Приложение А (рекомендуемое). Примеры определения средней эффективной концентрации (разбавления)

Приложение А
(рекомендуемое)

Примеры определения средней эффективной концентрации (разбавления)

А.1 Пример определения 24 ч модельного токсиканта для метода А

Результаты определения физиологической чувствительности околосуточных Daphnia magna Straus в растворе модельного токсиканта (двухромовокислый калий) приведены в таблице А.1.

Таблица А.1

Продолжительность тестирования, ч	Массовая концентрация раствора модельного токсиканта,	Количество выживших тест-организмов в емкостях, шт.			Среднеарифметическое значение количества выживших тест-организмов, шт.	Процент гибели тест-организмов, %
		N 1	N 2	N 3
	0 (контрольная)	10	10	10	10	0
	0,10	10	10	10	10	0
24	0,25	9	9	9	9	10
	0,50	8	7	8	8	20
	1,00	6	5	6	6	40
	1,50	4	5	3	4	60
	2,00	1	1	1	1	90
	2,50	0	0	0	0	100

По результатам тестирования, приведенным в таблице А.1, гибель 50% тест-организмов не зарегистрирована. В этом случае для обработки результатов тестирования применяют пробит-анализ по А.З.

Получают значение 24 ч для указанного модельного токсиканта, равное 1,26 , которое входит в диапазон концентраций, указанный в 5.3.3.4 настоящего стандарта. Следовательно, использованные тест-организмы пригодны для тестирования.

А.2 Примеры определения средней эффективной концентрации вещества при тестировании по методу А

А.2.1 Пример проведения предварительного тестирования по 5.4.1 настоящего стандарта для выбора диапазона концентраций вещества, в пределах которого необходимо провести окончательное тестирование, приведен в таблице А.2.

Таблица А.2

Продолжительность тестирования, ч	Массовая концентрация вещества,	Количество выживших тест- организмов в емкостях, шт.		Среднеарифметическое значение количества выживших тест- организмов, шт.	Процент гибели тест- организмов, %
		N 1	N 2
	0 (контрольная проба)	10	10	10	0
	0,1	10	10	10	0
48	1,00	9	9	9	10
	10,0	6	4	5	50
	100,0	1	1	1	90
	1000,0	0	0	0	100

Из данных таблицы А.2 следует, что диапазон концентраций вещества, в пределах которого необходимо проводить окончательное тестирование, составляет от 1,0 до 100 .

А.2.2 Пример проведения окончательного тестирования по 5.4.2 настоящего стандарта приведен в таблице А.3.

Таблица А.3

Продолжительность тестирования, ч	Массовая концентрация вещества,	Количество выживших тест-организмов в емкостях, шт.			Среднеарифметическое значение количества выживших тест-организмов, шт.	Процент гибели тест-организмов, %
		N 1	N 2	N 3
	0 (контрольная проба)	10	10	10	10	0
	1,0	8	10	9	9	10
48	2,5	9	8	7	8	20
	5,0	6	7	8	7	30
	10,0	5	6	4	5	50
	100,0	1	1	1	1	90

Из данных таблицы А.3 видно, что 50%-ной гибели тест-организмов соответствует массовая концентрация вещества, равная 10,0  при тестировании в течение 48 ч (48 ч ).

Если значение массовой концентрации вещества, которое соответствует 50%-ной гибели тест-организмов при тестировании в течение 48 ч, не зарегистрировано (таблица А.4), то его определяют, используя для обработки результатов тестирования пробит-анализ аналогично А.3.

Таблица А.4

Продолжительность тестирования, ч	Массовая концентрация вещества,	Количество выживших тест- организмов в емкостях, шт.			Среднеарифметическое значение количества выживших тест-организмов, шт.	Процент гибели тест-организмов, %
		N 1	N 2	N 3
	0 (контрольная проба)	10	10	10	10	0
	1,0	10	10	10	10	0
48	2,5	9	8	7	8	20
	5,0	5	6	7	6	40
	10,0	5	4	3	4	60
	100,0	1	1	1	1	90

А.3 Примеры обработки результатов тестирования с использованием пробит-анализа (метод А)

А.3.1 Если в результате тестирования не зарегистрировано конкретное значение средней эффективной кратности разбавления (концентрации) пробы, то результаты тестирования обрабатывают с применением метода математической статистики - пробит-анализа. Значения пробитое, соответствующие гибели тест-организмов в диапазоне от 0% до 99%, приведены в таблице А.5.

Таблица А.5

Процент гибели тест-организмов, %	0	1	2	3	4	5	6	7	8	9
0	-	2,67	2,95	3,12	3,25	3,35	3,45	3,52	3,59	3,66
10	3,72	3,77	3,82	3,83	3,92	3,96	4,01	4,05	4,08	4,12
20	4,16	4,19	4,23	4,26	4,29	4,33	4,36	4,39	4,42	4,45
30	4,48	4,50	4,53	4,56	4,59	4,61	4,64	4,67	4,69	4,72
40	4,75	4,77	4,80	4,82	4,85	4,87	4,90	4,92	4,95	4,97
50	5,00	5,03	5,05	5,08	5,10	5,13	5,15	5,18	5,20	5,23
60	5,25	5,28	5,31	5,33	5,36	5,39	5,4	5,44	5,47	5,50
70	5,52	5,55	5,58	5,61	5,64	5,67	5,71	5,74	5,77	5,81
80	5,84	5,88	5,92	5,95	5,99	6,04	6,08	6,13	6,18	6,23
90	6,28	6,34	6,41	6,48	6,55	6,64	6,75	6,88	7,05	7,33

А.3.2 Результаты тестирования по определению средней эффективной кратности разбавления пробы на примере сточной воды приведены в таблице А.6.

