Приложение I (справочное). Количественные испытания жидких сред

Приложение I
(справочное)

Количественные испытания жидких сред

l.1 Общие положения

Настоящее приложение содержит описание методов количественных испытаний жидких сред, которые могут предоставить дополнительную информацию по сравнению с рабочими методами, описанными в разделе 8. Данные методы применимы главным образом для оценки сред, которые разрабатывают или используют в сравнительных исследованиях.

Качество жидкой среды в том, что касается обеспечения оптимального роста микроорганизмов, наиболее явно проявляется в течение ранней фазы роста микроорганизмов. Анализ продолжительности периода протекания лаг-фазы и роста микроорганизмов в течение ранней стадии лаг-фазы позволяет получить наиболее точную информацию о производительности и селективности целевых и нецелевых микроорганизмов как в испытуемом, так и в эталонном бульоне. Таким образом, если имеется необходимость в обнаружении лишь небольших различий в качестве питательных сред, посев штрихом из жидкой среды на поверхность плотной среды следует проводить после короткого периода инкубирования (например, продолжительностью 6 или 12 ч).

l.2 Метод количественных испытаний неселективных жидких питательных сред при помощи целевых микроорганизмов

l.2.1 Методика

- Отбирают количество пробирок, каждая из которых содержит не менее 10  среды или 10  порции из каждой испытуемой партии (см. 3.1.2).

- Используют рабочие культуры (см. 5.4.2.2).

- Проводят инокуляцию целевыми микроорганизмами: испытуемый бульон и плотную эталонную среду инокулируют каждым тест-микроорганизмом; количество клеток должно быть не более 100.

- Инкубирование инокулированных сред проводят в условиях, установленных в конкретных стандартах.

- Готовят достаточное количество разведений из каждой инкубированной среды для достижения количества колоний, которое поддается подсчету (см. 5.4.2.5).

- Отмеренный объем (например, 10 ) распределяют по поверхности неингибирующей агаровой среды в чашке Петри (см. 7.2.2.1.1).

l.2.2 Подсчет и интерпретация результатов

После инкубирования подсчитывают количество колоний в чашках (см. 7.2.2.1.1 и 7.2.2.1.2). Интерпретация результатов будет зависеть от цели испытания, например, сравнения с предыдущей партией, эталонной средой или эталонным материалом.

Концентрация целевых микроорганизмов в испытуемом бульоне должна быть в диапазоне от до .

l.2.3 Блок-схема для количественного метода для неселективных жидких питательных сред с применением целевых микроорганизмов

На рисунке I.1 приведена блок-схема для количественного метода для неселективных жидких питательных сред с применением целевых микроорганизмов.

Рисунок l.1 - Блок-схема для проведения эксплуатационных испытаний неселективных жидких питательных сред с применением целевых микроорганизмов (см. J.2.1 и J.2.2)

l.3 Метод количественных испытаний селективных жидких питательных сред при помощи целевых и нецелевых микроорганизмов

l.3.1 Методика

- Отбирают количество пробирок, каждая из которых содержит не менее 10  среды или 10  порции из каждой испытуемой партии (см. 3.2.2).

- Используют рабочие культуры, как это описано в 5.4.2.

- Инокуляция целевыми микроорганизмами: инокулируют испытуемый бульон, эталонный бульон и плотную контрольную среду каждым тест-микроорганизмом, количество клеток должно быть не более 100. Плотную эталонную среду используют для подсчета КОЕ в инокуляте.

- Инокуляция нецелевыми микроорганизмами: инокулируют испытуемый бульон, эталонный бульон и плотную эталонную среду каждым тест-микроорганизмом, количество клеток должно быть не менее 1000.

- Инокуляция целевым и нецелевым микроорганизмами для получения смешанной культуры: для испытаний смешанных культур в селективной среде инокулируют испытуемый бульон, эталонный бульон и плотную контрольную среду целевым микроорганизмом (не более 100 клеток) и нецелевым микроорганизмом (не менее 1000 клеток) в одной и той же пробирке или на одной и той же чашке. При испытании смешанных культур распределение инокулята должно проводиться по возможности на слое неселективного агара, что позволит дифференцировать микроорганизмы смешанной культуры (например, агар с MUG для подсчета Escherichia coli или Salmonella spp.). Когда нет возможности различить смешанные культуры на неселективном агаре, необходимо использовать среды с селективным агаром при условии, что их эксплуатационные характеристики были предварительно проверены.

- Инкубируют среды в условиях, установленных в конкретных стандартах.

Отбирают отмеренный объем или при необходимости объем после разведения от каждого бульона и распределяют по поверхности слоя неингибируюшего агара в случае пробирок, содержащих только целевые или только нецелевые микроорганизмы, как это описано в 8.2.2. В случае пробирок, содержащих и целевые, и нецелевые микроорганизмы, инокулят распределяют по поверхности слоя той же самой селективной среды, что использовалась выше.

Для получения количества колоний в чашках, которое поддается подсчету, допускается использовать модифицированный метод поверхностного прикапывания Miles - Misra, спиральный дозатор или иные системы прикапывания.

l.3.2 Подсчет колоний, вычисления и интерпретация результатов

На каждом слое подсчитывают колонии целевых и нецелевых микроорганизмов и рассчитывают выход по сравнению с эталонным бульоном, учитывая при этом разведения, использованные для подсчета (при необходимости). В случае смешанных культур проводят различие разных видов.

Расчеты и интерпретация зависят от цели исследования. Интерпретация результатов зависит от цепи испытания, например, в том, что касается сравнения с предыдущей партией, эталонной средой или эталонным материалом.

Концентрация целевого микроорганизма должна быть в диапазоне от до , и данный микроорганизм должен быть преобладающим в селективной среде.

В случае смешанных культур выход целевого микроорганизма не должен быть снижен по сравнению с выходом из чистой культуры целевого микроорганизма.

l.3.3 Блок-схема для количественного метода для селективных жидких питательных сред с применением целевого и нецелевого микроорганизмов

На рисунке I.2 приведена блок-схема для количественного метода для селективных жидких питательных сред с применением целевого и нецелевого микроорганизмов.

Рисунок l.2 - Блок-схема количественного испытания селективных жидких питательных сред с применением целевых и нецелевых микроорганизмов (см. l.3.1 и I.3.2)