Методические указания МУК 4.1.3427-17 "Измерение массовой концентрации комплексного соединения инозина с солью моно[4-(ацетиламино)бензоата] с 1-(диметиламино)-2-пропанолом (1:3) (инозин пранобекс) в воздухе рабочей зоны методом спектрофотометрии" (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 21 февраля 2017 г.)

Методические указания МУК 4.1.3427-17
"Измерение массовой концентрации комплексного соединения инозина с солью моно[4-(ацетиламино)бензоата] с 1-(диметиламино)-2-пропанолом (1:3) (инозин пранобекс) в воздухе рабочей зоны методом спектрофотометрии"
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 21 февраля 2017 г.)

Свидетельство о государственной метрологической аттестации N 01.00225/205-10-16.

1. Назначение и область применения

Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода спектрофотометрии для измерений массовой концентрации инозина пранобекса в воздухе рабочей зоны в диапазоне массовых концентраций 2,0-16,0 .

Методические указания носят рекомендательный характер.

2. Характеристика вещества

2.1. Физико-химические свойства

Инозин пранобекс

или

Молекулярная масса: 1115,23.

Регистрационный номер CAS: 36703-88-5.

Инозин пранобекс - белый или почти белый кристаллический порошок, легко растворим в воде, практически не растворим в эфире, очень мало растворим или практически не растворим в метаноле.

Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.

2.2. Токсикологическая характеристика

Инозин пранобекс - производное пурина, иммуностимулирующий комплекс соли пара-ацетамидобензоата диметиламиноизопропанола и инозина в молярном отношении 3:1.

Инозин пранобекс относится к классу иммунотропных препаратов группы иммуномодуляторов, малоопасен при поступлении внутрь, не обладает местным раздражающим действием на кожу и слизистые оболочки, при повторном введении и ингаляции обладает общетоксическим действием.

Ориентировочный безопасный уровень воздействия (ОБУВ) инозина пранобекса в воздухе рабочей зоны 4 .

3. Погрешность измерений

При соблюдении всех регламентированных условий и проведении анализа в точном соответствии с данной методикой при выполнении измерений массовой концентрации инозина пранобекса метрологические характеристики не превышают значений, представленных в табл. 1 (при доверительной вероятности Р = 0,95).

Таблица 1

Метрологические характеристики

Диапазон измерений массовой концентрации инозина пранобекса,	Показатель точности (границы относительной погрешности), , % при Р = 0,95	Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости), , %	Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадратическое отклонение воспроизводимости), , %	Предел повторяемости, r, %, Р = 0,95, n = 2	Критическая разность для результатов анализа, полученных в двух лабораториях, , %
От 2,0 до 8,0 вкл.	20	5	8	14	20
Св. 8,0 до 16,0 вкл.	11	2,5	4	7	10

4. Метод измерений

Измерение массовой концентрации инозина пранобекса выполняют методом спектрофотометрии.

Метод определения основан на способности растворов инозина пранобекса в воде поглощать УФ-излучение.

Измерение проводят при длине волны 259 нм.

Отбор проб проводят с концентрированием на аналитические аэрозольные фильтры.

Минимально определяемое количество инозина пранобекса в анализируемом объеме раствора пробы - 20 мкг.

Нижний предел измерений массовой концентрации инозина пранобекса в воздухе - 2,0 (при отборе 10,0 воздуха).

Метод специфичен в условиях производства лекарственной формы, содержащей инозин пранобекс. Определению не мешают вспомогательные вещества: повидон (коллидон 30), маннитол, крахмал пшеничный, магния стеарат.

5. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы

5.1. Средства измерений

Спектрофотометр. Диапазон измерений (54 000-11 000) , воспроизводимость волновых чисел
Весы лабораторные с наибольшим пределом взвешивания 200 г, предел допустимой погрешности взвешивания мг	ГОСТ OIML R 76-1-11
Аспирационное устройство двухканальное с диапазоном расхода 0,5-5,0 и пределом допустимой погрешности	ТУ 4215-000-11696625-03
Колбы мерные, 2-50-2, 2-100-2	ГОСТ 1770-74
Пипетки 1-1-2-1, 1-1-2-5, 1-1-2-10	ГОСТ 29227-91
Пробирки мерные с пришлифованными пробками, П-2-10-14/23 ХС	ГОСТ 1770-74
Секундомер	ГОСТ 8.423-81

Примечание. Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими характеристиками.

