Приложение А (рекомендуемое). Примеры определения средней летальной концентрации (разбавления)

Приложение А
(рекомендуемое)

Примеры определения средней летальной концентрации (разбавления)

А.1 Пример определения 72 ч модельного токсиканта для метода А

Результаты определения физиологической чувствительности науплиев Artemia salina L. в растворе модельного токсиканта (калий двухромовокислый) приведены в таблице А.1.

Таблица А.1

Продолжительность тестирования, ч	Массовая концентрация раствора модельного токсиканта,	Количество выживших тест-организмов, шт.. в чашках Петри			Среднеарифметическое значение количества выживших тест-организмов, шт.	Процент гибели тест-организмов, %
		N 1	N 2	N 3
72	0 (контрольная)	20	20	20	20	0
	1,0	20	20	20	20	0
	2,0	20	20	20	20	0
	5,0	16	17	15	16	20
	7,5	9	9	9	9	55
	10,0	2	3	1	2	90

По результатам тестирования, приведенным в таблице А.1, гибель 50% тест-организмов не зарегистрирована. В этом случае для обработки результатов тестирования применяют пробит-анализ аналогично А.4.

Получают значение 72 ч для указанного модельного токсиканта, равное 7,24 , которое входит в диапазон концентраций, указанный в 4.3.3.4 настоящего стандарта. Следовательно, использованные тест-организмы пригодны для тестирования.

А.2 Примеры определения средней летальной концентрации вещества при тестировании по методу А

А.2.1 Пример проведения предварительного тестирования по 4.4.1 настоящего стандарта для выбора диапазона концентраций вещества, в пределах которого необходимо провести окончательное тестирование, приведен в таблице А.2.

Таблица А.2

Продолжительность тестирования, ч	Массовая концентрация вещества,	Количество выживших тест-организмов в чашках Петри, шт.		Среднеарифметическое значение количества выживших тест-организмов, шт.	Процент гибели тест-организмов, %
		N 1	N 2
72	0 (контрольная проба)	20	20	20	0
	0,1	20	20	20	0
	1,0	20	20	20	0
	10,0	11	9	10	50
	100,0	3	3	3	85
	1000,0	0	0	0	100

Из данных таблицы А.2 следует, что диапазон концентраций вещества, в пределах которого необходимо проводить окончательное тестирование, составляет от 1,0 до 100 .

А.2.2 Пример проведения окончательного тестирования по 4.4.2 настоящего стандарта приведен в таблице А.3.

Таблица А.3

Продолжительность тестирования, ч	Массовая концентрация вещества,	Количество выживших тест-организмов в чашках Петри, шт.			Среднеарифметическое значение количества выживших тест-организмов, шт.	Процент гибели тест-организмов, %
		N 1	N 2	N 3
72	0 (контрольная проба)	20	20	20	20	0
	1,0	20	20	20	20	0
	2,5	17	19	18	18	10
	5,0	16	14	15	15	25
	10,0	11	10	9	10	50
	100,0	4	3	2	3	85

Из данных таблицы А.3 видно, что 50%-ной гибели тест-организмов соответствует массовая концентрация вещества, равная 10 при тестировании в течение 72 ч (72 ч ).

Если значение массовой концентрации вещества, которое соответствует 50%-ной гибели тест-организмов при тестировании в течение 72 ч, не зарегистрировано (см. таблицу А.4), то его определяют, используя для обработки результатов тестирования пробит-анализ аналогично А.4.

Таблица А.4

Продолжительность тестирования, ч	Массовая концентрация вещества,	Количество выживших тест-организмов в чашках Петри, шт.			Среднеарифметическое значение количества выживших тест-организмов, шт.	Процент гибели тест-организмов, %
		N 1	N 2	N 3
72	0 (контрольная проба)	20	20	20	20	0
	1,0	20	20	20	20	0
	2,5	17	16	15	16	20
	5,0	12	13	14	13	35
	10,0	9	8	7	8	60
	100,0	1	0	2	1	95

А.3 Примеры определения средней летальной концентрации вещества при тестировании по методу Б

А.3.1 Пример проведения предварительного тестирования по 5.4 для выбора диапазона концентраций вещества, в пределах которого необходимо провести окончательное тестирование, приведен в таблице А.5.

Таблица А.5

Массовая концентрация вещества,	Количество выживших тест-организмов, шт., после тестирования в течение
	24 ч	48 ч
0 (контрольная проба)	5	5
0,10	5	5
0,32	5	5
1,0	5	5
3,2	5	3
10	0	0
32	0	0
100	0	0

Из данных таблицы А.5 следует, что диапазон концентраций вещества, в пределах которого необходимо провести окончательное тестирование, составляет от 1,0 до 10 .

