Приложение. Условия применения биотехнологических методов искусственного осеменения племенных коров и телок

Приложение

Условия
применения биотехнологических методов искусственного осеменения племенных коров и телок

I. Общие положения

1.1. В целях формирования высокопродуктивного племенного поголовья крупного рогатого скота, повышения племенной ценности племенных животных при разведении племенного крупного рогатого скота организациями по племенному животноводству применяются биотехнологические методы искусственного осеменения племенных коров и телок (далее, соответственно, - коровы, телки).

1.2. Искусственному осеменению подлежат только клинически здоровые коровы и телки. Противопоказаниями к их осеменению являются:

незавершенная инволюция матки;

патология яичников;

воспалительные процессы в половых путях, характеризующиеся отклонениями в консистенции слизи, наличием в слизи хлопьев и прожилок гноя.

II. Определение времени искусственного осеменения коров и телок

2.1. При определении времени искусственного осеменения коров и телок учитываются стадии полового цикла - течка, общее возбуждение, половая охота и овуляция.

2.2. Признаки половой охоты и времени искусственного осеменения коров и телок определяются в соответствии с приложением N 1 к настоящим условиям применения биотехнологических методов искусственного осеменения племенных коров и телок (далее - Условия).

2.3. Выявление у коров и телок половой охоты проводится оператором по искусственному осеменению не менее 3 раз в сутки: в утренние и дневные часы - при активных прогулках или пастьбе, в вечерние часы - во время доения и ухода за животными (на каждое наблюдение должно быть выделено не менее 15 минут).

2.4. Основные способы выявления половой охоты у коров и телок определены в соответствии с приложением N 2 к Условиям.

III. Хранение, оттаивание и оценка качества глубокозамороженной спермы

3.1. Глубокозамороженная сперма должна храниться в сосудах Дьюара в жидком азоте при температуре - 196°С. Контейнеры со спермой обязательно должны быть погружены в жидкий азот. Хранение спермы в парах азота недопустимо.

3.2. Использование канистр с решетчатым дном допускается при наличии специальных пластиковых стаканов-вкладышей.

3.3. Глубокозамороженная сперма должна храниться в металлических либо пластиковых контейнерах.

3.4. Объем жидкого азота в сосуде Дьюара должен составлять не менее 1/3 объема сосуда. Уровень азота в сосуде Дьюара определяют с помощью мерной линейки.

3.5. Повторное замораживание спермы после ее оттаивания не допускается.

3.6. Оттаивание глубокозамороженной спермы и оценка ее качества проводятся в соответствии с нижеприведенной последовательностью действий оператора по искусственному осеменению:

надеть чистую спецодежду;

вымыть стол и руки;

снять чехол с микроскопа;

протереть и подготовить микроскоп к работе;

отрегулировать освещение, подключить нагревательный столик, разместить на нем предметные и покровные стекла;

подготовить водяную баню с температурой +38-40°С (контроль температуры осуществляется с помощью термометра);

на чистый стол поставить тампонницу с тампонами, пропитанными 70% спиртом*;

на край стола положить перчатки, канцелярские скрепки, пипетки, ампулы, салфетки и другие инструменты для искусственного осеменения, необходимые согласно применяемой технологии искусственного осеменения;

достать пинцетом 1-й тампон, обработать пальцы рук и рабочую (свободную) часть стола, тампон выбросить;

достать пинцетом 2-й тампон, обработать подставку, установить ее на рабочую часть стола, тампон выбросить;

взять 3-й тампон и обработать инструменты для искусственного осеменения и ампулу или флакон с 0,9% раствором цитрата натрия (изотон), тампон выбросить;

обработанные инструменты для искусственного осеменения разместить на подставке;

вскрыть ампулу или флакон с 0,9% раствором цитрата натрия (изотон) и поместить в водяную баню или на нагревательный электростолик для разогрева на 3 минуты (кроме работ с облицованными гранулами).

