Межгосударственный стандарт ГОСТ 30627.1-98 "Продукты молочные для детского питания. Метод измерения массовой доли витамина А (ретинола)" (введен в действие постановлением Государственного комитета Российской Федерации по стандартизации и метрологии от 28 апреля 1999 г. N 142)

Infant milk products. Method for determination of mass part of vitamin A (Retinoli)

Дата введения - 1 мая 2000 г.

Введен впервые

Предисловие

1 Разработан МТК 186 и Научно-исследовательским институтом детского питания

Внесен Госстандартом России

2 Принят Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 12 ноября 1998 г. N 14)

За принятие проголосовали:

Наименование государства	Наименование национального органа по стандартизации
Азербайджанская Республика	Азгосстандарт
Республика Беларусь	Госстандарт Беларуси
Грузия	Грузстандарт
Киргизская Республика	Киргизстандарт
Республика Молдова	Молдова-Стандарт
Российская Федерация	Госстандарт России
Республика Таджикистан	Таджикгосстандарт
Туркменистан	Главная Государственная инспекция Туркменистана
Республика Узбекистан	Узгосстандарт
Украина	Госстандарт Украины

3 Постановлением Государственного комитета Российской Федерации по стандартизации и метрологии от 28 апреля 1999 г. N 142 межгосударственный стандарт ГОСТ 30627.1-98 введен в действие непосредственно в качестве государственного стандарта Российской Федерации с 1 мая 2000 г.

4 Введен впервые

5 Переиздание. Июнь 2009 г.

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на молочные продукты для детского питания и устанавливает колориметрический метод измерения массовой доли витамина А (ретинола).

Метод основан на реакции витамина А, выделенного из продукта при щелочном гидролизе, с треххлористой сурьмой (реакция Карра-Прайса) и колориметрическом измерении интенсивности окрашивания образовавшегося соединения.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 334-73 Бумага масштабно-координатная. Технические условия

ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 3145-84 Часы механические с сигнальным устройством. Общие технические условия

ГОСТ 4166-76 Реактивы. Натрий сернокислый. Технические условия

ГОСТ 4212-76 Реактивы. Приготовление растворов для колориметрического и нефелометрического анализа

ГОСТ 4919.1-77 Реактивы и особо чистые вещества. Методы приготовления растворов индикаторов

ГОСТ 4919.2-77 Реактивы и особо чистые вещества. Методы приготовления буферных растворов

ГОСТ 5815-77 Реактивы. Ангидрид уксусный. Технические условия

ГОСТ 5845-79 Реактивы. Калий-натрий виннокислый 4-водный. Технические условия

ГОСТ 5962-67* Спирт этиловый ректификованный. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 8981-78 Эфиры этиловый и нормальный бутиловый уксусной кислоты технические. Технические условия

ГОСТ 9147-80 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия

ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 20015-88 Хлороформ. Технические условия

ГОСТ 24104-88** Весы лабораторные общего назначения и образцовые. Общие технические условия

ГОСТ 24363-80 Реактивы. Калия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 26809-86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу

ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть I. Общие требования.

3 Методы отбора проб

Отбор проб и подготовка их к измерению по ГОСТ 26809.

4 Аппаратура, материалы и реактивы

Баня водяная с обогревом, позволяющая поддерживать температуру от 0 до 100°С с погрешностью 2°С,

Бумага масштабно-координатная (миллиметровая) по ГОСТ 334.

Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.

Весы лабораторные общего назначения 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104.

Весы лабораторные общего назначения 4-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 500 г по ГОСТ 24104.

Воронки стеклянные лабораторные типа В по ГОСТ 25336.

Воронки делительные номинальной вместимостью 250, 500  по ГОСТ 25336.

Испаритель ротационный [1].

Колбы типа К исполнения 1 номинальной вместимостью 100, 250, 500 и 1000  по ГОСТ 25336.

Колбы мерные исполнения 1 2-го класса точности номинальной вместимостью 100, 200, 250, 500  по ГОСТ 1770.

Колориметр фотоэлектрический диапазоном измерения от 200 до 2000 нм, диапазоном измерения коэффициента пропускания от 100 до 1% [2].

Пипетки исполнений 4, 6, 7 2-го класса точности номинальной вместимостью 1, 5, 10  по ГОСТ 29227.

Стакан фарфоровый номинальной вместимостью 500  по ГОСТ 9147.

Секундомер [3].

