Приложение. Условия применения биотехнологических методов искусственного осеменения племенных коров и телок

Приложение

Условия
применения биотехнологических методов искусственного осеменения племенных коров и телок

I. Общие положения

1.1. В целях формирования высокопродуктивного племенного поголовья крупного рогатого скота, повышения племенной ценности племенных животных при разведении племенного крупного рогатого скота организациями по племенному животноводству применяются биотехнологические методы искусственного осеменения племенных коров и телок (далее, соответственно, - коровы, телки).

1.2. Искусственному осеменению подлежат только клинически здоровые коровы и телки. Противопоказаниями к их осеменению являются:

незавершенная инволюция матки;

патология яичников;

воспалительные процессы в половых путях, характеризующиеся отклонениями в консистенции слизи, наличием в слизи хлопьев и прожилок гноя.

II. Определение времени искусственного осеменения коров и телок

2.1. При определении времени искусственного осеменения коров и телок учитываются стадии полового цикла - течка, общее возбуждение, половая охота и овуляция.

2.2. Признаки половой охоты и времени искусственного осеменения коров и телок определяются в соответствии с приложением N 1 к настоящим условиям применения биотехнологических методов искусственного осеменения племенных коров и телок (далее - Условия).

2.3. Выявление у коров и телок половой охоты проводится оператором по искусственному осеменению не менее 3 раз в сутки: в утренние и дневные часы - при активных прогулках или пастьбе, в вечерние часы - во время доения и ухода за животными (на каждое наблюдение должно быть выделено не менее 15 минут).

2.4. Основные способы выявления половой охоты у коров и телок определены в соответствии с приложением N 2 к Условиям.

III. Хранение, оттаивание и оценка качества глубокозамороженной спермы

3.1. Глубокозамороженная сперма должна храниться в сосудах Дьюара в жидком азоте при температуре - 196°С. Контейнеры со спермой обязательно должны быть погружены в жидкий азот. Хранение спермы в парах азота недопустимо.

3.2. Использование канистр с решетчатым дном допускается при наличии специальных пластиковых стаканов-вкладышей.

3.3. Глубокозамороженная сперма должна храниться в металлических либо пластиковых контейнерах.

3.4. Объем жидкого азота в сосуде Дьюара должен составлять не менее 1/3 объема сосуда. Уровень азота в сосуде Дьюара определяют с помощью мерной линейки.

3.5. Повторное замораживание спермы после ее оттаивания не допускается.

3.6. Оттаивание глубокозамороженной спермы и оценка ее качества проводятся в соответствии с нижеприведенной последовательностью действий оператора по искусственному осеменению:

надеть чистую спецодежду;

вымыть стол и руки;

снять чехол с микроскопа;

протереть и подготовить микроскоп к работе;

отрегулировать освещение, подключить нагревательный столик, разместить на нем предметные и покровные стекла;

подготовить водяную баню с температурой +38-40°С (контроль температуры осуществляется с помощью термометра);

на чистый стол поставить тампонницу с тампонами, пропитанными 70% спиртом*;

на край стола положить перчатки, канцелярские скрепки, пипетки, ампулы, салфетки и другие инструменты для искусственного осеменения, необходимые согласно применяемой технологии искусственного осеменения;

достать пинцетом 1-й тампон, обработать пальцы рук и рабочую (свободную) часть стола, тампон выбросить;

достать пинцетом 2-й тампон, обработать подставку, установить ее на рабочую часть стола, тампон выбросить;

взять 3-й тампон и обработать инструменты для искусственного осеменения и ампулу или флакон с 0,9% раствором цитрата натрия (изотон), тампон выбросить;

обработанные инструменты для искусственного осеменения разместить на подставке;

вскрыть ампулу или флакон с 0,9% раствором цитрата натрия (изотон) и поместить в водяную баню или на нагревательный электростолик для разогрева на 3 минуты (кроме работ с облицованными гранулами).

При оттаивании спермы в соломинках:

взять 4-й тампон и обработать край пакета с одноразовым инструментом для искусственного осеменения, тампон выбросить;

угол пакета надрезать стерильными ножницами и выдвинуть чехол на 1/3 длины;

надеть защитные очки и перчатки;

открыть сосуд Дьюара, быстро (не более 5 секунд) охладить бранши стерильного пинцета (корнцанга) в жидком азоте и подтянуть контейнер с соломинками к верхней трети горловины сосуда;

извлечь стерильным предварительно охлажденным в азоте пинцетом или корнцангом одну соломинку;

удалить колебательными движениями остатки азота (не более 5 секунд) и немедленно погрузить соломинку в водяную баню;

закрыть и опустить контейнер с оставшимся соломинками в сосуд Дьюара;

закрыть сосуд Дьюара;

медленно круговыми движениями перемещать погруженную в воду соломинку, держа ее неохлажденным пинцетом за запаянный кончик соломинки (соломинку, укупоренную стеклянными шариками, - за любой кончик). Оттаивание спермы следует проводить в течение 10 секунд при температуре воды +38°С;

вынуть из воды соломинку и осушить ее стерильной салфеткой;

