Методические указания МУК 4.1.1962-05 "Определение фумонизинов B_1 и B_2 в кукурузе (зерно, крупа, мука) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии" (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 21 апреля 2005 г.)

4.1. Методы контроля. Химические факторы

Методические указания МУК 4.1.1962-05
"Определение фумонизинов и в кукурузе (зерно, крупа, мука) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии"
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 21 апреля 2005 г.)

Дата введения: 1 июля 2005 г.
Введены впервые

1. Назначение и область применения

Настоящий документ устанавливает методику обнаружения, идентификации и количественного определения фумонизинов и в продовольственном сырье и пищевых продуктах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Данная методика испытана и рекомендуется для количественного определения фумонизинов и ( и ) в зерне кукурузы и продуктах переработки кукурузы.

Методические указания предназначены для проведения лабораторных исследований безопасности пищевой продукции центрами гигиены и эпидемиологии, а также для предприятий и организаций, осуществляющих контроль качества и безопасности пищевых продуктов и аккредитованных в установленном порядке.

Предел обнаружения метода: 0,01 мг/кг (для ); 0,04 мг/кг (для ).

Общая погрешность измерений не превышает 31%.

2. Общие положения

Фумонизины принадлежат к большой группе микотоксинов, продуцируемых микроскопическими грибами рода Fusarium. Наиболее часто в природных условиях встречается фумонизин , значительно, реже и в меньших количествах - фумонизины и (, и ). Подтверждено, что основными продуцентами этих токсинов являются F. moniliforme Sheldon (cин. F. verticillioides (Sacc. Nirenberg). Имеются данные о высокой частоте обнаружения фумонизинов в зерне кукурузы и продуктах ее переработки в США, Австралии, в ряде стран Европы.

Фумонизины представляют собой диэфиры пропан-1,2,3-трикарбоновой кислоты и 2-амино-12,16-диметилполигидроксиэйкозана, хорошо растворимы в воде и полярных растворителях. Фумонизины не обладают естественной флуоресценцией и не имеют специфических хромофоров, что обусловливает необходимость стадии дериватизации для проведения высокочувствительного определения.

Фумонизины в экспериментах in vivo поражают печень, почки, поджелудочную железу и центральную нервную систему у разных видов животных, а также обладают канцерогенным действием. Международное Агентство по изучению рака классифицирует фумонизины, как соединения потенциально канцерогенные для человека (Группа 2В). Комитет экспертов ФАО/ВОЗ по пищевым добавкам и контаминантам предложил установить величину допустимого суточного потребления (ДСП) с пищей на уровне 2 мкг/кг массы тела.

3. Принцип метода

Метод включает следующие этапы.

Экстракция и из проб зерна кукурузы, муки, крупы осуществляют смесью ацетонитрил-вода (50:50% об.). В пробах детского питания и многокомпонентных пищевых продуктах - смесью ацетонитрил-метанол-вода (25:25:50% об.):

- очистка и концентрирование пробы на патронах, заполненных силикагелем, химически связанным с октадецилселаном (ОДС-патроны). В пробах детского питания и многокомпонентных пищевых продуктах очистка проводится на иммуноафинных колонках (ИА-колонки);

- дериватизация фумонизинов о-фталевым реагентом;

- определение и с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с флуориметрическим детектором при длине волны возбуждения 335 нм и длине волны эмиссии 440 нм.

Предел обнаружения метода: 0,01 мг/кг (для ); 0,04 мг/кг (для ).

Относительное стандартное отклонение измерения времени удерживания составляет - 0,02 (для ) и 0,03 (для ), высот хроматографических пиков - 0,05 (для ) и 0,08 (для ), площадей хроматографических пиков - 0,06 (для ) и 0,08 (для ).

Степень извлечения добавленных в продукт фумонизинов составляет 89,8% для и 89,5% для .

