Приложение 5. Проверка качества казеиново-угольного агара

Приложение 5

Проверка качества казеиново-угольного агара

В связи с довольно сложным составом казеиново-угольной среды и большой чувствительностью ее к режиму стерилизации следует периодически проверять качество готовой среды. Для этой цели необходимо пользоваться свежевыделенными культурами коклюшного микроба. В стерильных пробирках делают 8 различных разведений взвеси 2-3-суточной культуры. Густота взвеси в первой пробирке должна соответствовать 5 млрд микробных тел в 1 мл по стандарту мутности для коклюшных микробов. Во 2-6-ю пробирки наливают по 4,5 мл стерильного физиологического раствора, в 7-ю наливают 2 мл и в 8-ю - 1 мл. Поверхность одной или двух чашек Петри с используемой средой делят на 2-4 или 8 секторов (в зависимости от питательной среды): 0,5 мл взвеси из 1-й пробирки переносят стерильной пипеткой во 2-ю пробирку и этой же пипеткой наносят 0,1 мл взвеси на сектор 1. Другой стерильной пипеткой перемешивают содержимое второй пробирки (вдуванием и выдуванием), переносят из нее 0,5 мл в 3-ю пробирку и 0,1 мл наносят на сектор 2 и т.д. Для каждого разведения следует употреблять отдельную стерильную пипетку, перемешивая ею содержимое пробирки. В 8-ю пробирку переносят из 7-й 1 мл взвеси, также перемешивая стерильной пипеткой, и наносят 0,1 мл на сектор 8. Чашку Петри осторожно, крышкой кверху (чтобы капли не слились) ставят в термостат и выдерживают в течение 3-5 суток. Если среда приготовлена правильно, то на первых трех секторах рост имеет вид сплошных бляшек, на секторах 4, 5 и 6 вырастают тесно расположенные колонии, а на секторах 7 и 8 - небольшое количество изолированных колоний. Если нет роста на последних 2 секторах, то средой пользоваться нельзя.

При использовании питательных сред с добавлением крови чашки Петри делят на 2 сектора, а при использовании сухих сред (КУА) с добавлением дрожжевого экстракта - на 4 сектора.

Схема приготовления разведений коклюшной культуры для проверки качества КУА

Номер пробирки	Количество физиологического раствора, мл	Объем вносимой взвеси из предыдущей пробирки, мл	Количество микробов в 1 мл
1	2	3	4
1	1,0	x (исходная взвесь)	5 000 000 000
2	4,5	0,5	500 000 000
3	4,5	0,5	50 000 000
4	4,5	0,5	5 000 000
5	4,5	0,5	500 000
6	4,5	0,5	50 000
7	2,0	0,5	10 000
8	1,0	1,0	5 000

В районных лабораториях ЦГиЭ можно использовать метод проверки качества питательной среды, предложенный Е.А. Кузнецовым. Посев колонии коклюшного микроба производят на 1/16 поверхности чашки со средой КУА, разлитой в чашки Петри. Всего проверяют 5-10 колоний. Учет роста культуры проводят через 48 ч. В случае роста культуры по всему сектору - среда хорошего качества; при росте на 1/2 сектора - замедленный рост коклюшного микроба; рост только на посевной площадке - среда плохая.