взять инструмент для искусственного осеменения в одну руку, а соломинку с оттаянной спермой в другую;

проверить, чтобы воздушный пузырек находился у запаянного кончика соломинки (у соломинки, укупоренной стеклянными шариками, - у любого кончика); при необходимости соломинку встряхнуть;

оттянуть поршень инструмента для искусственного осеменения на 90-120 мм (в зависимости от длины соломинки) и вставить соломинку со спермой (укупорочным пыжом или шариком к поршню инструмента для искусственного осеменения) до упора;

отрезать стерильными ножницами выступающий конец соломинки на расстоянии 7 мм строго перпендикулярно через воздушный пузырек;

надеть на подготовленный инструмент для искусственного осеменения защитный чехол и надежно зафиксировать его на инструменте для искусственного осеменения;

закрепить зажимом (канцелярской скрепкой) надрезанный край пакета.

При оттаивании спермы в необлицованных гранулах:

взять 4-й тампон и обработать край пакета с одноразовыми пипетками (катетерами), тампон выбросить;

надрезать угол пакета стерильными ножницами или проколоть его концом пипетки (катетера);

выдвинуть пипетку (катетер) на 1-3 длины, соединить ее при помощи муфты со стерильным инструментом для искусственного осеменения (или с полиэтиленовой ампулой);

извлечь собранный инструмент для искусственного осеменения из пакета и разместить на подставке. Открытый угол пакета закрепить зажимом (канцелярской скрепкой);

надеть защитные очки и перчатки;

открыть сосуд Дьюара, быстро (не более 5 секунд) охладить бранши стерильного пинцета (корнцанга) в жидком азоте и подтянуть контейнер с гранулами к верхней трети горловины сосуда;

извлечь стерильным, предварительно охлажденным в азоте пинцетом или корнцангом гранулу и опустить ее в подготовленную ампулу или флакон с 1 мл 2,9% раствора цитрата натрия (изотон);

закрыть и опустить контейнер с оставшимися гранулами в сосуд Дьюара;

закрыть сосуд Дьюара;

оттаивать гранулу при температуре +40°С в течение 8-10 секунд до тонкого ледяного стерженька;

осторожными круговыми движениями флакона перемешать сперму, поставить флакон на стол на салфетку;

набрать сперму в инструмент для искусственного осеменения.

При оттаивании спермы в облицованных гранулах:

взять 4-й тампон и обработать край пакета с одноразовым инструментом для искусственного осеменения, тампон выбросить;

вскрыть угол пакета;

надеть защитные очки и перчатки;

открыть сосуд Дьюара, быстро (не более 5 секунд) охладить бранши стерильного пинцета (корнцанга) в жидком азоте и подтянуть контейнер с облицованными гранулами к верхней трети горловины сосуда;

облицованную гранулу быстро извлечь из сосуда Дьюара стерильным, предварительно охлажденным пинцетом с широкими браншами или корнцангом и поместить ее в водяную баню при температуре +38°С;

оттаивать в течение 8-10 секунд;

осушить гранулу стерильной салфеткой и проверить ее на герметичность путем легкого сжатия между двумя пальцами руки. Негерметичные гранулы не использовать;

подготовленную гранулу заправить в инструмент для искусственного осеменения;

проколоть облицованную гранулу перед искусственным осеменением стерильной иглой.

3.7. Недопустимо оттаивать одновременно две и более доз.

3.8. С момента оттаивания до введения спермы в половые органы животного должно пройти не более 15 минут.

3.9. Оценка качества спермы проводится при температуре +38°С на нагревательном столике под микроскопом, соблюдая последовательность действий оператора по искусственному осеменению:

на предварительно подогретое предметное стекло из инструмента для искусственного осеменения нанести каплю спермы. К капле спермы из соломинки добавить стеклянной палочкой каплю 2,9% цитрата натрия (изотон), смешать, накрыть подогретым покровным стеклом (при оценке качества спермы в необлицованных и облицованных гранулах капля 2,9% цитрата натрия (изотон) не добавляется);

подвижность сперматозоидов определить при помощи микроскопа (с увеличением в 120-200 раз) по 10-балльной шкале в нескольких полях зрения.

Для искусственного осеменения коров и телок используется сперма с оценкой не менее 4 баллов, то есть 4 из 10 сперматозоидов должны иметь прямолинейно-поступательное движение. Другие виды движения сперматозоидов (манежное, колебательное) при оценке качества спермы по балльной системе не учитываются. От высокоценных быков-производителей и улучшателей, а также от быков, происходящих от родителей, признанных улучшателями, допускается к использованию сперма с оценкой не менее 3 баллов.

IV. Технология искусственного осеменения коров и телок

4.1. Искусственное осеменение коров и телок при привязном содержании, проводится в стойлах, при беспривязном содержании - в специально оборудованных станках.

4.2. Перед искусственным осеменением коров и телок от фекальных масс освобождается прямая кишка, тщательно обмываются теплой водой корень хвоста и наружные половые органы, затем орошаются теплым раствором фурацилина и насухо вытираются бумажными полотенцами. После проведения данных мероприятий оператором по искусственному осеменению руки моются и дезинфицируются 70 % спиртом или раствором фурацилина. Во время проведения туалета и обследования вульвы дополнительно используются латексные перчатки.