4. Характеристика погрешностей измерения

Данные методические указания обеспечивают выполнение измерений с погрешностью, не превышающей величин, приведенных в табл. 1.

Таблица 1

Приписанные характеристики погрешностей результатов определения концентрации и в продукте методом ВЭЖХ при доверительной вероятности Р = 0,95

Концентрация, мг/кг	Токсин	Относительная погрешность, , %
		Способ твердофазной экстракции
		С18	ИА
0,1		7	31
		-	29
0,5		8	11
		18	15
1,0		13	8
		11	13
5,0		13	17
		3	17

5. Средства измерений, вспомогательные устройства, посуда, реактивы и материалы

5.1. Средства измерений

Система ВЭЖХ, состоящая из насоса высокого давления, инжектора типа Rheodyne-7125 (США) с объемом петли-дозатора 20 мкл, спектрофлуориметрического детектора, обеспечивающего возбуждение флуоресценции в спектральной области 330-340 нм и регистрацию эмиссии флуоресценции при длине волны 440 нм и системы для сбора и обработки данных типа Мультихром (Амперсенд, Россия) или аналогичной, хроматографической колонки (250х4,6 мм), заполненной сорбентом Kromasil C18 (МetaChem Texnologies, США), размер частиц 5 мкм, или подобным сорбентом.

Микрошприцы на МШ-10 или МШ-25 мкл для ВЭЖХ	ГОСТ 1770-74
Дозатор пипеточный от 1 до 5 мл
Дозатор пипеточный от 40 до 200 мкл
Цилиндры мерные с притертой пробкой вместимостью 100 мл тип 2-100 и 2-250

5.2. Вспомогательное оборудование

Аппарат для встряхивания проб типа АВУ-6С или аналогичный	ТУ 64-1-2451
Ротационный испаритель ИР-1М с ловушкой или аналогичный	ТУ 25-11917
Мельница лабораторная роторная "Амита-04" или аналогичная
Центрифуга лабораторная, обеспечивающая скорость вращения 2 500 об/мин
Система для твердофазной экстракции (вакуумная или аналогичная)
Электрошкаф сушильный лабораторный с погрешностью поддержания температуры в интервале от 50 до 350°С	ТУ 16-531.639
Холодильник бытовой	ГОСТ 16317
Мельница лабораторная электрическая ЭМ-3А или аналогичная рН-Метр МР 230 (Испания) или аналогичный	ТУ 46-22-236-79
ОДС-патроны (Германия), плотность прививки групп - 1,6 , содержание углерода - 18,5%, средний размер частиц - 58 мкм, масса сорбента в патроне - 100 мг
Иммуноафинные колонки Fumoniprep (R-Biopharm, Германия)
Магнитная мешалка типа ММ 5 с перемешивающим стержнем	ТУ 25-11.834-80
Колбы плоскодонные конические, 100 мл, НШ 29, тип КнКШ 100/29/32	ГОСТ 10394-74
Пробирки центрифужные, 10 мл	ГОСТ 1770
Флаконы стеклянные завинчивающиеся из темного стекла, объемом 4 мл (вайлы)
Флаконы стеклянные завинчивающиеся из темного стекла, объемом 7 мл
Колбы мерные, вместимостью 100, 500 мл тип 2-100-2, 2-500-2	ГОСТ 1770-74

