Приложение 9. Методика проведения смывов с целью контроля контаминации лаборатории продуктами ПЦР

Приложение 9

Методика проведения смывов с целью контроля контаминации лаборатории продуктами ПЦР

Назначение

Процедуру рекомендуется проводить в случае получения положительных сигналов при амплификации отрицательных контролей этапов экстракции и ПЦР или планово с необходимой периодичностью в зависимости от интенсивности работы (например, 1 раз в неделю - при ежедневном проведении исследований, но не реже, чем 1 раз в месяц). Взятие смывов проводят в первой половине рабочего дня.

Материалы:

- среда для взятия смывов - ТЕ-буфер (или деионизованная вода),

- палочки с ватными наконечниками (зонды с ватным тампоном),

- наборы реагентов для ПЦР, с которыми работает лаборатория.

Контрольные точки для смывов:

- рабочие и контактные поверхности лабораторного оборудования (автоматические пипетки, центрифуги, микроцентрифуги/встряхиватели, амплификаторы, термостаты, холодильники);

- поверхности лабораторных материалов (штативы, пакеты с реактивами, упаковки расходных материалов, ножницы, пинцеты, маркеры и др.);

- рабочие и контактные поверхности лабораторных столов, боксов, ламинарных шкафов;

- прочие контактные поверхности (ручки дверей, кнопки компьютеров, компьютерные мыши, телефоны, компьютерные столы, прочая лабораторная мебель).

Процедура взятия смывов

1) Надеть перчатки, протереть их салфеткой, смоченной 70% этиловым спиртом.

2) Отобрать необходимое количество стерильных пробирок, в стерильных условиях в каждую пробирку внести 300 мкл ТЕ-буфера (или деионизованной воды).

3) Промаркировать пробирки в соответствии с названиями контрольных точек.

4) Для взятия смыва с каждой контрольной точки выполнить следующее:

- открыть пробирку, смочить зонд с ватным тампоном в ТЕ-буфере (или деионизованной воде), после чего пробирку закрыть;

- вращательными движениями провести зондом по поверхности объекта (из списка контрольных точек);

- тщательно прополоскать рабочую часть зонда в ТЕ-буфере (или деионизованной воде), отжимая его о стенки пробирки и избегая разбрызгивания раствора;

- удалить зонд в контейнер для отходов.

5) Для взятия смывов с каждой новой контрольной точки использовать отдельный зонд.

6) При взятии смывов с ламинарного шкафа: первоначально открыть переднее стекло, взять смывы с пипеток, оборудования, штативов для наконечников и пробирок, с рабочих поверхностей, затем с ручек и кнопок. Далее закрыть переднее стекло и включить ультрафиолетовое облучение.

7) Пробирки со смывами перенести в зону постановки ПЦР.

Постановка ПЦР

ПЦР-исследование полученных смывов с контрольных точек проводится в обычном порядке по инструкции к набору реагентов, начиная с этапа амплификации ДНК.

Интерпретация результатов

- Результаты анализа смывов считаются достоверными только в случае получения корректных результатов для положительных и отрицательных контролей амплификации в соответствии с инструкцией к набору реагентов.

Контрольные точки, в которых выявлены положительные результаты ПЦР, необходимо подвергнуть обработке веществами, деградирующими ДНК (препараты, содержащие активный хлор, см. МУ 1.3.2569-09), и облучению в ультрафиолетовом спектре.