Приложение А (справочное). Рекомендуемые методы анализа

Приложение А
(справочное)

Рекомендуемые методы анализа

А.1 Приготовление образцов

Рекомендуются правила, установленные в ISO 6887-5 [3].

А.2 Методы для подсчета молочнокислых бактерий в заквасочных культурах

А.2.1 Подсчет подвидов Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus

Рекомендуется метод агара MRS (бульон Мана-Рогоза-Шарпа), установленный в ISO 7889/IDF 117 [7].

А.2.2 Подсчет Lactobacillus acidophilus

Рекомендуется метод агара MRS с клиндамицином и ципрофлоксацином, установленный в ISO 20128/IDF 192 [15].

А.2.3 Подсчет Enterococcus faecium, педиококков и лактобацилл

Рекомендуется метод агара MRS (бульон Мана-Рогоза-Шарпа), установленный в ISO 7889/IDF 117 [7].

рН среды должен быть между 6,0 и 6,4. Инкубацию следует проводить в анаэробных условиях при (371)°С в течение 72 ч.

А.2.4 Подсчет лактококков и Streptococcus thermophilus

Рекомендуется метод агара М-17, установленный в ISO 7889/IDF 117 [7].

А.2.4.1 рН для агара М-17

рН для агара М-17 (после стерилизации) должен быть 7,2 () для лактококков и рН 6,8 () для Strep. thermophilus.

А.2.4.2 Процедура выращивания бактерий на пластине

Смешивают разведения с расплавленной средой, охлажденной до температуры от 44°С до 47°С. После затвердевания переворачивают чашки Петри и инкубируют для выращивания лактококков аэробно при (301)°С в течение 72 ч и выращивания Strep. thermophilus аэробно при (371)°С в течение 48 ч.

В многовидовых заквасочных культурах, состоящих из Strep. thermophilus и лактококков, аэробная инкубация при (451)°С в течение 48 ч в используется для выращивания Strep. thermophilus и аэробная инкубация при (201)°С в течение 5 дней в для выращивания лактококков.

А.2.4.3 Считывание чашек Петри

После инкубации все колонии следует подсчитать. Если заквасочная культура является многовидовым типом, используют дифференцированное исследование (например, выращивание при различных температурах), чтобы установить, являются ли колонии лактококками или Strep. thermophilus.

А.2.5 Подсчет молочнокислых бактерий цитратной ферментации

Рекомендуется метод Nickels-Leesment, установленный в ISO 17792/IDF 180 [10].

А.2.6 Подсчет видов Leuconostoc spp.

Рекомендуется метод Nickels-Leesment плюс ванкомицин, установленный в ISO 17792/IDF 180 [10].

А.3 Методы для подсчета видов пропионовокислых бактерий Propionibacterium spp. в заквасочных культурах

Рекомендуется модифицированная среда дрожжевого экстракта и лактата, описанная в [20].

А.4 Методы для подсчета видов бифидобактерий Bifidobacterium spp. в заквасочных культурах

Рекомендуется метод с использованием агаровой среды TOS, содержащей мупироцин, установленный в ISO 29981/IDF 220 [17].

А.5 Методы для обнаружения и подсчета загрязнителей

Обращается внимание, что при использовании международных стандартов, установленных в этом разделе, заквасочные культуры могут понижать рН до уровня, ингибирующего загрязнения (целевые организмы), и поэтому может возникнуть необходимость в их нейтрализации. Это рассматривается как часть валидации методов для соответствующих продуктов.

А.5.1 Подсчет не молочнокислых бактерий

Рекомендуется метод, установленный в ISO 13559/IDF 153 [9].

А.5.2 Подсчет дрожжей и плесневых грибов

Рекомендуются методы, установленные в ISO 6611/IDF 94 [1], ISO 21527-1 [11] и ISO 21527-2 [12].

Примечание - Возможно, что ISO 21527-1 [11] и ISO 21527-2 [12] заменят ISO 6611/IDF 94 [1].

А.5.3 Подсчет энтеробактерий

Рекомендуются методы, установленные в ISO 21528-1 [13] и ISO 21528-2 [14].

А.5.4 Подсчет коагулазоположительных стафилококков

Рекомендуются методы, установленные в ISO 6888-1 [4], ISO 6888-2 [5] и ISO 6888-3 [6].

А.5.5 Обнаружение видов сальмонеллы Salmonella spp.

Рекомендуется метод, установленный в ISO 6785/IDF 93 [2].

Для обнаружения сальмонеллы в матрицах с молочнокислыми бактериями и бифидобактериями часто бывает необходимо модифицировать состав предварительно обогащенного бульона для гарантии, что органические кислоты, продуцируемые заквасочными бактериями, и сопутствующее уменьшение рН не будут подавлять Salmonella spp. Требуемая модификация зависит от вида присутствующих молочнокислых бактерий и также от их качества.

Следующие руководящие указания выполнены на основе исследования работы нескольких заквасочных культур. В зависимости от штамма и количества может быть необходима корректировка этих указаний:

а) Для матриц, содержащих вплоть до КОЕ/г молочнокислых бактерий или бифидобактерий: использовать буферную пептонную воду (BPW), в которую добавлен ванкомицин (10 ). Применяется стерилизация фильтрацией, но она не годится для молочнокислых бактерий и бифидобактерий, устойчивых к ванкомицину.

б) Для матриц, содержащих вплоть до КОЕ/г молочнокислых бактерий или бифидобактерий: использовать BPW двойной концентрации с добавлением ванкомицина (10 ), малахитового зеленого (40 ) и молока (10 ). Вместо BPW двойной концентрации можно также использовать BPW, в которой удвоена только буферная концентрация фосфата и которая соизмерима со стандартной BPW.

в) Для матриц, содержащих вплоть до КОЕ/г молочнокислых бактерий или бифидобактерий: использовать BPW двойной концентрации с добавлением ванкомицина (10 ), малахитового зеленого (40 ) и молока (10 ) (см. примечание). Использовать более высокий коэффициент разбавления для гарантии, что максимальный уровень молочнокислых бактерий и бифидобактерий в предварительно обогащенном бульоне не превысит непосредственно после добавления пробы к этому бульону.

Примечание - Добавление молока необходимо только для матриц, не содержащих молока. Добавление необходимо только для уменьшения токсических свойств малахитового зеленого на Salmonella.

А.5.6 Обнаружение Listeria monocytogenes

Рекомендуется метод, установленный в ISO 11290-1 [8].

Для патогенных испытаний разбавляют 1 г образца, используя 25 г подходящего стерильного разбавителя. Смесь тщательно перемешивают и добавляют 225 г бульонной питательной среды подходящей концентрации для получения общей массы 250 г. Бульон должен иметь правильную концентрацию селективных агентов.