5.2. Реактивы

Инозин пранобекс с содержанием основного вещества не менее 95,0% в пересчете на сухое вещество	ФС 000805-260314
Вода дистиллированная	ГОСТ 6709-72

Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией.

5.3. Вспомогательные устройства и материалы

Аналитические аэрозольные фильтры гидрофильные на основе ацетилцеллюлозы с площадью рабочей поверхности 10 (фильтры)	ТУ 95-1892-89
Фильтродержатели	ТУ 95.72.05-77
Фильтры бумажные обеззоленные средней плотности (фильтры бумажные)	ТУ 6-09-1678-77
Бюксы стеклянные, СВ 24/10	ГОСТ 25336-82
Палочки стеклянные	ГОСТ 25336-82
Воронки химические	ГОСТ 25336-82
Кюветы кварцевые с толщиной оптического слоя 10 мм
Дистиллятор	ГОСТ Р 50444-92
Шкаф сушильный	ТУ 61-1-721-79

Примечание. Допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

6. Требования безопасности

6.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.007-76, ГОСТ 12.1.005-88 с изменением N 1.

6.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ должны соблюдаться требования противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91. Должны быть в наличии средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Необходимо провести обучение работающих правилам безопасности труда согласно ГОСТ 12.0.004-90.

6.3. При выполнении измерений с использованием спектрофотометра соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-09 и инструкцией по эксплуатации прибора.

6.4. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать ПДК и ОБУВ, установленные ГН 2.2.5.1313-03 и ГН 2.2.5.2308-07.

7. Требования к квалификации оператора

К выполнению измерений и обработке их результатов допускается специалист, имеющий высшее образование, опыт работы в химической лаборатории, прошедший обучение и владеющий техникой спектрофотометрического анализа, освоивший метод анализа и уложившийся в нормативы оперативного контроля при проведении процедур контроля погрешности анализа.

8. Требования к условиям измерений

8.1. Условия приготовления растворов и подготовки проб к анализу:

- температура воздуха	;
- атмосферное давление	(84-106) кПа;
- относительная влажность воздуха, не более	80%.

8.2. Выполнение измерений на спектрофотометре проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

9. Подготовка к выполнению измерений

Перед выполнением измерений проводят следующие работы: приготовление растворов, подготовка спектрофотометра, установление градуировочной характеристики, контроль стабильности градуировочной характеристики, отбор проб воздуха.

9.1. Приготовление растворов

9.1.1. Основной раствор инозина пранобекса. Основной раствор инозина пранобекса с массовой концентрацией 500 готовят растворением г инозина пранобекса в воде дистиллированной в мерной колбе вместимостью 100 .

Раствор устойчив в течение двух недель при хранении в холодильнике.

9.1.2. Рабочий раствор инозина пранобекса. Рабочий раствор инозина пранобекса с массовой концентрацией 100 готовят разбавлением 10 основного раствора инозина пранобекса водой дистиллированной в мерной колбе вместимостью 50 .

Раствор устойчив в течение недели при хранении в холодильнике.

9.2. Подготовка спектрофотометра

Подготовку спектрофотометра проводят в соответствии с руководством по его эксплуатации.

9.3. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость оптической плотности раствора от массы инозина пранобекса, устанавливают по шести сериям измерений по шести концентрациям вещества в каждой серии согласно табл. 2.

