Приложение С (справочное). Приготовление и калибровка суспензий

Приложение С
(справочное)

Приготовление и калибровка суспензий

С.1 Культуры эталонных штаммов

Чтобы улучшить повторяемость и воспроизводимость результатов, рекомендуется использовать третью (по крайней мере вторую) субкультуру, выращенную на агаризованной среде, полученную от культур, хранимых и приготовленных согласно [4], для приготовления посевного материала бактерий. При использовании Е. coli, P. aeruginosa, S. aureus субкультуры активируют в течение 18 - 24 ч. При использовании С. albicans пригодна первая или вторая субкультура, выращенная в течение 36 - 48 ч.

С.2 Приготовление клеточных суспензий

Берут 10  разбавителя и вносят в стерильную колбу вместимостью 100 , содержащую 5 г стеклянных бусинок. Петлей переносят клетки, выращенные на агаризованной среде, в разбавитель. Клетки должны быть ресуспендированы в разбавителе путем погружения петли и трения ее о стенку колбы с целью перемещения клеток в жидкость. Встряхивают колбу в течение 2 - 3 мин. (используя, если возможно, механическую мешалку). Удаляют верхнюю часть суспензии (избегая любого контакта со стеклянными бусинками) и переносят полученную суспензию в стерильную колбу (пробирку).

С.3 Калибровка суспензий

Регулируют число клеток в суспензии до значений (для С. albicans ) с использованием разбавителя и в соответствии с данными калибровки, полученными в лаборатории. Например, используют спектрофотометр [длина волны (62020) нм] и разовую кювету с длиной оптического пути 10 мм. Измеряют оптическую плотность суспензии и при необходимости разбавляют ее, чтобы довести плотность до определенного значения. Соответствующие значения оптической плотности были получены между 0,150 и 0,460 в зависимости от вида штаммов.