Термометр жидкостный (нертутный) диапазоном измерения от 0 до 100°С ценой деления шкалы 1°С по ГОСТ 28498.

Холодильник обратимый со шлифами и водяным охлаждением по ГОСТ 25336.

Фотометр фотоэлектрический диапазоном измерения от 220 до 1100 нм, диапазоном измерения коэффициента пропускания от 100 до 1% [4].

Цилиндры исполнения 1 вместимостью 50, 100, 250, 500  по ГОСТ 1770.

Часы 2-го класса по ГОСТ 3145.

Шкаф сушильный лабораторный, обеспечивающий поддержание заданного температурного режима от 50 до 200°С с погрешностью 2°С.

Эксикатор исполнения 2 по ГОСТ 25336.

Ангидрид уксусный ч.д.а. по ГОСТ 5815.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Калий-натрий виннокислый ч.д.а. по ГОСТ 5845.

Калия гидроокись х.ч. по ГОСТ 24363.

Кислота аскорбиновая (витамин С) [5].

Натрий сернокислый безводный х.ч. по ГОСТ 4166.

Ретинола пальмитат (витамина А пальмитат) [6] или масляный раствор массовой концентрации ретинола пальмитата 550 г/ (55%-ный раствор пальмитата в масле) [7], или ретинола ацетата (витамин А ацетат) [8], или масляный раствор массовой концентрации ретинола ацетата 34,4; 68,8; 86,0 г/ (3,44; 6,88 или 8,60% раствор ретинола ацетата в масле) [9].

Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962.

Сурьма треххлористая х.ч. [10].

Хлороформ х.ч. по ГОСТ 20015.

Фенолфталеин ч.д.а. [11].

Циклогексан [12].

Эфир петролейный, перегнанный при (5010)°С, не содержащий перекисей [13].

Эфир этиловый по ГОСТ 8981.

Допускается применение других средств измерения с метрологическими характеристиками и оборудования с техническими характеристиками не хуже, а также реактивов и материалов по качеству не ниже вышеуказанных.

Хранение растворов по ГОСТ 4212.

Хранение реактивов и особо чистых веществ по ГОСТ 4919.1 и ГОСТ 4919.2.

5 Условия выполнения измерения

Измерение должно проводиться при красном или затемненном свете в помещении, в связи с разрушением витамина А под воздействием ультрафиолетовых лучей.

Треххлористая сурьма при попадании на кожу вызывает ожоги. Место поражения промывают ацетоном, затем водой.

Работу с хлороформом, уксусным ангидридом, диэтиловым и петролейным эфирами необходимо проводить в вытяжном шкафу и в хорошо вентилируемом помещении.

Посуду после раствора треххлористой сурьмы и кюветы после измерений нужно промывать водным раствором калия-натрия виннокислого массовой концентрации 0,1 г/.

6 Подготовка к выполнению измерения

6.1 Приготовление раствора треххлористой сурьмы (реактив Карра-Прайса)

Взвешивают (60,00,4) г треххлористой сурьмы на весах 4-го класса точности в конической колбе вместимостью 500 , в которую предварительно отмерено 300  хлороформа, и растворяют при подогревании на водяной бане (402)°С, периодически встряхивая. Раствор охлаждают до (205)°С, добавляют 6 - 9  уксусного ангидрида, колбу закрывают и оставляют на 14 - 18 ч для отстаивания. Полученный прозрачный раствор осторожно сливают в колбу из темного стекла с плотно закрывающейся пробкой. Срок хранения реактива - не более 40 сут при (205)°С.

6.2 Приготовление водного раствора гидроокиси калия массовой концентрации 0,5 г/

Взвешивают (125,00,4) г гидроокиси калия на весах 4-го класса точности, растворяют в 100 - 150  дистиллированной воды в фарфоровом стакане, охлаждают до (205)°С, фильтруют в мерную колбу вместимостью 250 , доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают.

6.3 Приготовление спиртового раствора фенолфталеина массовой концентрации 10 мг/

(1,000,01) г фенолфталеина, взвешенного на весах 4-го класса точности, растворяют в 70  этилового спирта в мерной колбе вместимостью 100 , добавляют 30  дистиллированной воды и перемешивают.

6.4 Обезвоживание сернокислого натрия

Сернокислый натрий высушивают в сушильном шкафу при (15010)°С 8 - 12 ч. Хранят в эксикаторе.

