Приложение N 3. Методы фиксации и окраски материала при цитологическом исследовании

Приложение N 3

Методы фиксации и окраски материала при цитологическом исследовании

Если доставлены капли жидкости или гноевидные массы, весь материал распределяется на стеклах в виде мазков. Если присланы - сгусток крови, мокрота, слизевидные массы, густая жидкость - весь материал необходимо поместить на чашки Петри и препаривать на белом фоне, отбирая видимые включения (хлопья, беловатые крошковатые гноевидные комочки, прозрачные крупинки, нити), и распределяя их на предметных стеклах в виде тонких мазков (5-10). Если каких-либо включений не видно, следует приготовить 8-10 мазков из разных участков материала, предварительно осторожно его помешав. Доставленную жидкость следует обязательно центрифугировать целиком (при количествах ее до 50-мл) или, взяв часть ее со дна сосуда в 4-6 центрифужных пробирках при 3000-10 000 об/мин в течение 5-7 минут. После центрифугирования учитываются характер осадка и надсадочной жидкости: надосадочная жидкость осторожно сливается или отсасывается пипеткой. Из осадка готовится возможно большее число мазков (10-20). Оставшийся материал сохраняется в холодильнике при температуре до конца исследования.

В зависимости от характера объекта применяются различные методы окраски цитологических препаратов.

Для пунктатов опухолей и опухолевидных образований различной локализации, отделяемого из соска, с раневой поверхности, с язв, с эрозий, для промывных вод, плевральной и асцитической жидкости, содержимого различных полостей, объектов, полученных при эндоскопическом исследовании, соскобов отпечатков с кусочков тканей, полученных при биопсии и от трупов - основной диагностической окраской является панхромная окраска азурэозиновыми смесями в различной модификации (по Романовскому, по Паппенгейму, по Лейшману).

Для слизевидных объектов-мокроты, отделяемого от шейки матки и влагалища, прямой кишки, а также слизевидных пунктатов и материалов из очагов некроза ткани - наиболее рациональной является окраска гематоксилин-эозином в различных модификациях, из которых применительно к мазкам наилучшей следует признать окраску гематоксилином, приготовленным по Карачи: 1-фиксация мазка в смеси Никифорова в течение 15 минут: 2 - прополаскивание в этиловом спирте 70° и 50°; 3 - промывка в дистиллированной воде; 4 - окраска гематоксилином в течение 10-15 минут; 5 - ополаскивание в спиртах восходящей концентрации 50°, 70', 96°; 7 - окраска в 0,3%. спиртовом растворе желтоватого эозина - 2 минуты; 8 - отмывание от эозина в двух спиртах 96°; 9-высушивание препарата.

При срочном цитологическом исследовании используется ускоренный метод окраски по Паппенгейму - на подсохший препарат наливают краску - фиксатор Май-Грюнвальда на 2 минуты, смывают ее дистиллированной водой и докрашивают мазок стечение 3 минут смесью 0,1.% водных растворов красок азур-2 и эозина в соотношении 3:2 без разведения их дистиллированной водой, затем краска смывается дистиллированной водой, а мазок высушивается осторожным промоканием фильтровальной бумагой.