Приложение Е (обязательное). Определение массовой доли биурета

Приложение Е
(обязательное)

Определение массовой доли биурета

Е.1 Общие положения

Настоящее приложение устанавливает фотометрический метод определения массовой доли биурета в AUS 32 в пределах от 0,1% до 0,5% Метод также применим при ожидаемой массовой доле до 1,5%, но в данном случае показатели прецизионности не определены.

Е.2 Основные принципы

В щелочных растворах в присутствии смешанной калиевонатриевой соли винной кислоты биурет формирует комплекс с двухвалентной медью, окрашенный в фиолетовый цвет, с максимумом оптической плотности при длине волны 550 нм. Окрашенный комплекс определяют спектрофотометрически при длине волны 550 нм, и при помощи градуировочного графика, построенного по стандартным растворам биурета, определяют концентрацию биурета.

Е.3 Оборудование

Е.3.1 Аналитические весы с ценой деления 0,001 г или менее.

Е.3.2 Вакуумный фильтр, способный проводить фильтрование с размером пор 0,45 мм.

Е.3.3 Спектрофотометр для проведения измерений при длине волны 550 нм с кюветой толщиной 50 мм.

Е.3.4 Мерные колбы объемом 1000, 250, 100, 50 .

Е.3.5 Пипетки.

Е.3.6 Роторный испаритель.

Е.3.7 Термостат, способный поддерживать температуру (301)°С.

Е.4 Реактивы

Е.4.1 Химические реактивы аналитической степени чистоты

При проведении анализа используют только реактивы аналитической степени чистоты. Используемая вода должна быть деионизированной, ее следует прокипятить перед использованием, чтобы удалить диоксид углерода.

Е.4.2 Насыщенный раствор карбоната калия.

Е.4.3 Раствор сульфата меди

Растворяют 15 г сульфата меди () в воде, очищенной от , и доводят до 1000 .

Е.4.4 Щелочной раствор смешанной калиевонатриевой соли винной кислоты

Растворяют 40 г гидроксида натрия в 500  воды в колбе объемом 1000 . После охлаждения добавляют 50 г смешанной калиевонатриевой соли винной кислоты () и доводят до метки водой. Перед использованием выдерживают раствор в течение одного дня.

Е.4.5 Стандартный раствор биурета концентрацией 0,8 мг биурета на 1

Растворяют 800 мг чистого биурета в воде, очищенной от , и доводят до 1000 . Перед использованием высушивают биурет в течение 3 ч при температуре 105°С.

Биурет может быть очищен следующим методом:

- добавляют 50 г биурета к 500  раствора аммиака с 25%-ной концентрацией, перемешивают в течение 15 мин;

- фильтруют, промывают водой без аммиака и просушивают биурет;

- растворяют в этаноле (10 г на 1 ), фильтруют и выпаривают при постепенном нагревании до одной четвертой объема;

- охлаждают до 5°С и фильтруют;

- высушивают биурет в вакуумной печи при 80°С;

- проверяют чистоту фотометрическими измерениями по Е.5.5.

Е.5 Проведение испытания

Е.5.1 Влияющие факторы

Спектрофотометрические измерения применимы только для прозрачных растворов. Пробу фильтруют через 0,45 мм фильтр для получения прозрачного раствора.

Аммиак образует с двухвалентной медью окрашенный комплекс, который поглощает свет при длине волны 550 нм. Метод применим только в случае, если массовая доля аммиака в пробе меньше 500 мг/кг.

Чтобы снизить массовую долю аммиака, превышающую 500 мг/кг, помещают 50,0 г пробы в литровую колбу ротационного испарителя, добавляют 15  раствора карбоната калия и испаряют его в течение 1 ч при 40°С со скоростью вращения 60 об/мин и под вакуумом 2 - 3 кПа до окончательного объема примерно 20 . Переносят данный объем в мерную колбу объемом 250 .