5.3. Реактивы и материалы

Стандарт , фирмы "Sigma", кат. N F 1147
Стандарт , фирмы "Sigma", кат. N F 3771
Стандартные растворы и в смеси ацетонитрил-вода (50:50% об.), с концентрацией 10 мг/л
Воронки лабораторные	ГОСТ 25336
Фильтры обеззоленные "синяя лента"	ТУ 6-09-1678
Натрий фосфорнокислый двузамещенный, 12-водный, чда	ГОСТ 4172-76
Натрий фосфорнокислый однозамещенный, 2-водный, чда	ГОСТ 245-76
Натрия хлорид, хч	ГОСТ 4233-77
Тетраборат натрия 10-водный, хч	ГОСТ 4199-76
Ацетонитрил, осч, сорт 0, УФ-поглощение на 200 нм о.е./1 см
Метанол, осч	ГОСТ 6995-77
о-Фталевый альдегид, фирмы "Sigma", кат. N 0657
2-Меркапэтанол, фирмы "Fluka", чистота более 99%
Ортофосфорная кислота, осч	ТУ 2612-014-00203677-97
Натрия гидроксид, хч	ГОСТ 4328-77
0,1 М фосфатный буферный раствор, рН 3,0
0,1 М фосфатный буферный раствор, рН 3,0
0,08 М фосфатный буферный раствор, рН 4,5
0,025 М фосфатный буферный раствор, рН 7,0
Бумага фильтровальная лабораторная	ГОСТ 12026

6. Подготовка к выполнению измерений

6.1. Приготовление стандартных и рабочих растворов и

Для приготовления стандартных растворов микотоксинов рекомендуется использовать растворители, очищенные перегонкой.

Для получения раствора хранения фумонизинов с концентрацией 50 мг/л в мерную колбу вместимостью 100 мл помещают навеску фумонизина (5 мг), взятую с точностью до 0,01 мг, приливают небольшое количество смеси ацетонитрил-вода (1:1) и тщательно перемешивают до полного растворения вещества, доводят смесь до метки.

Для получения исходных рабочих растворов фумонизинов с концентрацией стандарта 10 мг/л следует в 5 раз разбавить раствор хранения фумонизинов.

Из исходных рабочих растворов и с концентрациями 10 мг/л сначала готовится их смесь в соотношении (1:1), а затем путем последовательного разбавления этой смеси готовят рабочий стандартный раствор, для чего необходимую аликвоту смеси микотоксинов доводят до соответствующего объема смесью ацетонитрил-вода (1:1) согласно табл. 2.

Например: для приготовления смеси стандартных растворов и с концентрациями по 5 мг/л в вайл вносят по 1 мл исходных рабочих растворов и с концентрациями 10 мг/л.

Для приготовления смеси рабочих стандартных растворов и с концентрацией:

- 2,0 мг/л - в вайл вносят 800 мкл смеси и с концентрацией 5 мг/л и добавляют 1 200 мкл смеси ацетонитрил-вода (1:1);

- 1,0 мг/л - в вайл вносят 400 мкл смеси и с концентрацией 5 мг/л и добавляют 1 600 мкл смеси ацетонитрил-вода (1:1) или 1 000 мкл смеси рабочих стандартных растворов и с концентрацией 2 мг/л добавляют 1 000 мкл смеси ацетонитрил-вода (1:1);

- 0,4 мг/л - в вайл вносят 800 мкл смеси и с концентрацией 1 мг/л и добавляют 1 200 мкл смеси ацетонитрил-вода (1:1);

- 0,2 мг/л - в вайл вносят 1 000 мкл смеси и с концентрацией 0,4 мг/л и добавляют 1 000 мкл смеси ацетонитрил-вода (1:1). При необходимости по аналогии с вышеизложенным делается нужное разбавление.

Таблица 2

Приготовление рабочих растворов и

Получаемые концентрации смеси стандартных растворов и , мг/л	Приготовление смеси стандартных растворов
5,0	1 мл (с = 10 мг/л) + 1 мл (с = 10 мг/л)
2,0	800 мкл смеси и (с = 5 мг/л) + 1 200 мкл смеси ацетонитрил-вода (1:1)
1,0	400 мкл смеси и (с = 5 мг/л) + 1 600 мкл смеси ацетонитрил-вода (1:1) или 1 000 мкл смеси и (с = 2 мг/л) + 1 000 мкл смеси ацетонитрил-вода (1:1)
0,4	800 мкл смеси и (с = 1 мг/л) + 1 200 мкл смеси ацетонитрил-вода (1:1)
0,2	1 000 мкл смеси и (с = 0,4 мг/л) + 1 000 мкл смеси ацетонитрил-вода (1:1)