Таблица 2

Растворы для установления градуировочной характеристики при определении инозина пранобекса

Номер градуировочного раствора	Объем основного раствора инозина пранобекса с массовой концентрацией 500 ,	Объем рабочего раствора инозина пранобекса с массовой концентрацией 100 , N 1,	Содержание инозина пранобекса на фильтре, мкг	Массовая концентрация инозина пранобекса в градуировочном растворе,	Содержание инозина пранобекса в анализируемом объеме градуировочного раствора, мкг
1	0,00	0,00	0,0	0,0	0,0
2	0,00	0,20	20,0	2,0	20,0
3	0,00	0,30	30,0	3,0	30,0
4	0,10	0,00	50,0	5,0	50,0
5	0,16	0,00	80,0	8,0	80,0
6	0,24	0,00	120,0	12,0	120,0
7	0,32	0,00	160,0	16,0	160,0

Градуировочные растворы устойчивы в течение суток.

На фильтры, помещенные в бюксы, пипеткой вместимостью 1 наносят основной раствор инозина пранобекса с массовой концентрацией 500 и рабочий раствор инозина пранобекса с массовой концентрацией 100 в соответствии с табл. 2. Фильтры подсушивают при комнатной температуре и с помощью пипетки вместимостью 5 приливают по 5 воды дистиллированной и оставляют на 15 минут, периодически помешивая стеклянной палочкой для лучшего растворения вещества. Затем фильтры тщательно отжимают, растворы сливают в пробирки мерные вместимостью. 10 . Фильтры повторно обрабатывают 5 воды дистиллированной и оставляют на 15 минут, периодически помешивая стеклянной палочкой, затем фильтры тщательно отжимают и удаляют. Растворы объединяют в мерных пробирках вместимостью 10 и доводят объем до метки водой дистиллированной.

Оптическую плотность полученных градуировочных растворов измеряют в кювете с толщиной поглощающего слоя 10 мм при длине волны 259 нм по отношению к раствору сравнения, не содержащему определяемого вещества (табл. 2, раствор N 1).

Строят градуировочную характеристику: на ось ординат наносят значения оптических плотностей градуировочных растворов, на ось абсцисс - соответствующие им содержания инозина пранобекса в мкг.

9.4. Контроль стабильности градуировочной характеристики

Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят не реже 1 раза в квартал, а также при смене реактивов и изменении условий анализа (после ремонта и поверки прибора). Один раз в год градуировочную характеристику устанавливают заново.

Для контроля стабильности готовят три градуировочных раствора по п. 9.3 (в начале, середине и конце диапазона измерений) и анализируют в точном соответствии с методикой.

Градуировочную характеристику считают стабильной, если для каждого контрольного образца выполняется условие:

, где (1)

, - значение оптической плотности образца инозина пранобекса для контроля, измеренное и найденное по градуировочной характеристике;

- норматив контроля, , где

- границы относительной погрешности, % (табл. 1).

Если условие стабильности не выполняется только для одного образца, то выполняют повторное измерение этого образца с целью исключения результата, содержащего грубую ошибку.

Если градуировочная характеристика не стабильна, выясняют причины нестабильности и повторяют контроль стабильности с использованием других образцов для установления градуировочной характеристики, предусмотренных методикой. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики ее устанавливают заново.

9.5. Отбор проб воздуха

Отбор проб воздуха проводят в соответствии с ГОСТ 12.1.005-88 с изменением N 1 "ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны" и Р 2.2.2006-05 (прилож. 9) "Общие методические требования к организации и проведению контроля содержания вредных веществ в воздухе рабочей зоны", раздел 2 "Контроль соответствия максимальным ПДК".

Одновременно отбирают две параллельные пробы.

Воздух с объемным расходом 2 аспирируют через фильтр, помещенный в фильтродержатель, снабженный металлической сеткой. Для определения массовой концентрации инозина пранобекса на уровне 2 (1/2 ОБУВ) необходимо отобрать не менее 10 воздуха в течение 5 мин.

Пробы можно хранить в бюксах с пришлифованными крышками в течение недели.

