Приложение J (обязательное). Инструкции по установлению условий проведения микробиологических эксплуатационных испытаний для стандартизованных питательных сред

Приложение J
(обязательное)

Инструкции по установлению условий проведения микробиологических эксплуатационных испытаний для стандартизованных питательных сред

J.1 Область применения

Настоящее приложение предоставляет руководителям проектов рабочих групп по стандартизации инструкции по установлению микробиологических эксплуатационных критериев, методов и контрольных штаммов при создании или пересмотре международных стандартов, касающихся микробиологического анализа (микробиологии пищевых продуктов или воды).

J.2 Общие положения

Микробиологические эксплуатационные требования (эксплуатационные критерии, методы контроля и цели), применимые к стандартизованным питательным средам, должны быть включены в каждый стандарт, касающийся микробиологического анализа.

Данные эксплуатационные требования могут включать:

- заимствованные или при необходимости пересмотренные требования, приведенные в настоящем стандарте, к питательным средам, изложенным в данном приложении: или

- требования, установленные для любой новой питательной среды, в соответствии с нормами, изложенными в данном приложении.

Примечание - Данное установление условий к требованиям проведения микробиологических эксплуатационных испытаний не распространяется на реактивы или среды для подтверждения.

J.3 Эксплуатационные критерии, методы и цели

Оцениваемые критерии (производительность, селективность, специфичность), используемые методы испытаний (качественные и количественные) и поставленные цели должны быть установлены в соответствии с характеристиками каждой питательной среды, как это показано в таблице J.1.

Критерии для питательных сред могут быть следующими:

- форма среды (бульон, агар);

- состав среды (селективная, неселективная);

- функция среды в стандартизованном методе (среда для обогащения, среда для разведения, среда для выявления, среда для подсчета).

Таблица J.1

Среза	Критерии и метод испытания
Селективный бульон для подсчета	Производительность (метод: количественный)(a) Селективность (качественный)(f)
Селективный агар для подсчета	Производительность (количественный)(b) Селективность (качественный)(g) Специфичность (качественный)(i)
Селективный бульон для обогащения	Производительность (качественный)(c) Селективность (качественный)(h)
Селективный агар для выявления	Производительность (качественный)(d) Селективность (качественный)(g) Специфичность (качественный)(i)
Неселективный агар для подсчета	Производительность (количественный)(b)
Неселективный бульон для обогащения	Производительность (качественный)(a)
Неселективный бульон для разведения	Производительность (количественный)(e)
Неселективный агар для выявления	Производительность (качественный)(d)
1 Производительность: целью данного эксплуатационного критерия является проверка способности к удовлетворительному росту целевых штаммов (и морфологии колоний) на агаровых средах. (а) Качественная производительность (жидкая среда): см. 8.4. Цель: результат должен быть равен 2 (удовлетворительный рост) для инокулята с не более 100 КОЕ целевого микроорганизма (см. 8.4.1). (b) Количественная производительность (агаровая среда): см. 7.2.1.1. Цель: Значение должно быть больше или равно 0,50 при сравнении селективной среды с неселективной эталонной средой, указанной в приложениях Е и F. Значение должно быть больше или равно 0,70 при сравнении неселективной среды с неселективной эталонной средой или как это установлено в стандарте или приложениях Е и F. Это также применимо в особых случаях, когда проводят сравнение с предыдущей партией. Колонии целевого микроорганизма должны иметь характерный внешний вид. (с) Качественная производительность (жидкая среда): см. 8.3. Цель: Не менее 10 колоний целевого микроорганизма наблюдают на селективной среде для выделения, используемой для выявления после инокуляции не более 100 КОЕ. (d) Качественная производительность (агаровая среда): см. 7.4. Цель: результат должен быть равен 2 (удовлетворительный рост) для целевого микроорганизма. Колонии целевого микроорганизма должны иметь характерный внешний вид. (e) Количественная производительность (жидкая среда): см. 8.2. Цель: для разбавителей количество микроорганизмов после периода контактирования должно быть в пределах 30% от первоначального количества. 2 Селективность: целью данного эксплуатационного критерия является проверка того, что мешающие (нецелевые) штаммы частично или полностью подавляются селективной средой. (f) Качественная селективность (жидкая среда): см. 8.3. Цель: испытуемые (нежелательные) микроорганизмы должны полностью подавляться. (g) Качественная селективность (агаровая среда): см. 7.4. Цель: испытуемые (нежелательные) микроорганизмы должны частично или полностью подавляться. (h) Качественная селективность (жидкая среда): см. 8.3. Цель: нежелательные микроорганизмы на неселективной агаровой среде, используемой для выявления, не должны проявлять никакого роста или их количество должно быть менее 10 КОЕ. 3 Специфичность: целью данного эксплуатационного критерия является проверка того, что мешающие (нецелевые) штаммы, которые не подавлены, не производят характерных колоний. (i) Качественная специфичность (агаровая среда): см. 7.4. Цель: колонии испытуемых нецелевых штаммов не имеют характерный внешний вид целевых микроорганизмов в стандартизованном методе. Данные критерии должны быть верифицированы при соблюдении стандартизованных температуры и периода времени инкубирования.