6.2. Хранение стандартных растворов фумонизинов

Растворы хранения фумонизинов следует держать в стеклянной посуде с притертыми пробками в темном прохладном месте (при температуре около 0°С) до одного года и использовать для приготовления рабочих стандартных растворов. Смеси рабочих стандартных растворов хранят в вайлах из темного стекла в темном прохладном месте (при температуре около 0°С) в течение 1 недели.

Перед использованием рабочих стандартных растворов их следует довести до комнатной температуры и только после этого следует открывать пробки.

6.3. Приготовление буферных растворов

6.3.1. Приготовление 0,1 М фосфатного буферного раствора, рН = 3,0

Навеску натрия фосфорнокислого однозамещенного, 2-водного массой 7,8 г переносят в мерную колбу вместимостью 500 мл, добавляют 20-50 мл дистиллированной воды. Доводят объем раствора в колбе до метки и перемешивают. Срок хранения - 1 месяц в холодильнике.

6.3.2. Приготовление 0,08 М фосфатного буферного раствора, рН = 4,5

Навеску натрия фосфорнокислого однозамещенного, 2-водного массой 6,24 г переносят в мерную колбу вместимостью 500 мл, добавляют 20-50 мл дистиллированной воды. Доводят объем раствора в колбе до метки и перемешивают. Срок хранения - 1 месяц в холодильнике.

6.3.3. Приготовление 0,025 М фосфатного буферного раствора, рН = 7,0

Навеску натрия фосфорнокислого двузамещенного 12-водного массой 0,895 г переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, добавляют 10-20 мл дистиллированной воды. Доводят объем раствора в колбе до метки и перемешивают. Срок хранения - 1 месяц в холодильнике.

6.3.4. Приготовление фосфатного буферного раствора, рН = 7,4

Навеску натрия фосфорнокислого двузамещенного 12-водного массой 1,15 г, навеску натрия однозамещенного 2-водного массой 0,124 г и навеску натрия хлорида массой 1,74 г переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, добавляют 10-20 мл дистиллированной воды. Доводят объем раствора в колбе до метки и перемешивают. Срок хранения - 1 месяц в холодильнике.

7. Отбор и подготовка проб для анализа

7.1. Отбор проб

Для учета специфики отбора проб отдельных видов продуктов следует руководствоваться действующей нормативно-технической документацией:

- "Зерно. Правила приемки и методы отбора проб", ГОСТ 13586.3-83;

- "Крупа. Правила приемки и методы отбора проб", ГОСТ 27312-84;

- "Мука и отруби. Приемка и методы отбора проб", ГОСТ 27668-88;

- "Продукты пищевые консервированные. Отбор проб и подготовка их к испытанию", ГОСТ 8756.0-70.

Для получения среднего образца зерна, представительного по концентрации микотоксинов для всей партии, следует измельчить до гомогенизированного состояния двухкилограммовый исходный образец и выделить из этого размола средний образец зерна.

Для однородных продуктов (мука, крупа, детское питание, хлопья и др.) пробы следует отбирать в количестве единиц упаковки, соответствующих величине среднего образца (100-200 г), при условии, что продукт происходит из одной партии.

7.2. Подготовка проб для анализа

Отобранные пробы измельчают в течение 1-2 мин в лабораторной мельнице. При этом используют две параллельные пробы и одну - холостую.

7.2.1. Экстракция

7.2.1.1. Для однокомпонентных пищевых продуктов: навеску 10 г измельченной пробы помещают в плоскодонную коническую колбу на 100 мл, добавляют 50 мл смеси ацетонитрил-вода (50:50% об.). Экстрагируют на аппарате для встряхивания проб в течение 90 мин. Полученную смесь фильтруют через бумажный складчатый фильтр "синяя лента". Отбирают 5 мл фильтрата и добавляют 5 мл 0,1 М фосфатного буферного раствора, рН = 3,0. Полученный раствор центрифугируют в течение 15 мин при 2,5 тыс. об/мин.