А.3.2 Пример проведения окончательного тестирования приведен в таблице А.6.

Таблица А.6

Продолжительность тестирования, ч	Массовая концентрация вещества,	Количество выживших тест-организмов в контейнерах, шт.				Общее количество выживших тест-организмов, шт.	Процент гибели тест-организмов, %
		N 1	N 2	N 3	N 4
24	0 (контрольная проба)	5	5	5	5	20	0
	1,0	5	5	5	5	20	0
	1,8	5	5	5	5	20	0
	3,2	4	5	4	5	18	10
	5,6	2	3	1	2	8	60
	10	0	1	0	1	2	90
48	0 (контрольная проба)	5	5	5	5	20	0
	1,0	5	5	5	5	20	0
	1,8	5	4	5	3	17	15
	3,2	3	1	1	2	7	65
	5,6	0	0	1	1	2	90
	10	0	0	0	0	0	100

А.3.3 По результатам тестирования в течение 24 и 48 ч, приведенным в таблице А.6, 50%-ная гибель тест-организмов не зарегистрирована. В этом случае для обработки результатов тестирования применяют пробит-анализ аналогично А.4 и получают следующие значения: средняя летальная концентрация пробы вещества при тестировании в течение 24 ч (24 ч ) равна 5,4 ; средняя летальная концентрация пробы вещества при тестировании в течение 48 ч (48 ч ) равна 2,9 .

А.4 Примеры обработки результатов тестирования с использованием пробит-анализа

А.4.1 Если в результате тестирования не зарегистрировано конкретное значение средней летальной кратности разбавления (концентрации) пробы, то результаты тестирования обрабатывают с применением метода математической статистики - пробит-анализа. Значения пробитое, соответствующие гибели тест-организмов в диапазоне от 0%до 99%, приведены в таблице А.7.

Таблица А.7

Процент гибели тест-организмов, %	0	1	2	3	4	5	6	7	8	9
0	-	2,67	2,95	3,12	3,25	3,35	3,45	3,52	3,59	3,66
10	3,72	3,77	3,82	3,83	3,92	3,96	4,01	4,05	4,08	4,12
20	4,16	4,19	4,23	4,26	4,29	4,33	4,36	4,39	4,42	4,45
30	4,48	4,50	4,53	4,56	4,59	4,61	4,64	4,67	4,69	4,72
40	4,75	4,77	4,80	4,82	4,85	4,87	4,90	4,92	4,95	4,97
50	5,00	5,03	5,05	5,08	5,10	5,13	5,15	5,18	5,20	5,23
60	5,25	5,28	5,31	5,33	5,36	5,39	5,4	5,44	5,47	5,50
70	5,52	5,55	5,58	5,61	5,64	5,67	5,71	5,74	5,77	5,81
80	5,84	5,88	5,92	5,95	5,99	6,04	6,08	6,13	6,18	6,23
90	6,28	6,34	6,41	6,48	6,55	6,64	6,75	6,88	7,05	7,33

А.4.2 Результаты тестирования по определению средней летальной кратности разбавления пробы на примере сточной воды приведены в таблице А.8.

Таблица А.8

Кратность разбавления анализируемой пробы сточной воды С, %	Десятичный логарифм кратности разбавления (lg С)	Процент гибели тест-организмов, %	Значения пробитое по таблице А.7
3,12	0,494	0	-
6,25	0,796	0	-
12,50	1,097	10	3,72
25,00	1,398	40	4,75
50,00	1,699	80	5,84
100,00	2,000	95	6,64
Примечание - Данные, приведенные в таблице А.8, получены в результате тестирования анализируемой пробы сточной воды по методу А в течение 72 ч.

А.4.3 По значениям пробитое и десятичных логарифмов кратности разбавлений (см. таблицу А.8) строят график линейной зависимости, откладывая по оси абсцисс значения логарифмов кратности разбавлений анализируемой пробы, по оси ординат - значения пробитое.

Пример построения графика линейной зависимости значений пробитов от десятичного логарифма кратности разбавлений (IgC) на примере сточной воды приведен на рисунке А.1.

"Рисунок A.1 - График линейной зависимости значений пробитов от десятичного логарифма кратности разбавлений анализируемой пробы сточной воды"

А.4.4 На графике (см. рисунок А.1) на оси ординат из точки, соответствующей значению пробита пять, что определяет 50%-ную гибель тест-организмов, проводят прямую параллельно оси абсцисс до пересечения с графиком. Из точки пересечения прямой с графиком (М) опускают перпендикуляр на ось абсцисс и получают значение lg С, равное 1,46, соответствующее 72 ч .

Используя таблицу антилогарифмов, определяют значение кратности разбавления 72 ч , соответствующее 50%-ной гибели тест-организмов за 72 ч, которое равно 28,84%.