Изменение N 1 ГОСТ Р 55576-2013 "Корма и кормовые добавки. Метод качественного определения регуляторных последовательностей в геноме сои и кукурузы" (утв. и введено в действие приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 17 октября 2016 г. N 1416-ст)

ОКС 65.120

Дата введения - 1 июля 2017 г.

Раздел 1. Заменить слова: "генетически-модифицированной" на "генетически модифицированной" (2 раза).

Раздел 2. Заменить ссылки:

"ГОСТ Р ИСО 6497-2011 Корма для животных. Отбор проб" на "ГОСТ ISO 6497-2014 Корма. Отбор проб";

ГОСТ ISO 7218-2011 на ГОСТ ISO 7218-2015;

исключить ссылку:

"ГОСТ Р 51652-2000 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия";

дополнить ссылкой:

"ГОСТ 5962-2013 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия";

для ГОСТ Р 52173-2003 заменить слова: "генетически-модифицированных" на "генетически модифицированных".

Пункт 5.2 изложить в новой редакции:

"5.2 При проведении испытаний применяют оборудование и материалы по ГОСТ 31719, а также следующие реагенты:

- комплект реагентов для выделения ДНК ^*:

------------------------------

^*_{Данный комплект реагентов является рекомендуемым и приведен для удобства пользователей настоящего стандарта.}

------------------------------

буфер для лизирующего реагента, содержащий гуанидин хлорид, 1мМ Трис-HCl, 12мМ ЭДТА;

лизирующий реагент: протеиназа К;

раствор для отмывки 1: гуанидин тиоционат, 1мМ Трис-HCl, 12мМ ЭДТА;

раствор для отмывки 2: 50 %-ный этиловый спирт;

сорбент универсальный: диоксид кремния с примесями оксидов алюминия, кальция, железа, натрия и калия, HCl;

буфер для элюции ДНК: ТЕ-буфер с рН 8,0 ед. рН;

- ПЦР-комплект для выявления ДНК генетически модифицированной сои:

ПЦР-смесь-1: смесь специфичных праймеров и флуоресцентных зондов согласно таблице, 0,4-0,6мМ дНТФ, кратность смеси 2,5х;

ПЦР-буфер: 0,3М Трис-HCl (рН 8,3 ед. рН), 30-180мМ AmSO₄, 10-25мМ MgSO₄, глицерин;

полимераза (TaqF): полимераза (TaqF) химически модифицированная для обеспечения горячего старта;

положительный контрольный образец (ПКО ГМ соя), состоящий из участков последовательности регуляторных конструкций и содержащий места посадки праймеров и флуоресцентных зондов ПЦР-смеси-1. Положительный контроль ПЦР должен давать положительный сигнал по всем используемым каналам флуоресцентной детекции;

отрицательный контрольный образец (ОКО): ТЕ-буфер для элюции ДНК. Отрицательный контроль экстракции не должен давать положительный сигнал по всем используемым каналам флуоресцентной детекции;

- "ПЦР-комплект" для выявления ДНК генетически модифицированной кукурузы:

ПЦР-смесь-1: смесь специфичных праймеров и флуоресцентных зондов согласно таблице, 0,4-0,6мМ дНТФ, кратность смеси 2,5х;

ПЦР-буфер: 0,3М Трис-HCl (рН 8,3 ед. рН), 30-180мМ AmSO₄, 10-25 мМ MgSO₄, глицерин;

полимераза (TaqF): полимераза (TaqF) химически модифицированная для обеспечения горячего старта;

положительный контрольный образец (ПКО ГМ кукуруза), состоящий из участков последовательности регуляторных конструкций и содержащий места посадки праймеров и флуоресцентных зондов ПЦР-смеси-1. Положительный контроль ПЦР должен давать положительный сигнал по всем используемым каналам флуоресцентной детекции;

отрицательный контрольный образец (ОКО): ТЕ-буфер для элюции ДНК. Отрицательный контроль экстракции не должен давать положительный сигнал по всем используемым каналам флуоресцентной детекции".

Пункт 7.3. Заменить ссылку: ГОСТ Р 51652 на ГОСТ 5962.

Пункт 7.4. Заменить ссылку: ГОСТ Р ИСО 6497 на ГОСТ ISO 6497.

Пункт 10.1.1 изложить в новой редакции:

"10.1.1 Постановка ПЦР

Размораживают необходимое количество пробирок с ПЦР-смесью-1 (ГМ соя/ГМ кукуруза). Перемешивают на встряхивателе и сбрасывают капли с помощью кратковременного центрифугирования в течение 1-3 с.

Для проведения одной реакции в пробирку вносят 10 мм³ ПЦР-смеси-1, 5 мм³ ПЦР-буфера и 0,5 мм³ полимеразы (TaqF). Смесь перемешивают на встряхивателе, осаждая кратковременным центрифугированием, затем вносят по 15 мм³ смеси в микропробирки вместимостью 0,2 см³. Используя наконечник с аэрозольным барьером, в подготовленные пробирки добавляют по 10 мм³ ДНК испытуемых образцов, избегая попадания универсального сорбента в реакционную смесь.

Ставят контрольные реакции амплификации:

- отрицательный контрольный образец (К-) - вместо ДНК-пробы вносят в пробирку 10 мм³ ТЕ-буфера;

- положительный контрольный образец (К+) - вносят в пробирку 0,01 см³ ПКО ГМ соя/ПКО ГМ кукуруза.

Общий объем реакции - 25 мм³, объем ДНК-пробы -10 мм³".