7.2.1.2. Для проб детского питания и многокомпонентных пищевых продуктов экстракцию и из 10 г измельченной пробы проводят встряхиванием в 50 мл смеси ацетонитрил-метанол-вода (25:25:50% об.) в течение 120 мин. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр "синяя лента". К 2 мл супернатанта добавляют 8 мл фосфатного буферного раствора, рН = 7,4 и центрифугируют в течение 15 мин при 2,5 тыс. об/мин.

7.2.2. Очистка экстракта

7.2.2.1. Для однокомпонентных пищевых продуктов: перед использованием ОДС-патроны предварительно кондиционируют, пропуская последовательно по 2 мл ацетонитрила и 0,1 М фосфатного буферного раствора, рН = 3,0. Затем на патрон наносят 8,0 мл анализируемого экстракта и промывают 1,0 мл 0,1 М фосфатным буферным раствором, рН = 3. Фумонизины элюируют с патрона 2,0 мл смеси ацетонитрил-0,025 М фосфатного буферного раствора, рН = 7,0 (70:30% об.).

7.2.2.2. Для очистки проб детского питания и многокомпонентных пищевых продуктов на ИА-колонку наносят со скоростью 1-2 капли в секунду 8 мл полученного раствора, промывают 10 мл фосфатного буферного раствора, pH = 7,4. Фумонизины элюируют с колонки 1,5 мл метанола и 1,5 мл дистиллированной воды.

8. Выполнение измерений

8.1. Дериватизация фумонизинов о-фталевым альдегидом

Для приготовления ОФА-реагента 40 мг о-фталевого альдегида растворяют в 1 мл метанола, добавляют 5 мл 0,05 М водного раствора тетрабората натрия и 50 мкл 2-меркаптоэтанола. Полученный раствор хранят в темноте в течение 1 недели при t = 6°С.

Дериватизацию фумонизинов о-фталевым альдегидом проводили в течение 1 мин после смешивания 40 мкл пробы и 40 мкл ОФА-реагента.

8.2. Определение фумонизинов и методом ВЭЖХ

Условия ВЭЖХ: подвижная фаза ацетонитрил-метанол-0,08 М фосфатный буферный раствор (50:10:40% об.), рН 4,5, скорость подвижной фазы 1,3 мл/мин. Рекомендуется использовать перегнанный метанол, ацетонитрил и бидистиллированную воду. Все растворители необходимо предварительно отфильтровать.

Флуориметрический детектор устанавливают на длину волны возбуждающего излучения 335 нм, на линии эмиссии устанавливают эмиссионный фильтр с полосой пропускания 440 нм.

9. Обработка результатов измерения

9.1. Для построения калибровочного графика проводят хроматографический анализ серии рабочих растворов стандартов. В инжектор с помощью микрошприца вводят 20 мкл перемешанной в течение 1 мин смеси, состоящей из 40 мкл ОФА-реагента и 40 мкл рабочего раствора стандарта с концентрацией 5 мг/л, что соответствует 100 нг и 100 нг . Подобное делается для других стандартных растворов с концентрациями по 2,0, 1,0, 0,4, 0,2 мг/л, что в свою очередь соответствует 40, 20, 8 и 4 нг и во вколе. На основании полученных данных строят калибровочную кривую (зависимость площади хроматографического пика от концентрации фумонизина во вколе). В интервале линейности градуировочный график описывается уравнением прямой:

, где

S - площадь хроматографического пика;

с - концентрация фумонизина в очищенном экстракте, мг/кг;

а, b - коэффициенты градуировочного графика.

