3 Метод А. Жидкость - жидкостное разделение ацетонитрилом и очистка на колонке с Florisil*(1)

3 Метод А. Жидкость - жидкостное разделение ацетонитрилом и очистка на колонке с Florisil*(1)

3.1 Сущность метода

(См. ссылку [3]).

Хлорорганические соединения вместе с жиром экстрагируют из пробы, применяя один из методов, описанных в ISO 3890-1/IDF 75-1. Экстракт выпаривают почти досуха, затем повторно растворяют в петролейном эфире и хлорорганические соединения выделяют с помощью ацетонитрила. После смешивания ацетонитрила с большим количеством воды хлорорганические соединения выделяют с помощью петролейного эфира. Данную органическую фазу очищают хроматографированием на колонке с Florisil, используя петролейный эфир/диэтиловый эфир в качестве элюирующего растворителя. Элюаты концентрируют и затем анализируют методом газожидкостной хроматографии (ГЖХ). Для сыра используют специальный метод.

3.2 Реактивы

Применяют реактивы только установленной аналитической квалификации, если не установлено иное, а также дистиллированную или деминерализованную воду или воду эквивалентной чистоты.

3.2.1 Петролейный эфир с температурой кипения в диапазоне от 40 до 60°С. Перегоняют над гидроксидом калия или гидроксидом натрия в гранулах.

3.2.2 Ацетонитрил (), насыщенный петролейным эфиром.

Для очистки смешивают 4 ацетонитрила с 1  ортофосфорной кислоты и 30 г пентоксида фосфора в стеклянной колбе с круглым дном. Добавляют стеклянные шарики и перегоняют при температуре от 81 до 82°С (температура не должна превышать 82°С).

Очищенный ацетонитрил смешивают с петролейным эфиром перед самым началом фазы разделения.

3.2.3 Диэтиловый эфир (), не содержащий пероксидов.

Перегоняют и стабилизируют, используя 2-процентный по объему чистый этанол ().

3.2.4 Элюирующий растворитель А: смесь диэтилового эфира (3.2.3) и петролейного эфира (3.2.1) (6 : 94 по объему). Обезвоживают 10 - 25 г безводного сульфата натрия (3.2.6).

3.2.5 Элюирующий растворитель В: смесь диэтилового эфира (3.2.3) и петролейного эфира (3.2.1) (15 : 85 по объему). Обезвоживают 10 - 25 г безводного сульфата натрия (3.2.6).

3.2.6 Сульфат натрия () гранулированный, безводный.

Нагревают при температуре (50025)°С в течение 4 ч. Охлаждают и хранят в стеклянной посуде с притертой пробкой.

3.2.7 Адсорбент: Florisil, 60 - 100 меш.

Активируют нагреванием при температуре (65025)°С в течение 4 ч и немедленно высыпают адсорбент в стеклянную посуду с хорошо притертыми пробками, хранят в темном месте. Перед использованием нагревают до температуры 130°С в течение не менее 5 ч.

Адсорбент должен храниться либо при температуре (1302)°С, либо при комнатной температуре в эксикаторе. В последнем случае его следует нагревать до температуры (1302)°С каждые два дня.

Каждую партию адсорбента проверяют время от времени следующим образом.

Пропускают 1  стандартного раствора гексана, содержащего 0,1  линдана, гептахлорэпоксида, альдрина и дильдрина, а также 0,3  эндрина, через адсорбционную колонку (см. ISO 3890-1/IDF 75-1:2009, пункт 9.3). Элюируют и выпаривают, как описано в 3.4.3. Проводят определение, используя газовую хроматографию.

Адсорбент считают удовлетворительным, если линдан, гептахлор, альдрин и гептахлорэпоксид обнаруживают в элюирующем растворителе А (3.2.4), а дильдрин и эндрин в элюирующем растворителе В (3.2.5).

3.2.8 Раствор хлорида натрия (NaCI), 2-процентный раствор.

Перед изготовлением раствора сухой хлорид натрия нагревают при температуре (50025)°С в течение 4 ч.

3.2.9 Этанол (), чистый.

3.2.10 Оксалат натрия () или оксалат калия ().

3.3 Оборудование

Применяют обычное лабораторное оборудование.

3.3.1 Хроматографические колонки внутренним диаметром 20 мм и длиной 300 мм с запорными кранами из политетрафторэтилена (ПТФЭ) и дисками из пористого стекла или тампоны из стекловаты.

3.3.2 Роторный испаритель (Kuderna-Danish*(2) или эквивалентный) с колбой вместимостью 500  и прикрепленной градуированной пробиркой.