Е.5.2 Построение градуировочного графика

В 6 мерных колб объемом 50  каждая переносят: 2, 5, 10, 15, 20, 25  стандартного раствора биурета и в каждую из 6 колб добавляют воды до общего объема смеси 25 . Добавляют при помешивании после каждого прибавления 10  щелочного раствора виннокислого калия-натрия и 10  раствора сульфата меди. Помещают пробирки в термостат с установленной температурой (301)°С и оставляют их там на 15 мин.

Проводят холостое испытание параллельно с определением, следуя аналогичной методике и используя те же самые количества всех реагентов, что и для измерения по Е.5.5.

После охлаждения до комнатной температуры растворы в мерных колбах доводят до метки водой и хорошо перемешивают. Проводят фотометрическое определение спектрофотометром при длине волны примерно 550 нм, используя кювету с толщиной слоя 50 мм и воду в качестве образца сравнения.

Вычитают оптическую плотность при холостом определении из оптической плотности измеренных значений и строят градуировочный график. В заданном диапазоне концентраций график должен быть строго линеен.

Е.5.3 Расчет поправочного коэффициента

Рассчитывают поправочный коэффициент F по следующей формуле

,

(Е.1)

где F - поправочный коэффициент;

- масса биурета в i-й пробе, мг;

- оптическая плотность i-й пробы;

- оптическая плотность в холостом определении.

Построение градуировочного графика и определение поправочного коэффициента необходимо повторять ежегодно и документировать.

Е.5.4 Коэффициент временной поправки

Коэффициент временной поправки рассчитывают еженедельно.

Проводят измерение 10  стандартного раствора биурета (8 мг биурета), как описано в Е.5.5.

Рассчитывают следующим образом

,

(Е.2)

где - коэффициент временной поправки;

- оптическая плотность стандартного раствора (среднеарифметическое значение двух определений);

- оптическая плотность в холостом определении.

Отклонение коэффициента временной поправки должно быть в пределах 5% от поправочного коэффициента. Для испытания проб следует использовать коэффициент временной поправки.

Е.5.5 Проведение испытания

Взвешивают 100 г испытуемого образца с точностью до 0,01 г в мерной колбе объемом 250 . Доводят до метки водой и хорошо перемешивают.

Переносят аликвотную часть, равную 10 , из испытуемого раствора в колбу, объемом 50 , доводят водой примерно до 25 . Добавляют при помешивании после каждого прибавления по очереди 10  щелочного раствора виннокислого калия-натрия и 10  раствора сульфата меди. Помещают колбу в термостат с установленной температурой (301)°С и оставляют ее там на 15 мин.

Проводят холостое испытание параллельно с определением, следуя аналогичной методике и используя те же самые количества всех реагентов, что и для определения.

После охлаждения до комнатной температуры растворы в мерных колбах доводят до метки водой и хорошо взбалтывают. Проводят фотометрическое определение спектрофотометром при длине волны примерно 550 нм, используя 50 мм кювету и воду в качестве сравнения.

Для определения неспецифичных значений оптической плотности помещают другие 10  испытуемого раствора в колбу объемом 50 , доводят до метки водой и измеряют оптическую плотность по той же методике.

Следует провести два параллельных определения.

Е.6 Результаты

Е.6.1 Вычисления

Массовую долю биурета рассчитывают по формуле

,

(Е.3)

где - массовая доля биурета, % ;

- оптическая плотность испытуемой пробы;

- оптическая плотность холостой пробы;

- коэффициент временной поправки, мг;

- масса пробы, использованной для приготовления испытуемого раствора, г

Е.6.2 Запись результатов

Результат записывают с точностью до 0,01%.

Е.7 Прецизионность

См. 5.2, 5.3 настоящего стандарта и таблицу Е.1.

Таблица Е.1 - Прецизионность

В процентах
Массовая доля биурета	Повторяемость r	Воспроизводимость R
От 0,1 до 0,5	0,01	0,04

Е.8 Протокол испытания

Протокол испытания должен содержать:

a) тип и описание исследуемого продукта;

b) ссылку на настоящий стандарт;

c) используемый метод отбора проб;

d) результаты испытания (см. Е.6);

e) отклонения от установленного хода испытания (при наличии);

f) дату проведения испытания.