Приложение А (справочное). Среда RPMI-1640

Приложение А
(справочное)

Среда RPMI-1640

А.1 Общие положения

Среда RPMI-1640 с буферностью 0,165 моль/л MOPS. 1 л: 10,4 г порошка среды RPMI-1640 (с глютамином и феноловым красным, без бикарбоната).

34,53 г MOPS (3-[N-Морфолино]пропансульфоновая кислота (MOPS) буферный раствор.

Среду в виде порошка растворяют в 900 мл дистиллированной воды. Добавляют MOPS (конечная концентрация 0,165 моль/л) и перемешивают до растворения. В процессе перемешивания устанавливают рН 7,0 при температуре 25°С с использованием 1 моль/л гидроксида натрия. Добавляя воду, доводят объем среды до 1 л. Фильтруют, стерилизуют и хранят при температуре 4°С до момента использования.

Таблица А.1 - Состав среды RPMI-1640 (с глютамином и феноловым красным, но без бикарбоната)

Компонент	г/мл воды
L-аргинин (свободное основание)	0,200
L-аспарагин (безводный)	0,050
L-аспарагиновая кислота	0,020
L-цистин2HCI	0,065 2
L-глутаминовая кислота	0,020
L-глутамин	0,300
Глицин	0,010
L-гистидин (свободное основание)	0,015
L-гидроксипролин	0,020
L-изолейцин	0,050
L-лейцин	0,050
L-лизинHCI	0,040
L-метионин	0,015
L-фенилаланин	0,015
L-пролин	0,020
L-серин	0,030
L-треонин	0,020
L-триптофан	0,005
L-тирозин2Na	0,028 83
L-валин	0,020
L-тирозин2Na	0,028 83
L-валин	0,020
Биотин	0,0002
D-пантотеновая кислота	0,000 25
Холинхлорид	0,003
Фолиевая кислота	0,001
Мио-инозитол	0,035
Ниацинамид	0,001
ПАБК (парааминобензойная кислота)	0,001
Пиридоксин HCI	0,001
Рибофлавин	0,0002
Тиамин HCI	0,001
Витамин В12	0,000005
Нитрат кальция	0,100
Хлористый кальций	0,400
Сульфат магния (безводный)	0,048 84
Хлористый натрий	6,000
Фосфат натрия, двузамещенный (безводный)	0,800
D-глюкоза (CLSI метод - визуальное чтение)	2,000
D-глюкоза (EUCAST метод - спектрофотометрическое чтение)	2,000
Глютатион, восстановленный	0,001

Таблица А.2 - Компоненты RPMI-1640 2% глюкозы

Компонент	Одинарная концентрация	Двойная концентрация
Дистиллированная вода	900 мл	900 мл
RPMI-1640(a)	10,4 г	20,8 г
MOPS(b)	34,53 г	89,06 г
Глюкоза	18 г	36 г
(а) См. таблицу А.1. (b) 3-[N-Морфолино]пропансульфоновая кислота.

А.2 Ссылки к приложению А

a) Clinical and Laboratory Standards Institute (Институт Клинических Лабораторных Стандартов) (2008). Reference Method for Broth Dilution Antifungal Susceptibility Testing of Yeasts: 3rd Informational Supplement. M27-S3. Wayne. PA (Референтный метод для испытаний противогрибковой чувствительности дрожжей с применением метода разведения в бульоне: 3-е информационное приложение. M27-S3. Вэйн. Пенсильвания.)

b) European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing (Европейский Комитет no вопросам исследования чувствительности к антимикробным препаратам) (2007). EUCAST Definitive Document EDef 7.1: Method for the determination of broth dilution MICs of antifungal agents for fermentative yeasts. Clinl Microbiol Infect; 14: pp. 398 - 405, 2008.

(EUCAST дефинитивный документ EDef 7.1: Метод определения МПК противогрибковых препаратов для ферментативных дрожжей с применением разведения в бульоне. Клиническая Микробиология и Инфекции; 14: с. 398 - 405, 2008.)