3.3.3 Высокоскоростной смеситель.

3.3.4 Делительные воронки вместимостью 125 и 1000 .

3.4 Методика

3.4.1 Экстракция жира и хлорорганических соединений

3.4.1.1 Общие методы

См. ISO 3890-1/IDF 75-1 (приложение А).

3.4.1.2 Специальный метод для сыра

Достаточное количество измельченной пробы (для выделения 3 г жира), около 2 г оксалата натрия или калия (3.2.10) и 100  этанола (3.2.9) помещают в высокоскоростной смеситель (3.3.3) и смешивают в течение 2 - 3 мин. (если опыт обращения с продуктом показывает, что эмульсии не разрушатся при центрифугировании, то перед смешиванием добавляют 1  воды на 2 г пробы). Гомогенизированную суспензию переливают в емкость центрифуги вместимостью 500 , добавляют 50  диэтилового эфира (3.2.3) и энергично встряхивают в течение 1 мин. Добавляют 50  петролейного эфира (3.2.1) и энергично встряхивают в течение 1 - 2 мин. (или разливают в две емкости вместимостью 250  и экстрагируют каждую путем сильного встряхивания в течение 1 - 2 мин. с 25  петролейного эфира. Продолжают, как описано в ISO 3890-1/IDF 75-1 (А.6.3.3).

3.4.2 Жидкостное разделение

Взвешивают 1 - 3 г экстрагированного жира с точностью до 0,01 г, переносят в делительную воронку вместимостью 125  (3.3.4) и растворяют в 15  петролейного эфира (3.2.1). Добавляют 30  ацетонитрила, насыщенного петролейным эфиром (3.2.2), и энергично встряхивают в течение 1 - 2 мин. После разделения фаз переносят нижний слой ацетонитрила в делительную воронку вместимостью 1000  (3.3.4), содержащую 700  раствора хлорида натрия (3.2.8) и 100  петролейного эфира (3.2.1). Слой петролейного эфира, оставшийся в делительной воронке вместимостью 125 , энергично встряхивают три раза с порциями ацетонитрила (3.2.2) объемом 30 .

Соединяют экстракты ацетонитрила в делительной воронке вместимостью 1000  и осторожно встряхивают. Сливают нижнюю водную фазу во вторую делительную воронку вместимостью 1000  и встряхивают ее в течение 12 с со 100  петролейного эфира. Соединяют фазы петролейного эфира из обеих делительных воронок вместимостью 1000 . Воронки дважды промывают порциями воды или раствора хлорида натрия (3.2.8) объемом 100 . Обезвоживают петролейный эфир над сульфатом натрия (3.2.6) и фильтруют в колбу роторного испарителя (3.3.2) вместимостью 500  с прикрепленной градуированной пробиркой. Промывают сульфат натрия тремя порциями петролейного эфира (3.2.1) по 10 . Затем выпаривают раствор петролейного эфира до объема 10 , используя роторный испаритель (3.3.2).

3.4.3 Очистка на Florisil

В хроматографическую колонку (3.3.1) добавляют слой адсорбента 100 мм (3.2.7). Покрывают слоем 10 мм сульфата натрия (3.2.6) и промывают 40 - 50  петролейного эфира (3.2.1). В колонку (3.3.1) пипеткой добавляют 10  концентрата петролейного эфира (3.4.2), дважды ополаскивают емкость порциями петролейного эфира объемом примерно по 5 . Элюируют в колбу испарителя (3.3.2) с прикрепленной градуированной пробиркой, используя 200  элюирующего растворителя А (3.2.4). Скорость элюирования не должна превышать 5 . Сменив емкость, таким же образом элюируют, используя 200  элюирующего растворителя В (3.2.5).

Выпаривают оба элюата по отдельности до заданного небольшого объема, используя роторный испаритель (3.3.2). Каждый элюат проверяют с помощью газожидкостной хроматографии. Если требуется дополнительная очистка, то она может быть проведена во второй, заново приготовленной адсорбирующей колонке или как описано в ISO 3890-1/IDF 75-1 (приложение А).

Первый элюат содержит любые ГХБ, изомеры ГХЦГ, гептахлор, гептахлорэпоксид, альдрин, ДДЕ, ДДД и ДДТ. Второй элюат содержит дильдрин и эндрин.

3.5 Газовая хроматография

См. ISO 3890-1/IDF 75-1 (пункт 6.2). Относительно предварительных испытаний см. ISO 3890-1/IDF 75-1 (разделы 10 - 14).