J.4 Выбор эксплуатационных контрольных штаммов

J.4.1 Общие положения

Цели различных эксплуатационных критериев и область применения стандартизованных методов должны определить выбор контрольных штаммов:

- целевых штаммов (производительность), выявленных и подсчитанных в рамках данного метода, и

- нецелевых штаммов (селективность, специфичность), являющихся мешающей флорой, которая обычно присутствует в анализируемых пробах.

Необходимо по возможности использовать контрольные штаммы, описанные в приложениях Е и F, которые уже были испытаны на данной среде.

При наличии соответствующего обоснования (генетическая нестабильность, недостаточная воспроизводимость результатов на предыдущих штаммах QC и т.п.) руководитель проекта может внести предложение по модификации требуемых штаммов в соответствии с инструкциями данного подраздела.

J.4.2 Оценка пригодности новых контрольных штаммов

Перед использованием новых штаммов их пригодность для использования в эксплуатационных испытаниях необходимо проверить и задокументировать. Это требует демонстрации воспроизводимости эксплуатационного контроля в не менее двух (а предпочтительно трех) независимых лабораториях при использовании двух или трех различных партий продукции со стандартизованной рецептурой или от различных производителей в каждой лаборатории.

J.4.3 Новые среды

Для каждой новой среды контрольные штаммы должны быть:

- предпочтительно отобранными из тех, которые уже описаны в приложениях Е и F;

- предварительно оценены и проверены на пригодность (см. J.4.2);

- или введены заново при следующих условиях:

- они предпочтительно должны иметь пищевое происхождение или быть получены из проб воды;

- они должны быть доступны из не менее двух международных коллекций штаммов (взаимно эквивалентных), по приемлемой цене:

- они должны быть предварительно оценены и проверены на пригодность (см. J.4.2).

J.4.4 Количество штаммов, используемых в соответствии с данным микробиологическим эксплуатационным критерием

Сноска а к таблице J.1 - Качественная производительность (жидкая среда): см. 8.4.

Два целевых штамма: штамм типа А и штамм типа В.

Тип А: штамм, испытываемый при эксплуатационном контроле качества производителем среды и конечным пользователем.

Тип В: штамм, требуемый для испытаний только производителем среды.

Сноска b к таблице J.1 - Количественная производительность (агаровая среда): см. 7.2.1.1.

Два целевых штамма: штамм А и штамм В.

Сноска с к таблице J.1 - Качественная производительность (жидкая среда): см. 8.3.

Два целевых штамма: штамм А и штамм В. каждый из которых ассоциирован с двумя нецелевыми штаммами.

Сноска d к таблице J.1 - Качественная производительность (агаровая среда): см. 7.4.

Два целевых штамма: штамм А и штамм В.

Сноска e к таблице J.1 - Количественная производительность (жидкая среда): см. 8.2.

Два целевых штамма: штамм А и штамм В.

Сноска f к таблице J. 1 - Качественная селективность (жидкая среда): см. 8.3.

Два нецелевых штамма: штамм А и штамм В.

Сноска g к таблице J.1 - Качественная селективность (агаровая среда): см. 7.4.

Два нецелевых штамма: штамм А и штамм В.

Сноска h к таблице J.1 - Качественная селективность (жидкая среда): см. 8.3.

Два нецелевых штамма: штамм А и штамм В.

Сноска i к таблице J.1 - Качественная специфичность (агаровая среда): см. 7.4.

Один нецелевой штамм: штамм А.