Приложение Б (обязательное). Лабораторные животные, их содержание и рацион, схема проведения анализа in vivo

Приложение Б
(обязательное)

Лабораторные животные, их содержание и рацион, схема проведения анализа in vivo

Б.1 Лабораторные животные

Анализ проводят на крысах-самцах линии Вистар с исходной массой тела 150 - 160 г. После десяти дней адаптации на рационе вивария у животных контролируют массу тела и определяют динамику ее прироста. Особей, отстающих в приросте массы тела, удаляют.

Б.2 Рацион лабораторных животных

Пищевая и биологическая ценность рациона должна полностью удовлетворять физиологические потребности лабораторных животных, корма должны быть свободными от патогенных микроорганизмов и вредных примесей и не должны влиять на результаты анализа. Состав базового полусинтетического рациона приведен в таблице Б.1.

Таблица Б.1 - Состав полусинтетического рациона

Компоненты	Масса ингредиентов, г на 100 г смеси
Казеин	20
Крахмал маисовый	63,5
Масло растительное (подсолнечное)	5
Лярд	5
Солевая смесь	3,5
Сухая смесь водорастворимых витаминов	0,9
Смесь жирорастворимых витаминов (масляный раствор)	0,1
Микрокристаллическая целлюлоза	2,0

Состав смеси жирорастворимых витаминов приведен в таблице Б.2.

Таблица Б.2 - Состав смеси жирорастворимых витаминов

Витамины	Объем, на 100  смеси
Витамин Е (токоферол 50 мг/)	10
Витамин А (ретинол-100000 и.е./)	1,4
Витамин D (эргокальциферол 50000 и.е./)	1,4
Рыбий жир	87,2

Состав смеси водорастворимых витаминов приведен в таблице Б.3.

Таблица Б.3 - Состав смеси водорастворимых витаминов

Витамины	Содержание, мг/100 г смеси
Тиамин гидрохлорид	500
Рибофлавин	500
Пиридоксин гидрохлорид	500
Никотинамид	2000
Кальция пантетонат	2000
Фолиевая кислота	200
Биотин	10
Менадиона натрия бисульфит (викасол) 1%	100
Цианкобаламин	1,5
Сахароза	До 100 г

Состав солевой смеси приведен в таблице Б.4.

Таблица Б.4 - Состав солевой смеси

Минеральные соли	Содержание, г/100 г смеси
Кальций фосфорнокислый,	50
Натрий хлористый, NaCI	7,4
Калий лимоннокислый моногидрат, х	22
Калий сернокислый,	5,2
Магний окись,	2,4
Марганец углекислый	0,35
Железо лимоннокислое,	0,6
Цинк углекислый,	0,16
Медь углекислая	0,03
Йодистокислый калий,	0,001
Селенистокислый натрий	0,001
Хромокалиевые квасцы, x	0,058
Сахароза	11,8

Б.3 Схема проведения анализа

Б.3.1 Животных делят на опытные группы, группы сравнения и контрольные группы, по 6 - 10 особей в каждой группе. Число групп определяется количеством анализируемых видов и/или доз потенциально бифидогенного функционального пищевого продукта.

Б.3.2 Опытные группы животных в ходе эксперимента подвергают воздействию тестируемого функционального пищевого продукта (продуктов, компонентов). Группы сравнения подвергают воздействию известного пребиотического компонента (инулина). Контрольные группы животных получают базовый полусинтетический рацион.

Б.3.3 Введение функционального пищевого продукта или инулина в рацион лабораторных животных осуществляется путем замещения по массовой доле кукурузного крахмала, входящего в состав стандартного полусинтетического рациона.

Б.3.4 Используется принцип кормления вволю при свободном доступе к воде.

Б.3.5 Продолжительность введения функционального пищевого продукта составляет не менее 20 дней.

Б.3.6 Ежедневно контролируют состояние животных, поедаемость корма; еженедельно - поведение, состояние шерстного покрова, наличие/отсутствие диареи, прирост массы тела.

Б.3.7 По окончании введения функционального пищевого продукта животных подвергают эвтаназии одним из разрешенных для этого способов по [7].

Б.3.8 В процессе патолого-анатомического вскрытия животных из брюшной полости выделяют слепую кишку, обвязывают лигатурой, отсекают и помещают в стерильную одноразовую посуду. Образцы хранят не более 2 ч при (42)°С. Для анализа микрофлоры асептически отбирают содержимое слепой кишки, из которого готовят пробу для анализа.