При оттаивании спермы в соломинках:

взять 4-й тампон и обработать край пакета с одноразовым инструментом для искусственного осеменения, тампон выбросить;

угол пакета надрезать стерильными ножницами и выдвинуть чехол на 1/3 длины;

надеть защитные очки и перчатки;

открыть сосуд Дьюара, быстро (не более 5 секунд) охладить бранши стерильного пинцета (корнцанга) в жидком азоте и подтянуть контейнер с соломинками к верхней трети горловины сосуда;

извлечь стерильным предварительно охлажденным в азоте пинцетом или корнцангом одну соломинку;

удалить колебательными движениями остатки азота (не более 5 секунд) и немедленно погрузить соломинку в водяную баню;

закрыть и опустить контейнер с оставшимся соломинками в сосуд Дьюара;

закрыть сосуд Дьюара;

медленно круговыми движениями перемещать погруженную в воду соломинку, держа ее неохлажденным пинцетом за запаянный кончик соломинки (соломинку, укупоренную стеклянными шариками, - за любой кончик). Оттаивание спермы следует проводить в течение 10 секунд при температуре воды +38°С;

вынуть из воды соломинку и осушить ее стерильной салфеткой;

взять инструмент для искусственного осеменения в одну руку, а соломинку с оттаянной спермой в другую;

проверить, чтобы воздушный пузырек находился у запаянного кончика соломинки (у соломинки, укупоренной стеклянными шариками, - у любого кончика); при необходимости соломинку встряхнуть;

оттянуть поршень инструмента для искусственного осеменения на 90-120 мм (в зависимости от длины соломинки) и вставить соломинку со спермой (укупорочным пыжом или шариком к поршню инструмента для искусственного осеменения) до упора;

отрезать стерильными ножницами выступающий конец соломинки на расстоянии 7 мм строго перпендикулярно через воздушный пузырек;

надеть на подготовленный инструмент для искусственного осеменения защитный чехол и надежно зафиксировать его на инструменте для искусственного осеменения;

закрепить зажимом (канцелярской скрепкой) надрезанный край пакета.

При оттаивании спермы в необлицованных гранулах:

взять 4-й тампон и обработать край пакета с одноразовыми пипетками (катетерами), тампон выбросить;

надрезать угол пакета стерильными ножницами или проколоть его концом пипетки (катетера);

выдвинуть пипетку (катетер) на 1-3 длины, соединить ее при помощи муфты со стерильным инструментом для искусственного осеменения (или с полиэтиленовой ампулой);

извлечь собранный инструмент для искусственного осеменения из пакета и разместить на подставке. Открытый угол пакета закрепить зажимом (канцелярской скрепкой);

надеть защитные очки и перчатки;

открыть сосуд Дьюара, быстро (не более 5 секунд) охладить бранши стерильного пинцета (корнцанга) в жидком азоте и подтянуть контейнер с гранулами к верхней трети горловины сосуда;

извлечь стерильным, предварительно охлажденным в азоте пинцетом или корнцангом гранулу и опустить ее в подготовленную ампулу или флакон с 1 мл 2,9% раствора цитрата натрия (изотон);

закрыть и опустить контейнер с оставшимися гранулами в сосуд Дьюара;

закрыть сосуд Дьюара;

оттаивать гранулу при температуре +40°С в течение 8-10 секунд до тонкого ледяного стерженька;

осторожными круговыми движениями флакона перемешать сперму, поставить флакон на стол на салфетку;

набрать сперму в инструмент для искусственного осеменения.

При оттаивании спермы в облицованных гранулах:

взять 4-й тампон и обработать край пакета с одноразовым инструментом для искусственного осеменения, тампон выбросить;

вскрыть угол пакета;

надеть защитные очки и перчатки;

открыть сосуд Дьюара, быстро (не более 5 секунд) охладить бранши стерильного пинцета (корнцанга) в жидком азоте и подтянуть контейнер с облицованными гранулами к верхней трети горловины сосуда;

облицованную гранулу быстро извлечь из сосуда Дьюара стерильным, предварительно охлажденным пинцетом с широкими браншами или корнцангом и поместить ее в водяную баню при температуре +38°С;

оттаивать в течение 8-10 секунд;

осушить гранулу стерильной салфеткой и проверить ее на герметичность путем легкого сжатия между двумя пальцами руки. Негерметичные гранулы не использовать;

подготовленную гранулу заправить в инструмент для искусственного осеменения;

проколоть облицованную гранулу перед искусственным осеменением стерильной иглой.

3.7. Недопустимо оттаивать одновременно две и более доз.

3.8. С момента оттаивания до введения спермы в половые органы животного должно пройти не более 15 минут.