Для анализа проб в инжектор хроматографа вводят с помощью микрошприца 20 мкл смеси, перемешанной в течение 1 мин и состоящей из 40 мкл ОФА-реагента и 40 мкл очищенного экстракта. При наличии пика, совпадающего по времени удерживания с или , рассчитывают их концентрацию в очищенном экстракте с помощью уравнения градуировочного графика.

Для того чтобы рассчитать содержание фумонизинов в исходном образце необходимо концентрацию и в пробе умножить на коэффициент разбавления.

9.2. Коэффициент разбавления в случае использования С-18 колонок:

, где

Кр - коэффициент разбавления;

- объем смеси ацетонитрил-вода, взятой для экстракции, мл (50 мл);

М - навеска образца, взятого для анализа, г (10 г);

- объем водно-ацетонитрильного экстракта, взятого для анализа, мл (5 мл);

- объем смеси водно-ацетонитрильного экстракта и фосфатного буфера, взятых для центрифугирования, мл (10 мл);

- объем смеси после центрифугирования, взятой для твердофазной очистки, мл (8 мл);

- объем собранного элюата после стадии твердофазной очистки, мл (2 мл).

Расчет концентрации и в пробе проводится по формуле:

, где

С - концентрация и , мг/кг;

2,5 - коэффициент разбавления;

- концентрация в очищенном экстракте, мг/кг;

- концентрация в очищенном экстракте, мг/кг.

При высоких уровнях загрязнения фумонизинами кукурузы или продуктов ее переработки, экстракт перед реакцией дериватизации необходимо разбавить, в этом случае при расчете содержания фумонизинов в исходном образце, необходимо дополнительно учесть это разбавление .

, где

- коэффициент дополнительного разбавления экстракта.

В указанных условиях время удерживания находится для в диапазоне от 7,0 до 8,5, для - 24-27 мин. Примерный вид хроматограммы, полученной с помощью модельной смеси, где , представлен на рис. 1.

ГАРАНТ:

Нумерация пунктов приводится в соответствии с источником

9.2. Коэффициент разбавления в случае использования ИА-колонок:

Кр - коэффициент разбавления;

- объем смеси ацетонитрил-метанол-вода, взятой для экстракции, мл (50 мл);

М - навеска образца, взятого для анализа, г (10 г);

- объем ацетонитрил-метанол-водного экстракта, взятого для анализа, мл (2 мл);

- объем смеси ацетонитрил-метанол-водного экстракта и фосфатного буферного раствора, взятых для центрифугирования, мл (10 мл);

- объем смеси после центрифугирования, взятой для твердофазной очистки, мл (8 мл);

- объем собранного элюата после стадии твердофазной очистки, мл (3 мл).

Расчет концентрации и в пробе проводится по формуле:

, где

С - концентрация и , мг/кг;

9,375 - коэффициент разбавления;

- концентрация в очищенном экстракте, мг/кг;

- концентрация в очищенном экстракте, мг/кг.

При высоких уровнях загрязнения фумонизинами кукурузы или продуктов ее переработки экстракт перед реакцией дериватизации необходимо разбавить, в этом случае при расчете содержания фумонизинов в исходном образце необходимо дополнительно учесть это разбавление .

, где

- коэффициент дополнительного разбавления экстракта.

10. Вычисление результатов анализа

За окончательный результат испытаний принимается среднее арифметическое значение результатов двух параллельных определений.

Определяют допустимое расхождение между параллельными определениями r, используя r, % из табл. 3.

, мг/кг

, мг/кг

Если расхождение между параллельными определениями не превышает допустимого:

,

,

то среднее арифметическое принимают за результат анализа.

Таблица 3

Значение нормативов оперативного контроля сходимости при доверительной вероятности Р = 0,95

Концентрация, мг/кг	Токсин	Норматив оперативного контроля сходимости, r, %
		Способ твердофазной экстракции
		С18	ИА
		, %	, %
0,1		33	10
		-	26
0,5		28	12
		30	5
1,0		24	9
		22	26
5,0		30	32
		28	30

При превышении норматива r следует повторить измерения, используя резервные пробы. В случае повторного превышения указанного норматива, выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам анализа, устраняют их и повторяют анализ пробы.