Таблица А.6

Кратность разбавления анализируемой пробы сточной воды С, %	Десятичный логарифм кратности разбавления (lg C)	Процент гибели тест-организмов, %	Значения пробитов по таблице А.5
3,12	0,494	0	-
6,25	0,796	0	-
12,50	1,097	10	3,72
25,00	1,398	40	4,75
50,00	1,699	80	5,84
100,00	2,000	95	6,64
Примечание - Данные, приведенные в настоящей таблице, получены в результате тестирования анализируемой пробы сточной воды по методу А в течение 96 ч.

А.3.3 По значениям пробитое и десятичных логарифмов кратности разбавлений (таблица А.6) строят график линейной зависимости, откладывая по оси абсцисс значения логарифмов кратности разбавлений анализируемой пробы, по оси ординат - значения пробитов.

Пример построения графика линейной зависимости значений пробитов от десятичного логарифма кратности разбавлений (Ig С) на примере сточной воды приведен на рисунке А.1.

Рисунок А.1 - График линейной зависимости значений пробитов от десятичного логарифма кратности разбавлений анализируемой пробы сточной воды

А.3.4 На графике (рисунок А.1) на оси ординат из точки, соответствующей значению пробита пять, что определяет 50%-ную гибель тест-организмов, проводят прямую параллельно оси абцисс до пересечения с графиком. Из точки пересечения прямой с графиком (М) опускают перпендикуляр на ось абсцисс и получают значение lg С, равное 1,46, соответствующее 96 ч .

Используя таблицу антилогарифмов, определяют значение кратности разбавления 96 ч , соответствующее 50%-ной гибели тест-организмов за 96 ч, которое равно 28,84%.

Примечание - Для количественной оценки токсичности и определения токсикологических показателей допускается применение пробит-анализ с использованием компьютерных программ.

А.4 Примеры определения средней эффективной кратности разбавления сточной воды при тестировании по методу В

А.4.1 Пример проведения предварительного тестирования пробы сточной воды по 6.5.2 для выбора диапазона кратности разбавлений пробы, в пределах которого необходимо провести окончательное тестирование, приведен в таблице А.7.

Таблица А.7

Кратность разбавления анализируемой пробы сточной воды С, %	Количество не потерявших подвижность тест-организмов, шт., после тестирования в течение
	24 ч	48 ч
0 (контрольная проба)	-	5
90	-	0
35	-	0
10	-	0
3,5	-	0
1	-	0
0,35	-	5
0,1	-	5
0,035	-	5
0,01	-	5

Из данных таблицы А.7 следует, что диапазон кратности разбавлений сточной воды, в пределах которого необходимо проводить окончательное тестирование, составляет от 0,1% до 1,0%.

А.4.2 Пример проведения окончательного тестирования по 6.5.3 настоящего стандарта приведен в таблице А.8.

Таблица А.8

Продолжительность тестирования, ч	Кратность разбавления анализируемой пробы сточной воды С, %	Количество не потерявших подвижность тест-организмов в емкостях, шт.				Общее количество не потерявших подвижность тест-организмов, шт.	Процент иммобилизации тест-организмов, %
		N 1	N 2	N 3	N 4
	0 (контрольная проба)	5	5	5	5	20	0
	0,35	5	5	3	4	17	15
48	0,48	2	3	4	3	12	40
	0,62	3	1	1	2	7	65
	0,80	1	0	2	1	4	80
	1,0	0	1	0	0	1	95

А.4.3 По результатам тестирования в течение 48 ч, приведенным в таблице А.8, 50%-ной иммобилизации (обездвиживания) тест-организмов не зарегистрировано. В этом случае для обработки результатов тестирования применяют графический метод определения значения 48 ч , как указано ниже.

А.4.4 Используя данные таблицы А.8 на логарифмической шкале Гаусса (см. рисунок А.2) по оси абцисс откладывают кратность разбавления сточной воды () в процентах, а по оси ординат - соответствующие значения иммобилизации тест-организмов (y) в процентах. По полученным точкам (А, В, С, D, Е) путем графической интерполяции строят график зависимости от y (рисунок А.2).

На оси ординат откладывают точку, соответствующую значению 48 ч и из нее проводят прямую, параллельную оси абсцисс до пересечения с прямой АЕ и находят точку N. Точке N на оси абсцисс соответствует значение =0,55%, т.е. эффективная кратность разбавления сточной воды 48 ч равна 0,55%.

Допускается использовать пробит анализ (см. приложение А) и другие статистические методы математического анализа для определения 48 по методу В.

Рисунок А.2 - График зависимости числа иммобилизации тест-организмов в процентах от кратности разбавления сточной воды у в процентах.