Межгосударственный стандарт ГОСТ ISO 10273-2013 "Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Горизонтальный метод обнаружения условно-патогенной бактерии Yersinia enterocolitica" (введен в действие приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 17 марта 2014 г. N 159-ст)

Межгосударственный стандарт ГОСТ ISO 10273-2013
"Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Горизонтальный метод обнаружения условно-патогенной бактерии Yersinia enterocolitica"
(введен в действие приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 17 марта 2014 г. N 159-ст)

Microbiology of food and animal feeding stuffs. Horizontal method for the detection of presumptive pathogenic Yersinia enterocolitica

Дата введения - 1 июля 2015 г.

Введен впервые

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 Подготовлен Государственным научным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом консервной и овощесушильной промышленности Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИКОП Россельхозакадемии)

2 Внесен Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 Принят Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 27 декабря 2013 г. N 63-П)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97	Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97	Сокращенное наименование национального органа по стандартизации
Армения	AM	Минэкономики Республики Армения
Беларусь	BY	Госстандарт Республики Беларусь
Казахстан	KZ	Госстандарт Республики Казахстан
Киргизия	KG	Кыргызстандарт
Молдова	MD	Молдова-Стандарт
Россия	RU	Росстандарт
Узбекистан	UZ	Узстандарт

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 17 марта 2014 г. N 159-ст межгосударственный стандарт ГОСТ ISO 10273-2013 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2015 г.

5 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 10273:2003 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal method for the detection of presumptive pathogenic Yersinia enterocolitica (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Горизонтальный метод выявления условно-патогенной бактерии Yersinia enterocolitica).

Международный стандарт разработан подкомитетом ISO/TC 34/SC 9 "Микробиология" Технического комитета по стандартизации ISO/TC 34 "Пищевые продукты" Международной организации по стандартизации (ISO).

Перевод с английского языка (en).

Официальный экземпляр международного стандарта, на основе которого подготовлен настоящий межгосударственный стандарт, имеется в Федеральном агентстве по техническому регулированию и метрологии Российской Федерации.

Сведения о соответствии межгосударственных стандартов ссылочным международным стандартам приведены в дополнительном приложении ДА.

Степень соответствия - идентичная (IDT)

6 Введен впервые

Предупреждение - Использование настоящего стандарта может быть связано с применением опасных материалов, процедур и оборудования. Пользователь настоящего стандарта несет ответственность за установление соответствующих условий безопасности и за применение регламентированных ограничений.

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты и корма для животных и устанавливает горизонтальный метод обнаружения Yersinia enterocolitica, которые являются условно патогенными для человека.

Метод применим также для выявления данных микроорганизмов в объектах окружающей среды в сфере пищевого производства и оборота пищевых продуктов.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ISO 6887-1:1999 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination - Part 1: General rules for the preparation of the initial suspension and decimal dilutions (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Приготовление проб для испытаний, исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований. Часть 1. Общие правила приготовления исходной суспензии и десятичных разведений)

ISO 6887-2 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination - Part 2: Specific rules for the preparation of meat and meat products (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Подготовка проб, исходной суспензии и десятикратных разведений для микробиологических исследований. Часть 2. Специальные правила подготовки мяса и мясных продуктов)

ISO 6887-3 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination - Part 3: Specific rules for the preparation offish and fishery products (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Приготовление проб для испытаний, исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований. Часть 3. Специальные правила для приготовления рыбы и рыбных продуктов)

ISO 6887-4 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination - Part 4: Specific rules for the preparation of products other than milk and milk products, meat and meat products, and fish and fishery products (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Приготовление проб для испытаний, исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований. Часть 4. Специальные правила для приготовления продуктов, кроме молока и молочных продуктов, мяса и мясных продуктов и рыбы и рыбопродуктов)

ISO 7218 Microbiology of food and animal feeding stuffs - General requirements and guidance for microbiological examinations (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям)

ISO 8261 Milk and milk products. General guidance for the preparation of tests samples, initial suspensions and decimal dilutions for microbiological examination (Молоко и молочные продукты - Общие правила приготовления проб для испытаний, исходных суспензий и десятикратных разведений для микробиологических исследований)

ISO/TS 11133-1 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Guidelines on preparation and production of culture media - Part 1: General guidelines on quality assurance for the preparation of culture media in the laboratory (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Правила приготовления и производства питательных сред. Часть 1. Общие правила по обеспечению качества приготовления питательных сред в лаборатории)

3 Термины и определения

В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:

3.1 условно-патогенные Yersinia enterocolitica: Психротрофные бактерии, образующие характерные колонии на плотной селективной среде и обладающие биохимическими свойствами, относящимися к критериям патогенности, описание которых приведено в настоящем стандарте.

3.2 обнаружение условно-патогенных Yersinia enterocolitica: Определение присутствия или отсутствия данных бактерий в определенной массе или объеме продукта после проведения испытания в соответствии с настоящим стандартом.