11. Оперативный контроль результатов измерения

11.1. Алгоритм проведения оперативного контроля воспроизводимости

Периодичность контроля воспроизводимости измерений зависит от количества рабочих измерений за контролируемый период и определяется планами контроля.

Пробами для контроля являются рабочие пробы продуктов, продовольственного сырья. Отбирают 2 пробы, которые анализируют в точном соответствии с прописью методики, максимально варьируя условия проведения анализа, а именно используя разные наборы мерной посуды, разные партии реактивов и участие двух разных аналитиков. Целесообразно также проведение анализа этих аналитических проб в разных лабораториях.

11.2. Алгоритм проведения оперативного контроля погрешности

Периодичность контроля погрешности измерений зависит от количества рабочих измерений за контролируемый период и определяется планами контроля.

Образцами контроля являются рабочие пробы пищевых продуктов или продовольственного сырья. Отбирают пробу и разделяют ее на 2 равные части. Одну из них оставляют без изменений, а к другой добавляют раствор стандартов и в таком количестве, чтобы массовая доля каждого из них в пробе по сравнению с исходным значением увеличилась на 50-100%. Добавка должна вводиться в пробу перед началом пробоподготовки.

Обе пробы анализируют в точном соответствии с прописью методики и получают результаты анализа исходной пробы ( и ), мг/кг и пробы с добавкой ( и ). Определение проводят в одинаковых условиях, а именно: анализ проводит один аналитик, с использованием одного набора мерной посуды, реактивов, растворов и т.д.

Алгоритм проведения оперативного контроля погрешности с использованием метода добавок состоит в сравнении результата контрольного определения, равного разности между результатом контрольного измерения пробы с добавкой ( и ), пробы без добавки ( и ) и величиной добавки ( и ), с нормативом оперативного контроля К. Решение об удовлетворительной погрешности принимается при выполнении условия (при Р = 0,95)

Норматив оперативного контроля погрешности рассчитывают по формулам при проведении:

- внутрилабораторного контроля (Р = 0,90)

, мг/кг

, мг/кг;

- внешнего контроля (Р = 0,95)

, мг/кг

, мг/кг, где

, - абсолютные погрешности измерений для исходной пробы с добавкой, мг/кг;

, - абсолютные погрешности измерений для исходной пробы, мг/кг;

, - содержание определяемых компонентов в пробе;

и приведены в табл. 1.

При превышении норматива оперативного контроля погрешности эксперимент повторяют с использованием другой пробы. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и устраняют их.

12. Требования техники безопасности

При выполнении анализов необходимо соблюдать правила техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.005, ГОСТ 12.2.007.0 и ГОСТ 4658. Помещение лаборатории должно соответствовать санитарным правилам проектирования, оборудования, эксплуатации и содержания производственных и лабораторных помещений, предназначенных для проведения работ с органическими растворителями. Аналитическая лаборатория должна быть оснащена вентиляционными системами по ГОСТ 12.4.021.

13. Требования к квалификации исполнителя

К выполнению анализа и в пищевых продуктах допускаются лица со специальным высшим образованием или средним специальным образованием, владеющие техникой ВЭЖХ-анализа, прошедшие соответствующую подготовку и имеющие опыт работы в химической лаборатории.

14. Условия выполнения измерений

Температура окружающего воздуха от 15 до 25°С.

Относительная влажность воздуха не более 80% при 25°С.

Атмосферное давление 730-760 мм рт. ст.

Напряжение электропитания: 210-220 В. Частота переменного тока: 45-50 ГЦ.

Главный государственный санитарный врач Российской Федерации Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

Г.Г. Онищенко