3.9. Оценка качества спермы проводится при температуре +38°С на нагревательном столике под микроскопом, соблюдая последовательность действий оператора по искусственному осеменению:

на предварительно подогретое предметное стекло из инструмента для искусственного осеменения нанести каплю спермы. К капле спермы из соломинки добавить стеклянной палочкой каплю 2,9% цитрата натрия (изотон), смешать, накрыть подогретым покровным стеклом (при оценке качества спермы в необлицованных и облицованных гранулах капля 2,9% цитрата натрия (изотон) не добавляется);

подвижность сперматозоидов определить при помощи микроскопа (с увеличением в 120-200 раз) по 10-балльной шкале в нескольких полях зрения.

Для искусственного осеменения коров и телок используется сперма с оценкой не менее 4 баллов, то есть 4 из 10 сперматозоидов должны иметь прямолинейно-поступательное движение. Другие виды движения сперматозоидов (манежное, колебательное) при оценке качества спермы по балльной системе не учитываются. От высокоценных быков-производителей и улучшателей, а также от быков, происходящих от родителей, признанных улучшателями, допускается к использованию сперма с оценкой не менее 3 баллов.

IV. Технология искусственного осеменения коров и телок

4.1. Искусственное осеменение коров и телок при привязном содержании, проводится в стойлах, при беспривязном содержании - в специально оборудованных станках.

4.2. Перед искусственным осеменением коров и телок от фекальных масс освобождается прямая кишка, тщательно обмываются теплой водой корень хвоста и наружные половые органы, затем орошаются теплым раствором фурацилина и насухо вытираются бумажными полотенцами. После проведения данных мероприятий оператором по искусственному осеменению руки моются и дезинфицируются 70 % спиртом или раствором фурацилина. Во время проведения туалета и обследования вульвы дополнительно используются латексные перчатки.

4.3. При переносе инструмента для искусственного осеменения к месту искусственного осеменения на него надевается санитарная рубашка, либо он помещается в перчатку для искусственного осеменения. В холодное время года используется термочехол.

4.4. Искусственное осеменение коров и телок проводится следующими методами: ректоцервикальный, маноцервикальный**, визоцервикальный.

4.5. При ректоцервикальном методе искусственного осеменения сперма при помощи стерильных инструментов для осеменения вводится в шейку матки через влагалище с фиксацией шейки матки через прямую кишку, соблюдая последовательность действий оператора по искусственному осеменению:

надеть полиэтиленовую перчатку, смазать поверхность перчатки вазелином (гелем), ввести руку вращательными движениями в прямую кишку и провести легкий массаж матки, нажимая введенной в прямую кишку рукой на верхний свод преддверия влагалища, приоткрыть половые губы и, не касаясь их концом инструмента для искусственного осеменения, ввести его на 10-15 см под углом 20°-30°, одновременно указательным и средним пальцем руки стягивая санитарную рубашку с инструмента для искусственного осеменения, и только затем продвинуть инструмент для искусственного осеменения горизонтально к шейке матки;

зафиксировать каудальную часть шейки матки одним из трех способов: кистью руки; между указательным и средним пальцами; ладонью, прижав шейку матки к лонным костям, если двумя предыдущими способами зафиксировать шейку матки не удается (во избежание травмирования прямой кишки фиксация шейки матки в период напряжения стенки прямой кишки не допустима);

фиксируя рукой шейку матки, продвинуть ее несколько вперед, расправляя складки во влагалище, переводя инструмент для искусственного осеменения в горизонтальное положение и также продвигая его вперед;

контролируя отверстие канала шейки матки большим пальцем или мизинцем (в зависимости от способа фиксации), ввести инструмент для искусственного осеменения в канал;

захватить шейку матки всей ладонью, приподнять над дном таза и осторожными движениями вправо, влево, вверх, вниз надвинуть ее на инструмент для искусственного осеменения, контролируя пальцами положение, продвинуть его в шейку матки на глубину 6-8 см до выхода в тело матки;

медленно надавить на поршень, вытолкнуть сперму, одновременно слегка отодвигая назад кончик инструмента для искусственного осеменения, равномерно распределяя сперму по каналу шейки матки;

осторожно извлечь инструмент для искусственного осеменения из влагалища, при использовании ампулы не разжимать ее до момента извлечения инструмента для искусственного осеменения из шейки матки;

сделать легкий массаж шейки матки и вывести руку из прямой кишки;

утилизировать использованный одноразовый инструмент для искусственного осеменения и перчатку;

после искусственного осеменения животных необходимо выдержать в станке 1-2 часа.

