Приложение ДЖ (справочное). Пример определения эффективной концентрации вещества по замедлению скорости роста клеток водорослей

Приложение ДЖ
(справочное)

Пример определения эффективной концентрации вещества по замедлению скорости роста клеток водорослей

ДЖ.1 По результатам тестирования анализируемой пробы и подсчета плотности (численности) клеток водорослей каждые 24 ч на протяжении 72 ч тестирования в каждой из колб для каждой заданной концентрации вещества и контрольной пробы рассчитывают среднеарифметические значения плотности (численности) клеток водорослей , , и определяют соответствующие им значения логарифма (lg ).

Пример обработки результатов тестирования анализируемой пробы вещества приведен в таблице ДЖ.1.

Таблица ДЖ.1

Массовая концентрация вещества Y,	Среднеарифметическое значение плотности (численности) клеток водорослей, подсчитанное после тестирования анализируемой пробы вещества в течение
	24 ч		48 ч		72 ч
	,	lg	,	lg	,	lg
0,0 (контрольная проба)		5,18		5,50		5,83
1,0		5,12		5,34		5,56
2,5		5,03		5,20	24	5,29
5,0		4,82		4,86		4,91
Примечание - Начальная плотность (численность) клеток водорослей в начале тестирования , lg = 4,00.

ДЖ.2 Замедление скорости роста клеток водорослей в процентах определяют одним из способов:

- графическим методом (см. ДЖ.2.1);

- расчетным методом (см. ДЖ.2.2).

ДЖ.2.1 Графический метод определения замедления скорости роста клеток водорослей

На основании полученных результатов (см. таблицу ДЖ.1) строят график скорости роста клеток водорослей для контрольной пробы и каждой заданной кратности разбавления (концентрации) анализируемой пробы в виде зависимости логарифма плотности (численности) клеток (lg #) от продолжительности тестирования, откладывая на оси ординат значение lg #, а на оси абсцисс - продолжительность тестирования (t, ч).

Пример графика скорости роста клеток водорослей Pseudokirchneriella subcapitata (Korshikov) Hindak для контрольной пробы и каждой заданной концентрации вещества анализируемой пробы по результатам тестирования в течение 72 ч (см. таблицу ДЖ.1) приведен на рисунке ДЖ.1.

Замедление скорости роста клеток водорослей , %, после 72 ч тестирования определяют графически для каждой заданной концентрации вещества анализируемой пробы относительно контрольной пробы следующим образом:

a) на ось ординат из точки, соответствующей значению 72 ч логарифма скорости роста клеток водорослей в контрольной (lg ) и в анализируемой пробе (lg каждой кратности разбавления (концентрации), проводят прямые линии параллельно оси абсцисс до пересечения с осью ординат (например, см. рисунок ДЖ.1 для линии К и линии 3);

b) рассчитывают разность между значениями логарифмов для контрольной пробы (lg и анализируемых проб (lg ).

Рисунок ДЖ. 1 - Пример графика среднеарифметических значений скорости роста клеток водорослей Pseudokirchneriella subcapitata (Korshikov) Hindak в контрольной пробе и при различных концентрациях вещества в течение тестирования

Например, за 72 ч (см. рисунок ДЖ.1) значение lg для контрольной пробы (линия К) равно 5,83, для анализируемой пробы концентрацией Y = 5,0  (линия 3) значение lg равно 4,91; разность этих логарифмов составляет 0,92;

c) рассчитывают среднюю скорость роста клеток водорослей в контрольной пробе за 72 ч по разности между значениями lg в конце тестирования и в начале тестирования. Например, значение lg (см. рисунок ДЖ.1) в конце тестирования равно 5,83,а в начале тестирования равно 4,0 (см. таблицу ДЖ.1). Разность этих логарифмов составляет 1,83, что соответствует средней скорости роста клеток водорослей в контрольной пробе;

d) рассчитывают замедление средней скорости роста клеток водорослей , %, для каждой заданной кратности разбавления (концентрации) относительно контрольной пробы по формуле

,

(ДЖ.1)

где - значение разности логарифмов контрольной пробы и анализируемой пробы, полученное по перечислению b);

- значение разности логарифмов для контрольной пробы, полученное по перечислению с).

Например, используя формулу (ДЖ.1) для линии 3, замедление скорости роста клеток водорослей в процентах относительно контрольной пробы (линия К) составляет

,

(ДЖ.2)

таким образом получаем, что замедление средней скорости роста клеток водорослей на 50% за 72 ч тестирования соответствует концентрации вещества Y = 5,0  анализируемой пробы.

Примечание - Если в контрольной пробе отмечается снижение скорости роста клеток водорослей в конце тестирования, то скорость роста клеток водорослей в одной из заданных концентраций в анализируемой пробе может не отличаться от скорости роста в контрольной пробе. Это ошибочно указывает на отсутствие воздействия. В этом случае расчеты скорости роста и замедления скорости роста клеток водорослей проводят на основе последних измерений (например, через 24 ч).

Увеличение скорости роста клеток водорослей в анализируемой пробе заданной кратности разбавления (концентрации) относительно контрольной пробы указывает на стимулирующий эффект, что отмечают в протоколе испытаний.

ДЖ.2.2 Расчетный метод определения замедления скорости роста клеток водорослей

По полученным результатам тестирования (например, см. таблицу ДЖ.1), замедление скорости роста клеток водорослей, , %, рассчитывают по формуле (4) с учетом использования формулы (3) настоящего стандарта для каждого заданного разбавления (концентрации) анализируемой пробы и контрольной пробы. При этом учитывают начальную плотность (численность) клеток водорослей в начале тестирования .

ДЖ.2.3 Пример определения скорости роста и замедления скорости роста клеток водорослей по ДЖ.2.1 или ДЖ.2.2 приведен в таблице ДЖ.2.

Таблица ДЖ.2 - Пример результатов тестирования

Массовая концентрация вещества Y,	Среднеарифметическое значение скорости роста клеток водорослей в конце тестирования , клеток/ч	Замедление скорости роста клеток водорослей в конце тестирования , %
0 (контрольная проба)	0,0254	-
1,0	0,0217	15
2,5	0,0179	30
5,0	0,0126	50
Примечания 1 Начальная плотность (численность) клеток водорослей в начале тестирования () составляет , lg = 4,0. 2 Знак "-", проставленный для контрольной пробы, означает, что снижение плотности (численности) клеток водорослей недопустимо (см.5.4.4).

ДЖ.3 Определение эффективной концентрации вещества

По результатам, полученным по ДЖ.2.1 или ДЖ.2.2 по значению замедления скорости роста клеток водорослей, определяют значение эффективной концентрации вещества, соответствующее 50%-ному замедлению скорости роста клеток водорослей 72 ч (72 ч ). Пример приведен в таблице ДЖ.2.

Из примера, приведенного в таблице ДЖ.2, видно, что концентрация вещества, которая соответствует 50%-ному замедлению скорости роста клеток водорослей при тестировании в течение 72 ч , равна 5,0 .