10. Выполнение измерения

Фильтр с отобранной пробой переносят в бюкс и с помощью пипетки вместимостью 5 приливают 5 воды дистиллированной и оставляют на 15 минут, периодически помешивая стеклянной палочкой для лучшего растворения вещества. Затем фильтр тщательно отжимают, раствор сливают в другой бюкс. Фильтр повторно обрабатывают 5 воды дистиллированной, оставляют на 15 минут, периодически помешивая стеклянной палочкой, затем фильтр тщательно отжимают и удаляют. Оба раствора последовательно фильтруют на химической воронке через фильтр бумажный в мерную пробирку с пришлифованной пробкой вместимостью 10 . Объем раствора доводят до метки водой дистиллированной и далее анализ проводят аналогично градуировочным растворам.

Оптическую плотность полученного анализируемого раствора пробы измеряют в кювете с толщиной поглощающего слоя 10 мм при длине волны 259 нм по отношению к раствору сравнения, используя чистый фильтр. Раствор сравнения необходимо предварительно профильтровать через фильтр бумажный.

Количественное определение содержания инозина пранобекса в анализируемом объеме раствора пробы проводят по предварительно построенной градуировочной характеристике.

Примечание. Фильтрование растворов проб проводится для удаления нерастворимых в воде вспомогательных веществ, входящих в состав лекарственных форм, содержащих инозин пранобекс.

11. Вычисление результатов измерений

Массовую концентрацию инозина пранобекса в воздухе рабочей зоны С, , вычисляют по формуле:

, где (2)

а - содержание инозина пранобекса в анализируемом объеме раствора пробы, найденное по градуировочной характеристике, мкг;

- объем воздуха, отобранный для анализа и приведенный к стандартным условиям (прилож. 1).

За результат измерений принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости:

, где (3)

, - результаты параллельных определений массовой концентрации инозина пранобекса в воздухе рабочей зоны, ;

r - значение предела повторяемости, % (табл. 1).

Если условие (3) не выполняется, выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и повторяют выполнение измерений в соответствии с требованиями методики измерений.

12. Оформление результатов измерений

Результат количественного химического анализа представляют в виде:

, при Р = 0,95, где

- среднее арифметическое значение результатов n определений, признанных приемлемыми, ;

- границы относительной погрешности измерений, % (табл. 1).

Если полученный результат анализа ниже нижней (выше верхней) границы диапазона измерений, то производят следующую запись в журнале: "массовая концентрация инозина пранобекса менее 2,0 (более 16,0 )".

13. Контроль результатов измерений

13.1. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости

Проверку приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости проводят:

а) при возникновении спорных ситуаций между двумя лабораториями;

б) при проверке совместимости результатов измерений, полученных при сличительных испытаниях (при проведении аккредитации лабораторий и инспекционного контроля).

Для проведения проверки приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости каждая лаборатория использует пробы, оставленные на хранение.

Приемлемость результатов измерений, полученных в двух лабораториях, оценивают сравнением разности этих результатов с критической разностью по формуле:

, где (4)

, - средние значения массовой концентрации инозина пранобекса, полученные в первой и второй лабораториях, ;

- значение критической разности, % (табл. 1).

Если критическая разность не превышена, то приемлемы оба результата измерений, проводимых двумя лабораториями, и в качестве окончательного результата используют их среднеарифметическое значение. Если критическая разность превышена, то выполняют процедуры, изложенные в ГОСТ Р ИСО 5725-6-02 (п. 5.3.3).

При разногласиях руководствуются ГОСТ Р ИСО 5725-6-02 (п. 5.3.4).

13.2. Контроль качества результатов измерений при реализации методики в лаборатории

Контроль качества результатов измерений в лаборатории при реализации методики осуществляют по ГОСТ Р ИСО 5725-6-02, используя контроль стабильности среднеквадратического (стандартного) отклонения повторяемости по п. 6.2.2 ГОСТ Р ИСО 5725-6-02 и показателя правильности по п. 6.2.4 ГОСТ Р ИСО 5725-6-02.

Рекомендуется устанавливать контролируемый период так, чтобы количество результатов контрольных измерений было от 20 до 30.

При неудовлетворительных результатах контроля, например, при превышении предела действия или регулярном превышении предела предупреждения, выясняют причины этих отклонений, в том числе проводят смену реактивов, проверяют работу оператора.

Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

А.Ю. Попова