4.6. При маноцервикальном методе искусственного осеменения сперма вводится в шейку матки рукой через влагалище при помощи стерильного инструмента для искусственного осеменения, соблюдая последовательность действий оператора по искусственному осеменению:

надеть полиэтиленовую перчатку, смочить ее 0,9% раствором хлорида натрия (физиологическим раствором) или 1% раствором бикарбоната натрия (содовым раствором);

осторожно ввести руку во влагалище коровы и определить степень раскрытия шейки матки, сделать массаж шейки матки;

вынув наполовину кисть руки из влагалища, вложить в нее другой рукой подготовленный инструмент для искусственного осеменения, ввести кисть руки до шейки матки и под контролем указательного пальца продвинуть катетер в канал шейки матки на глубину 1,5-2 см;

массируя шейку матки кончиками пальцев, ампулу подталкивать ладонью до тех пор, пока катетер полностью (на 6-7 см) не войдет в канал шейки матки;

приподнять ампулу на 2-3 см вверх и выдавить из нее сперму большим и указательным пальцами начиная с верхнего угла донышка, перемещая давление к шейке ампулы;

после полного введения семени, извлечь катетер из канала шейки матки не разжимая ампулу и, оставив инструмент для искусственного осеменения на дне влагалища, дополнительно помассировать шейку матку в течение 1-2 минут;

извлечь руку с инструментом для искусственного осеменения из влагалища;

утилизировать одноразовый инструмент для искусственного осеменения и перчатку.

4.7. При визоцервикальном способе искусственного осеменения сперма вводится в канал шейки матки с использованием влагалищного зеркала, соблюдая последовательность действий оператора по искусственному осеменению:

перед искусственным осеменением влагалищное зеркало подогреть до температуры 38-40°С, осветитель тщательно протереть тампоном, пропитанным 96% спиртом, оросить осветитель и влагалищное зеркало непосредственно перед искусственным осеменением теплым (38-40°С) 0,9% раствором хлорида натрия (физиологическим раствором);

надеть полиэтиленовую перчатку;

раскрыть половые губы, держа влагалищное зеркало с осветителем ручками в сторону, ввести его во влагалище до упора. Повернуть влагалищное зеркало ручками вниз и осторожно раскрыть ветви, отыскать шейку матки и ввести в ее канал инструмент для искусственного осеменения на глубину 4-6 см.

4.7.1. При визоцервикальном методе искусственного осеменения коров и телок можно использовать любой инструмент для искусственного осеменения, кроме катетера для маноцервикального способа, соблюдая последовательность действий оператора по искусственному осеменению:

медленно ввести сперму и извлечь инструмент для искусственного осеменения;

осторожно повернув влагалищное зеркало ручками в стороны, с не полностью сомкнутыми ветвями, извлечь его из влагалища;

утилизировать одноразовый инструмент для искусственного осеменения и перчатку.

Влагалищное зеркало после осеменения каждой коровы и телки обмывается теплой кипяченой водой, моется теплым 2-3% раствором бикарбоната натрия (содовым раствором) и затем обеззараживается кипячением или фламбированием.

4.8. Для искусственного осеменения коров и телок могут использоваться зеркала различных размеров.

V. Подготовка инструментов для искусственного осеменения, материалов, растворов и дезинфекция сосудов Дьюара

5.1. Инструменты для искусственного осеменения и материалы следует стерилизовать одним из следующих способов: кипячение, сухой жар, фламбирование (обжигание некоптящим пламенем), автоклавирование, обработка химическими средствами, облучение ультрафиолетовыми лучами.

Кипячением стерилизуются стеклянные и металлические инструменты для искусственного осеменения. Для этого тщательно промытые инструменты для искусственного осеменения при необходимости разбираются, помещаются в стерилизатор, заливаются на 2/3 объема дистиллированной водой, закрываются крышкой, доводятся до кипения и кипятятся в течение 20 минут, а потом остужаются, не снимая крышки. Инструменты для искусственного осеменения извлекаются стерильным пинцетом. В них вставляются поршни, инструменты для искусственного осеменения заворачиваются в стерильные салфетки. Остатки воды с инструментов для искусственного осеменения удаляются стерильными салфетками. Влагалищные зеркала стерилизуются отдельно от посуды и иных инструментов для искусственного осеменения.

