своей природе для развития микроорганизмов (продукты, содержащие высокие концентрации сахара, соли, а также крупы, хлеб, сало, при подозрении на ботулизм - продукты, хорошо аэрируемые и т.п.).

2. В сопроводительном документе к материалам, направляемым на бактериологическое исследование, необходимо указать предполагаемый диагноз (этиологию отравления) и цель исследования (на какие группы возбудителей проводить исследование).

3. Материалы от пострадавших забирают и направляют на бактериологическое исследование в соответствии с клиникой заболевания и его патогенезом: так при подозрении на стафилококковую этиологию от пострадавших нецелесообразно забирать кровь на гемокультуру и серологические исследования; при подозрении на ботулизм-нецелесообразно направлять материалы для исследования на патогенные и условно-патогенные энтеробактерии и т.д.;

4. Определение абсолютных патогенов (шигелл, сальмонелл, возбудителей ботулизма и др.) во всех материалах проводят качественно; определение условно-патогенных возбудителей (энтеробактерии, стафилококк, В. cereus, CI. perfringens и др.) в некоторых материалах от больных (фекалии, мазки из зева и носа на стафилококковое носительство) и пищевых продуктах - количественно; в смывах - качественно.

5. Исследование проб воды, пищевых продуктов целесообразно проводить на соответствие ГОСТов, др. НТД (при соблюдении правил хранения и реализации) и параллельно на патогенную и условно-патогенную микрофлору в зависимости от цели исследования, указанной в направлении. Суточные пробы пищевых продуктов исследуют только на патогенную микрофлору.

Отбор проб, их доставку и подготовку к исследованию проводят по Инструкции МЗ СССР ... N 1135-73.

6. При выделении однотипных культур из материалов от больных и из внешней среды проводят их углубленное изучение с целью установления идентичности (определяют серо-, био-, фаго, -колициновары, антибиотико-резистентность, термоустойчивость и другие эпид. маркеры).

7. Обращаем внимание, что предлагаемые схемы рассчитаны на проведение бактериологических исследований. Поэтому необходимость проведения серологических исследований устанавливается в каждом конкретном случае по показаниям.

Настоящие рекомендации включают 2 раздела:

1. Исследование проб пищевых продуктов (приложение N 1).

2. Исследование материалов от пострадавших (приложение N 2).

______________________________

* - Разработаны специалистами Красноярской краевой санэпидстанции и одобрены Лабораторным Советом при Главном управлении эпидемиологии и гигиены Минздрава РСФСР 28.05.90 года.

Начальник Главного управления эпидемиологии и гигиены Министерства здравоохранения РСФСР

Халитов Р.И.

Приложение 1

Исследование пищевых продуктов

Готовят исходное разведение продукта 1:10 (для твёрдых продуктов: 15 г. продукта + 135 мл. 0,1% пептонной воды или физ. раствора, для жидких продуктов: 10мл продукта + 90 мл. 0,1% пептонной воды или физ. раствора) и из него в 9 мл. 0,1% пептонной воды или физ. раствора два дополнительных разведения и .

При целенаправленном исследовании на C. perfringens дополнительно готовят разведения , , .

Посев в среды обогащения проводят в больших объемах: 25 мл/г цельного продукта (для твердых продуктов необходимо предварительно размельчить в ступке) в 100 мл хлористо-магниевой среды обычной концентрации или 25 мл хлористо-магниевой среды двойной концентрации,

5 мл/г - в 25 мл желчного бульона, 30 мл/г - в 120-150 мл среды Китт-Тароцци, и т.д.

Исследование на C. botulinum и С. perfringens проводят по клинико-эпидемиологическим показаниям.

Дальнейший ход исследования и идентификацию на все виды возбудителей проводят в соответствии с вышеперечисленной НТД.

Примерная схема посева пищевых продуктов

Примечание:

1. При отсутствии среды МИС идентификацию энтерококков возможно проводить со среды КА.

2. При отсутствии среды ЖАМПФ желточный агар с маннитом полимиксином и феноловьм красным идентификации В. cereus возможно проводить со среды ЖСА.

Приложение 2

Исследование материалов от пострадавших

1. Кровь засевают в питательную среду (Раппопорт и др.) в соотношении 1:10 (5 мл на 45 мл среды).

Термостатируют 10 дней при 37°С, делая высевы на среду Эндо через 18-24 часа, на 3, 4, 6, 10 сутки. При наличии роста работают по общепринятой методике.

2. Мочу центрифугируют, засевают осадок в 5 мл. хлористо-магниевой среды обычной концентрации (или 10 мл мочи на 10 мл среды двойной концентрации), через 18-20 часов инкубации при 37°С делают высев петлей на ВСА (48 часов при 37°С).

При наличии подозрительного роста идентификацию проводят по общепринятой методике.

3. Желчь засевают в количестве 5 мл на 45-50 мл МПБ (1:10), помещают на 7 суток в термостат при 37°С и делают высевы через 18-20 часов и 3, 5, 7 сутки на среду Эндо. При наличии подозрительного роста работают по общепринятой методике.

4. Промывные воды желудка после нейтрализации (1 мл 10% соды на 10 мл пробы) засевают по 0,1 мл на плотные чашечные питательные среды Эндо (Левина), Плоскирева, ЖСА, КА и в среды обогащения (хлористо-магнивая, желчный бульон, солевой бульон, сахарный бульон) в соотношении 1:5-1:10 (1 мл. на 4-5 мл среды).

Дальнейшее исследование проводят в зависимости от характера роста по общепринятой методике.

5. Рвотные массы после нейтрализации, испражнения.

Готовят на 0,1% пептонной воде или физ. растворе 10-кратные разведения: , для исследования на С. perfringens дополнительно: и далее проводят посевы:

5.1. На шигеллы и сальманеллы:

по 0,1 мл. из на среды Эндо (Левина), Плоскирева, ВСА и в среды обогащения: по 0,3-1,0 мл, из на 2,5-5 мл, хлористо-магниевой среды (селенитовой).

5.2. На S. aureus: по 0,1 мл. из и на ЖСА.

5.3. На В. cereus: по 0,1 мл. из и на желточный агар с маннитом, полимиксином и феноловым красным (ЖАМПФ), при отсутствии на ЖСА.

5.4. На энтерококки:

по 0,1 мл. из и на МИС, при отсутствии - на КА.

5.5. На условно-патогенные энтеробактерии: по 0,1 мл. из и на Эндо.

5.6. На С. perfringens по 1 мл из в пробирки с 8-9 мл. среды Вильсон-Блера.

5.7. На С. botulinum

по 3-5 мл из в 4 флакона (пробирки) с 30-50 мл среды Китт-Тароцци (при отсутствии среды возможно применение среды для контроля стерильности).

Примечание: посевы на Cl. perfringens и Cl. botulinum проводят только по клинико-эпидемиологическим показаниям, о чем должна быть сделана запись в направлении.

Дальнейший ход исследования и идентификацию на все виды возбудителей проводят по общепринятой методике.

Примерная схема посева рвотных масс и испражнений