6.5 Приготовление раствора калия-натрия виннокислого массовой концентрации 0,1 г/

(10,00,4) г калия-натрия виннокислого (сегнетова соль), взвешенного на весах 4-го класса точности, растворяют в 40 - 60  дистиллированной воды в мерной колбе вместимостью 100 , доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают.

6.6 Проверка препарата витамина А

Взвешивают (0,1000,002) г препарата на весах 2-го класса точности, растворяют в абсолютном спирте в мерной колбе вместимостью 100 , доводят объем раствора до метки тем же спиртом и перемешивают. Отбирают 2  полученного раствора при использовании раствора массовой концентрации ретинола ацетата в масле 86,0 г/, 2,5  - при использовании раствора массовой концентрации ретинола ацетата в масле 68,8 г/, 5  - при использовании раствора массовой концентрации ретинола ацетата в масле 34,4 г/, 0,3  - при использовании раствора массовой концентрации ретинола пальмитата в масле 550 г/ и разводят в мерной колбе вместимостью 50 , доводят до метки тем же спиртом, получая конечный раствор массовой концентрации ретинола ацетата или ретинола пальмитата 3 мкг/ (8 - 10 МЕ/).

Измеряют оптическую плотность полученного раствора на фотометре при длине волны 326 нм в кювете с толщиной слоя 1 .

В качестве контрольного раствора применяют абсолютный спирт.

Массовую долю витамина А (ретинола ацетата или ретинола пальмитата) в препарате m, , вычисляют по формуле

,

(1)

где 0,01 - массовая концентрация витамина А для 1%-ного раствора ретинола ацетата или ретинола пальмитата в абсолютном спирте, г/;

D - оптическая плотность анализируемого раствора;

- объем раствора второго разведения, ;

100 - объем раствора первого разведения, взятый для приготовления раствора второго разведения, ;

- масса навески препарата, г;

Е - удельный показатель поглощения при длине волны 326 нм, который для 100%-ного раствора ретинола ацетата в абсолютном спирте равен 1550, а для 100%-ного раствора ретинола пальмината в абсолютном спирте равен 975.

V - объем раствора, взятый для второго разведения, ;

Вычисления проводят до второго десятичного знака и округляют результат до первого десятичного знака.

Примечание - Определение может быть проведено с использованием циклогексана вместо абсолютного спирта. В этом случае готовят раствор препарата в циклогексане массовой концентрации ретинола ацетата 3 мкг/ и измеряют оптическую плотность этого раствора при длине волны 327,5 нм. В данном случае Е = 1515.

6.7 Построение калибровочного графика

Взвешивают (0,1000,002) г препарата витамина А - ацетата или пальмитата на весах 2-го класса точности в мерной колбе вместимостью 100 , растворяют в хлороформе, доводят хлороформом до метки и перемешивают.

Массовую концентрацию витамина А в растворе , МЕ/, вычисляют по формулам:

,

(2)

,

(3)

где - массовая доля витамина А (ретинол ацетата или ретинол пальмитата) в препарате, %;

- масса навески препарата, г;

2907000 - активность 1 г витамина А (ретинол ацетата) с массовой долей 100% в абсолютном спирте, ME;

1807000 - активность 1 г витамина А (ретинол пальмитата) с массовой долей 100% в абсолютном спирте, ME;

100 - объем хлороформенного раствора препарата витамина А, .

Вычисления проводят до второго десятичного знака и округляют результат до первого десятичного знака.

Для построения калибровочного графика из полученного раствора витамина А рассчитанной массовой концентрации последовательно готовят разведения массовой концентрации 5 - 20 МЕ/ с интервалом в 5 МЕ/.

Из каждого разведения отбирают пипеткой номинальной вместимостью 1,0  по 0,4  раствора, вносят в кювету толщиной слоя 1 см, помещают кювету в кюветодержатель фотометра или колориметра, добавляют 4  раствора треххлористой сурьмы и быстро (не более 5 с) измеряют оптическую плотность при длине волны 620 нм (красный светофильтр), устанавливая в параллельный световой поток такую же кювету, наполненную хлороформом.

Для построения калибровочного графика по оси ординат откладывают полученные значения оптической плотности, а по оси абсцисс - соответствующие им массовые концентрации витамина А в МЕ/. Длина осей графика должна быть не менее 200 мм. При смене раствора треххлористой сурьмы построение калибровочного графика повторяют, используя при этом свежеприготовленный раствор витамина А в хлороформе.