Сухим жаром стерилизуются стеклянные инструменты для искусственного осеменения, вата и марля. Стерилизация проводится в сушильном шкафу при температуре +160°С в течение 1 часа 30 минут или при +180°С в течение часа. Срок стерилизации начинает течь с момента, когда температура в шкафу достигает вышеуказанных значений. Перед началом стерилизации инструменты для искусственного осеменения, вата или марлевые салфетки обворачиваются пергаментной бумагой или фольгой. Чистые сухие колбы, флаконы накрываются фольгой или пергаментной бумагой, которые закрепляются нитками. Окончив стерилизацию, сушильный шкаф выключается, но открывается только после остывания до +50...+60°С.

Фламбирование применяется с целью стерилизации металлических инструментов для искусственного осеменения, но только в том случае, когда отсутствует возможность простерилизовать их другими способами. Для обжигания можно использовать газовую плиту, примус, спиртовку или тампон, пропитанный 96% спиртом.

Автоклавирование используется для стерилизации инструментов для искусственного осеменения из полимерных материалов, растворов, хлопчатобумажной спецодежды, салфеток, полотенец. Стерилизация проводится в автоклавах согласно инструкциям по их применению.

Использованные предметные и покровные стекла моются в теплой воде и протираются марлевой салфеткой.

Стерильные инструменты для искусственного осеменения хранятся в застекленных шкафах или в настольном ящике-витрине, оборудованном бактерицидной лампой. Хранить инструменты для искусственного осеменения на столе под марлей запрещено.

Инструменты для искусственного осеменения, предназначенные для использования на пастбище, после стерилизации оборачиваются стерильными марлевыми салфетками, затем полиэтиленовой пленкой и укладываются в сумку. Еженедельно сумка моется горячим раствором бикарбоната натрия (содовым раствором), прополаскивается горячей водой. При возвращении из хозяйства, находящегося на территории, не являющейся благополучной по болезням, общим для человека и животных, данные процедуры осуществляются немедленно в специально отведенном месте.

5.2. При искусственном осеменении используются растворы собственного приготовления либо готовые формы.

Растворы хлорида натрия, цитрата натрия (изотоп) и бикарбоната натрия (содовый раствор) готовятся ежедневно. Для приготовления 0,9% хлорида натрия (физиологический раствор) в мерный цилиндр или колбу объемом 100 мл наливается 40-50 мл дистиллированной воды, добавляется 0,9 г хлорида натрия, который перемешивается до полного растворения. Затем доливается дистиллированная вода, количество раствора доводится до 100 мл. Аналогично готовятся растворы цитрата и бикарбоната натрия, используя на 100 мл раствора 2,9 г цитрата натрия или 1 г бикарбоната натрия, соответственно. Полученные растворы подогреваются до +90...+95°С либо стерилизуются автоклавированием, хранятся в стерильных флаконах.

70 % раствор спирта готовится путем добавления к 73 мл 96% спирта-ректификата 27 мл дистиллированной воды. Концентрация раствора проверяется спиртомером.

Раствор фурацилина, используемый для обработки наружных половых органов перед искусственным осеменением, готовится следующим образом: в 1 л кипящей воды растворяется 10 г хлорида натрия и 0,2 г фурацилина, раствор фурацилина охлаждается и фильтруется. Хранится раствор фурацилина не более двух дней в бутылке из темного стекла или в затемненном месте.

5.3. Дезинфекция сосудов Дьюара проводится не менее одного раза в год при соблюдении следующих условий:

спермодозы перегружаются в сменный сосуд;

остатки азота сливаются в специально оборудованное место;

освобожденный сосуд Дьюара ставится на отогревание до температуры окружающей среды (не менее чем на 2 суток);

мойка производится горячей водой при температуре не выше 70°С (возможно применение моющего средства типа ОП-7);

промытые сосуды Дьюара подвергаются дезинфекции 4% раствором перекиси водорода.

Сосуды Дьюара объемом до 30 л заливаются дезраствором полностью. Канистры и прочие элементы дезинфицируются путем полного погружения в отдельную емкость с дезраствором. По истечении часа дезраствор выливается. Сосуд Дьюара, канистры и прочие элементы тщательно дважды прополаскиваются кипяченой водой при температуре не выше 70°С и высушиваются.

_____________________________

* При работе визоцервикальным способом дополнительно используются тампонницы с тампонами, пропитанными 96% спиртом.

** Для искусственного осеменения телок маноцервикальный способ не применяется.