4 Сущность метода

4.1 Общие положения

Метод обнаружения условно-патогенных бактерий Yersinia enterocolitica состоит из трех последовательных этапов.

4.2 Обогащение в селективной жидкой среде

Пробой продукта инокулируют две среды обогащения:

- бульон, содержащий пептон, сорбит и желчные соли (PSB), и

- бульон, содержащий , тикарциллин и хлорат калия (ITC).

ITC бульон инкубируют при температуре (251)°С в течении 48 ч, a PSB бульон в течение 3 - 5 дней.

Примечание - Обогащение в ITC бульоне предназначено [1] для изоляции Yersinia enterocolitica биовара 4/серовара О:3, но не для биовара 1В серовара О:8, биовара 2/серовара О:9 [2], или биовара 2 серовара О:5,27. Для изоляции Yersinia enterocolitica биовара 2/серовара О:9 необходимо использовать среду ITC бульон без хлората и с содержанием хлорида магния исходной концентрацией 80% и малахитового зеленого [3].

4.3 Пересев на чашки для идентификации

Культуры, полученные по 4.2, пересевают на следующие две селективные агаризованные среды:

- агар с цефсулодином, иргазаном и новобиоцином (CIN) [7];

- сальмонелла/шигелла агар, с дезоксихолатом натрия и хлоридом кальция (SSDC).

Посевы инкубируют при 30°С, просматривают в зависимости от среды через 24 ч и, если необходимо, после 48 ч при просмотре отмечают наличие характерных колоний Yersinia enterocolitica.

4.4 Подтверждение

Выделенные колонии, предположительно относящиеся к бактериям Yersinia enterocolitica, проверяют с помощью подтверждающих биохимических тестов, тестов для биотипирования, тестов являющихся критериями патогенности, и возможных серологических тестов.

5 Реактивы и среды

Общие правила микробиологических исследований - по ISO 7218, специальные требования к качеству и приготовлению сред - по ISO/TS 11133-1, практические руководства по эксплуатационным испытаниям питательных сред - по ISO/TS 11133-2.

В связи с большим количеством питательных сред и реагентов и для удобства пользования их состав представлен в приложении В, которое содержит описание приготовления и хранения.

5.1 Среда для обогащения

5.1.1 Бульон, содержащий пептон, сорбит и желчные соли (PSB)

См. В.1.

5.1.2 Бульон, содержащий , тикарциллин и хлорат калия (ITC)

См. В.2.

5.2 Агаризованные среды для пересева на чашки

5.2.1 Агар с цефсулодином, иргазаном и новобиоцином (CIN)

См. В.3.

5.2.2 Сальмонелла/Шигелла агар, с дезоксихолатом натрия и хлоридом кальция (SSDC)

См. В.4.

5.2.3 Питательный агар

См. В.5.

5.3 Среды и реактивы для идентификации

5.3.1 Среда уреаза/индол

См. В.6.

5.3.2 Реактивы для определения индола

См. В.7.

5.3.3 Агар Клиглера

См. В.8.

5.3.4 Реактивы для определения оксидазы

См. В.9.

5.3.5.1 Лизин декарбоксилазная среда

См. В.10.

5.3.5.2 Орнитин декарбоксилазная среда

См. В.11.

5.3.6 Среда для ферментации углеводов (сахароза, рамноза, тригалоза и ксилоза)

См. В.12.

5.3.7 Цитратная среда Симмонса

См. В.13.

5.3.8 Твин-эстеразная среда

См. В.14.

5.3.9 Агар с желчью и эскулином

См. В.15.

5.3.10 Агар с казеином и соей

См. В.16.

5.3.11 Казеин соевый агар, для определения пиразинамидазы

5.3.12 Железо(II) аммоний цитрат раствор, для определения пиразинамидазы

См. В.18.

5.3.13 Казеин-соевый агар, с магнием и оксалатом.

См. В.19.

5.4 Солевой раствор

См. В.20.

5.5 Гидроксид калия в солевом растворе

См. В.21.

5.6 Настой телятины, бульон

См. В.22.

5.7 Стерильный глицерин

См. В.23.

6 Аппаратура и материалы

Примечание - Инструменты одноразового применения - приемлемая альтернатива стеклянной посуде многократного пользования, если они имеют подходящие технические характеристики.

Оборудование обычной микробиологической лаборатории (см. ISO 7218) и, в частности, следующее:

6.1 Аппаратура для стерилизации (печь) или влажной стерилизации (автоклав).

6.2 Термостаты, способные поддерживать температуру (221)°С, (251)°С, (301)°С и (371)°С.

6.3 Сушильные шкафы или печи, с конвективной вентиляцией, способные поддерживать температуру от (371)°С до (501)°С.

6.4 Водяные бани или термостаты, способные поддерживать температуру (221)°С, (241)°С и (251)°С, предпочтительнее с перемешивающим оборудованием.

6.5 Водяная баня, поддерживающая температуру от 44°С до 47°С.