6.8 Щелочной гидролиз продукта (омыление)

Отобранную для анализа пробу жидких продуктов прогревают при (371)°С 30 - 40 мин и перемешивают для равномерного распределения жира в продукте.

Навеску сухого продукта на гидролиз берут с учетом массовой доли витамина А в продукте.

Массовая доля витамина А,	Навеска сухого продукта, г
0,5 - 1,5	6,000,01
1,5 - 3,0	4,000,01
3,0 - 5,0	3,000,01

Навеска жидкого продукта - (15,000,01) г.

Навеску продукта помещают в круглодонную колбу вместимостью 250 , добавляют 20  дистиллированной воды (для сухих продуктов), перемешивают встряхиванием до полного растворения, добавляют (0,100,03) г аскорбиновой кислоты, взвешенной на весах 4-го класса точности, приливают 40  этилового ректификованного спирта и, перемешивая, вносят 5,0 - 7,0  водного раствора массовой концентрации гидроокиси калия 0,5 г/.

Колбу соединяют с водяным обратным холодильником и выдерживают в кипящей водяной бане (302) мин.

6.9 Экстракция

По окончании омыления содержимое колбы охлаждают до (205)°С, и количественно переносят в делительную воронку вместимостью 500 . Колбу ополаскивают 50  дистиллированной воды, воду сливают в ту же делительную воронку.

Признаком полного омыления служит то, что при добавлении воды к смеси муть не образуется. При образовании мути процесс омыления повторяют, при этом увеличивают объем, щелочи до 10  и время омыления до (352) мин.

Неомыляемые вещества экстрагируют петролейным или диэтиловым эфиром три раза по 50 . После чего нижний (водный) слой отбрасывают.

6.10 Промывка

Объединенный эфирный экстракт переносят в делительную воронку вместимостью 500  и отмывают от щелочи до нейтральной реакции по фенолфталеину, расходуя при этом 500 - 700  дистиллированной воды.

Промытую эфирную вытяжку фильтруют в сухую круглодонную колбу со шлифом через слой безводного сернокислого натрия (20 - 30 г), не допуская заполнения воронки выше уровня этого слоя. Фильтр промывают эфиром объемом не менее 15 .

6.11 Отгонка растворителя

Эфир отгоняют на ротационном испарителе под вакуумом при температуре водяной бани (не более 30°С - для диэтилового эфира и не более 50°С - для петролейного эфира).

Неомыляемый остаток на стенках колбы немедленно растворяют в хлороформе. При расчетной массовой доле витамина А в продукте 0,5 - 1,5  остаток растворяют в 2  хлороформа, 1,5 - 5  - в 3  хлороформа. Закрыв колбу пробкой, смывают осадок со стенок колбы.

7 Проведение измерения

Измерение проводят при длине волны 620 нм (красный светофильтр), используя в качестве контрольного раствора хлороформ.

Пипеткой вместимостью 1  вносят 0,4  хлороформенного раствора испытуемой пробы в кювету толщиной слоя 1 , помещают кювету в кюветодержатель фотометра, добавляют 4,0  раствора треххлористой сурьмы и быстро (не более 5 с) измеряют оптическую плотность. При наличии витамина проба окрашивается в голубой цвет. Окраска быстро исчезает и раствор становится прозрачным.

Помутнение раствора свидетельствует о попадании воды с испытуемым раствором или с раствором сурьмы. В этом случае следует проверить раствор треххлористой сурьмы и при необходимости приготовить свежий. Анализ повторить.

8 Обработка результатов измерения

Массовую долю витамина А (ретинола) X, , вычисляют по формуле

,

(4)

где С - активность витамина А анализируемого раствора продукта, установленная по калибровочному графику, МЕ/;

V - объем раствора неомыляемых веществ в хлороформе, ;

0,303 - коэффициент пересчета витамина А из ME в мкг;

- масса навески продукта, г.

За окончательный результат измерения принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных измерений. Вычисления проводят до второго десятичного знака и округляют до первого десятичного знака.

Относительная погрешность измерения массовой доли витамина А - 20% при доверительной вероятности Р = 0,95.

Расхождение между результатами двух параллельных измерений не должно превышать 10% среднеарифметического значения результатов измерений.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать 20% среднеарифметического значения результатов измерений.

_____________________________

* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51652-2000.

** С 1 июля 2002 г. действует ГОСТ 24104-2001.