4.3. При переносе инструмента для искусственного осеменения к месту искусственного осеменения на него надевается санитарная рубашка, либо он помещается в перчатку для искусственного осеменения. В холодное время года используется термочехол.

4.4. Искусственное осеменение коров и телок проводится следующими методами: ректоцервикальный, маноцервикальный**, визоцервикальный.

4.5. При ректоцервикальном методе искусственного осеменения сперма при помощи стерильных инструментов для осеменения вводится в шейку матки через влагалище с фиксацией шейки матки через прямую кишку, соблюдая последовательность действий оператора по искусственному осеменению:

надеть полиэтиленовую перчатку, смазать поверхность перчатки вазелином (гелем), ввести руку вращательными движениями в прямую кишку и провести легкий массаж матки, нажимая введенной в прямую кишку рукой на верхний свод преддверия влагалища, приоткрыть половые губы и, не касаясь их концом инструмента для искусственного осеменения, ввести его на 10-15 см под углом 20°-30°, одновременно указательным и средним пальцем руки стягивая санитарную рубашку с инструмента для искусственного осеменения, и только затем продвинуть инструмент для искусственного осеменения горизонтально к шейке матки;

зафиксировать каудальную часть шейки матки одним из трех способов: кистью руки; между указательным и средним пальцами; ладонью, прижав шейку матки к лонным костям, если двумя предыдущими способами зафиксировать шейку матки не удается (во избежание травмирования прямой кишки фиксация шейки матки в период напряжения стенки прямой кишки не допустима);

фиксируя рукой шейку матки, продвинуть ее несколько вперед, расправляя складки во влагалище, переводя инструмент для искусственного осеменения в горизонтальное положение и также продвигая его вперед;

контролируя отверстие канала шейки матки большим пальцем или мизинцем (в зависимости от способа фиксации), ввести инструмент для искусственного осеменения в канал;

захватить шейку матки всей ладонью, приподнять над дном таза и осторожными движениями вправо, влево, вверх, вниз надвинуть ее на инструмент для искусственного осеменения, контролируя пальцами положение, продвинуть его в шейку матки на глубину 6-8 см до выхода в тело матки;

медленно надавить на поршень, вытолкнуть сперму, одновременно слегка отодвигая назад кончик инструмента для искусственного осеменения, равномерно распределяя сперму по каналу шейки матки;

осторожно извлечь инструмент для искусственного осеменения из влагалища, при использовании ампулы не разжимать ее до момента извлечения инструмента для искусственного осеменения из шейки матки;

сделать легкий массаж шейки матки и вывести руку из прямой кишки;

утилизировать использованный одноразовый инструмент для искусственного осеменения и перчатку;

после искусственного осеменения животных необходимо выдержать в станке 1-2 часа.

4.6. При маноцервикальном методе искусственного осеменения сперма вводится в шейку матки рукой через влагалище при помощи стерильного инструмента для искусственного осеменения, соблюдая последовательность действий оператора по искусственному осеменению:

надеть полиэтиленовую перчатку, смочить ее 0,9% раствором хлорида натрия (физиологическим раствором) или 1% раствором бикарбоната натрия (содовым раствором);

осторожно ввести руку во влагалище коровы и определить степень раскрытия шейки матки, сделать массаж шейки матки;

вынув наполовину кисть руки из влагалища, вложить в нее другой рукой подготовленный инструмент для искусственного осеменения, ввести кисть руки до шейки матки и под контролем указательного пальца продвинуть катетер в канал шейки матки на глубину 1,5-2 см;

массируя шейку матки кончиками пальцев, ампулу подталкивать ладонью до тех пор, пока катетер полностью (на 6-7 см) не войдет в канал шейки матки;

приподнять ампулу на 2-3 см вверх и выдавить из нее сперму большим и указательным пальцами начиная с верхнего угла донышка, перемещая давление к шейке ампулы;

после полного введения семени, извлечь катетер из канала шейки матки не разжимая ампулу и, оставив инструмент для искусственного осеменения на дне влагалища, дополнительно помассировать шейку матку в течение 1-2 минут;

извлечь руку с инструментом для искусственного осеменения из влагалища;

утилизировать одноразовый инструмент для искусственного осеменения и перчатку.

4.7. При визоцервикальном способе искусственного осеменения сперма вводится в канал шейки матки с использованием влагалищного зеркала, соблюдая последовательность действий оператора по искусственному осеменению:

перед искусственным осеменением влагалищное зеркало подогреть до температуры 38-40°С, осветитель тщательно протереть тампоном, пропитанным 96% спиртом, оросить осветитель и влагалищное зеркало непосредственно перед искусственным осеменением теплым (38-40°С) 0,9% раствором хлорида натрия (физиологическим раствором);

надеть полиэтиленовую перчатку;

раскрыть половые губы, держа влагалищное зеркало с осветителем ручками в сторону, ввести его во влагалище до упора. Повернуть влагалищное зеркало ручками вниз и осторожно раскрыть ветви, отыскать шейку матки и