6.6 Пробирки, размерами 18180 мм, 9180 мм и 1250 мм.

6.7 Бутылки и/или колбы подходящей вместимости.

6.8 Чашки Петри, сделанные из стекла или пластика, диаметром от 90 до 100 мм.

6.9 Мерные пипетки номинального объема 10  и 1 , градуированные, с ценой деления 0,1 .

6.10 Пипеторы или другие микробиологические системы защиты пипеток.

6.11 Петля диаметром около 3 мм, из провода из платины/иридия и/или никеля/хрома, стеклянные стержни и пастеровские пипетки.

Могут использоваться стерильные пластиковые одноразовые петли или иглы.

Петля из никель/хрома не подходит для оксидазного теста (см. 9.4.3.5).

6.12 рН-метр, с точностью измерения до 0,1 единицы рН при температуре 25°С.

6.13 Свет, настроенный для косого освещения.

6.14 Увеличительное стекло или стереомикроскоп.

6.15 Перистальтический блендер.

7 Отбор проб

Важно, чтобы для испытания в лабораторию поступила представительная проба, не поврежденная и не измененная в ходе транспортирования или хранения.

Замораживание проб перед проведением анализа не рекомендуется, несмотря на то, что бактерии рода Yersinia выявляются в замороженных продуктах.

Отбор проб не является частью метода, установленного в настоящем стандарте. В случае отсутствия конкретного стандарта на отбор проб продукта рекомендуется, чтобы заинтересованные стороны достигли согласия по процедуре отбора проб.

8 Приготовление испытуемой пробы

Пробу для испытания готовят в соответствии с определенной частью ISO 6887 или стандартом на конкретный продукт. В случае отсутствия конкретного стандарта рекомендуется, чтобы заинтересованные стороны достигли согласия по данному вопросу.

10 Протокол испытаний

Протокол испытаний должен содержать:

a) всю информацию, необходимую для полной идентификации пробы;

b) используемый метод приготовления проб, если он известен;

c) используемый метод испытаний со ссылкой на настоящий стандарт;

d) использованную температуру инкубирования;

e) все рабочие детали, не установленные в настоящем стандарте или дополнительные, вместе с деталями любых инцидентов, которые могли бы повлиять на результат(ы) испытаний;

f) полученный(е) результат(ы) испытания или, если были произведены повторные испытания, окончательно полученные результаты.

Протокол испытаний должен также указывать, проводились или нет дальнейшие испытания вне лаборатории и если они проводились, то каковы результаты.

* В зависимости от желирующих свойств.

** Дигидрохлорид может быть замещен оксалатом, но срок годности приготовленного раствора короче.

Библиография

[1]	WAUTERS, G., GOOSSENS, V., JANSSENS, M. and VANDEPITTE, J. New enrichment method for isolation of pathogenic Yersinia enterocolitica serogroup 0:3 from pork. Appl. Environ. Microbiol., 54, 1988, pp. 851 - 854
[2]	DE BOER, E. Isolation of Yersinia enterocolitica from foods. Int. J. Food Microbiol., 17, 1992, pp. 75 - 84
[3]	DE ZUTTER, L, LE MORT, L, JANSSENS, M. and WAUTERS, G. Short-comings of irgasan ticarcillin chlorate broth for the enrichment of Yersinia enterocolitica biovar 2, serovar 9 from meat. Int. J. Food. Microbiol., 23, 1994, pp. 231 - 237
[4]	SCHIEMANN, D.A. Synthesis of selective agar medium for Yersinia enterocolitica. Can. J. Microbiol., 25, 1979, pp. 1298 - 1304
[5]	AULISIO, C.C.G., MEHLMAN, I.J. and SANDERS, A.C. Alkali method for rapid recovery of Yersinia enterocolitica and Yersinia pseudotuberculosis from foods. Appl. Environ. Microbiol., 39, 1980, pp. 135 - 140
[6]	ARCHER, J.R., SCHELL, R.F., PENNELL, D.R. and WICK, P.D. Identification of Yersinia spp. with the API 20E system. J. Clin. Microbiol., 25, 1987, pp. 2398 - 2399
[7]	SHARMA, N.K., DOYLE, P.W., GERBASI, S.A. and JESSOP, J.H. Identification of Yersinia species by the API 20E. J. Clin. Microbiol., 28, 1990, pp. 1443 - 1444
[8]	FARMER III, J.J., CARTER, G.R., MILLER, V.L., FALKOW, S. and WACHSMUTH, I.K. Pyrazinamidase, CR-MOX Agar, Salicin Fermentation - Esculin Hydrolysis, and D-Xylose fermentation for identifying pathogenic serotypes of Yersinia enterocolitica. J. Clin. Microbiol., 30, 1992, pp. 2589 - 2594
[9]	Food and Drug Administration. Protocol in FDA. Yersinia enterocolitica and Yersinia pseudotuberculosis. In: Bacteriological Analytical Manual, 8th edn., Washington, DC, 1998