Приложение D (справочное). Измерение скорости оседания эритроцитов по референтному методу Вестергрена

Приложение D
(справочное)

Измерение скорости оседания эритроцитов по референтному методу Вестергрена

D.1 Принцип

Референтный метод предназначен для того, чтобы представить методику для верификации надежности любых модификаций теста. Он выполняется с кровью, содержащей этилендиаминтетрауксусную кислоту, без разведения цитратом или солевым раствором, с использованием капиллярных трубок Вестергрена, как описано выше, и с применением экспериментально полученной формулы для коррекции.

Для теста используют колонку длиной 200 мм, наполненную кровью с антикоагулянтом, оставляют колонку на 60 мин, без встряхивания, при температуре (203)°С или (272)°С [см. 8.2, перечисление а)] и определяют высоту осадка.

D.2 Реагенты

D.2.1 Двухкалиевая этилендиаминтетрауксусная кислота (), (1,500,25) мг/мл крови.

D.2.2 Раствор тринатрийцитрата (), (0,110,01) моль/л.

Растворить 32,8 г в 1 л дистиллированной или деионизированной воды.

D.2.3 Изотонический солевой раствор NaCI, 9 г до 1 л .

Профильтровать через стерильную мембрану с максимальным диаметром пор 0,22 мкм в стерильный контейнер и хранить при 4°С. Перед употреблением визуально оценить отсутствие частиц или плесени.

D.3 Аппарат

D.3.1 Штатив, который должен прочно удерживать капиллярную трубку в вертикальном положении и сохранять капиллярную трубку, наполненной кровью до нулевой отметки.

D.4 Условия испытания

Тест не следует выполнять под прямым солнечным светом, возле источника тепла или на сквозняке.

Капиллярная трубка не должна подвергаться вибрации во время испытания.

Испытание должно быть проведено в условиях постоянной температуры (203)°С или (272)°С.

Примечание - Выполнение теста при температуре вне указанных пределов и при колебаниях температуры во время теста может вызвать значительные расхождения результатов.

В случае если испытание проводится при температуре, отличающейся от (203)°С, должен быть определен нормальный уровень скорости оседания эритроцитов.

D.5 Методика

Предупреждение - Весьма существенно, чтобы наполнение пипетки не проводилось ртом, во избежание опасности инфицирования, наполнение должно выполняться механически.

Последовательность процедур методики.

a) Выбрать 10 образцов крови с антикоагулянтом ЭДТА, если возможно со значениями СОЭ в широких пределах от 15 мм до 150 мм. Отрегулировать гематокрит в части каждого образца, если необходимо, до примерно 0,32 л/л путем центрифугирования образцов, удаления соответствующего количества плазмы или эритроцитов и затем ресуспендирования клеток при осторожном смешивании.

b) Непосредственно перед наполнением капиллярной трубки Вестергрена смешать образец путем, по меньшей мере, восьмикратного полного переворачивания.

Измерить СОЭ в каждом образце (неразведенном) с помощью референтного метода Вестергрена в следующем порядке:

1) Начать измерение скорости оседания эритроцитов в пределах 2 ч после пункции вены.

2) Наполнить капиллярную трубку Вестергрена с нижнего конца до нулевой отметки кровью, подготовленной таким образом, как описано в перечислении а), хорошо перемешанной непосредственно перед использованием.

3) Поместить в штатив капиллярную трубку Вестергрена, наполненную раствором крови.

4) Оставить капиллярную трубку Вестергрена в неподвижном положении на (601) мин и затем немедленно прочесть на шкале верхний уровень слоя эритроцитов.

Выразить результаты в миллиметрах за первый час.

c) Отрегулировать результат отсчета на отсутствие разведения следующим образом.

Откорректированная СОЭ (мм за 1 ч) = (СОЭ в неразведенной крови 0,85) - 12.

d) В то же время добавить 1 объем раствора тринатриевого цитрата или изотонического солевого раствора к 4 объемам проб от тех же образцов или к 4 объемам свежей крови от тех же субъектов и провести определение СОЭ методом, который должен быть верифицирован в соответствии со специфицированными требованиями.

e) Любой новый метод можно рассматривать как удовлетворительный, если результаты, полученные двумя методами, являются идентичными или если имеется постоянная разница, которая может представлять собой коррекционный фактор, или позволяет рассчитать коррекционные отношения для различных уровней СОЭ. Однако, поскольку СОЭ может испытывать влияние многочисленных неконтролируемых переменных, референтный метод не может быть использован для регулирования результатов измерений, полученных с помощью нового метода. Так, в случае если новый метод дает несравнимые результаты, необходимо установить нормальный диапазон, специфичный для данного метода.