Методические указания по определению базаграна в воде, почве, зерне и растительном материале (утв. заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 19 октября 1979 г. N 2095-79)

1. Характеристика анализируемого пестицида

Активное вещество базаграна (синонимы: бентазон, БАСФ 351) - 3-изопропилбенз-2,1,3-тиадиазино-4-диоксид-2,2).

Структурная формула:

Суммарная формула: .

Молекулярная масса базаграна: 240,3.

Точка плавления: 137-139°С.

Растворимость (в г в 100 г растворителя): вода 0,05, этанол 86,1; ацетон 150,7; циклогексан 0,02; бензол 3,3; диэтиловый эфир 61,6; этилацетат 65; хлороформ 18. Используется в виде водного раствора. Малотоксичен для теплокровных животных, для крыс 110,0 мг/кг.

Применяется для уничтожения ряда устойчивых к 2,4-Д сорняков на посевах сои, риса, фасоли, зерновых.

2. Методика определения базаграна в воде, почве, зерне и растительном материале методом тонкослойной хроматографии

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на экстракции пестицида из анализируемых проб органическим растворителем, очистке экстракта и хроматографировании в тонком слое адсорбента.

Подвижной фазой служит смесь органических растворителей (см. табл.). В качестве адсорбента используют силикагель либо пластинки "Силуфол". Проявление хроматограмм можно осуществить двумя способами: I - термическое разложение базаграна, диазотирование нитритом натрия в солянокислой среде, азосочетание солей фенилдиазония с (либо с N-(1-нафтил)-этилендиамином); II - активация базаграна УФ-светом, хлорирование и взаимодействие с о-толидином.

Количественное определение производится путем сравнения интенсивности окраски и размера пятен пробы и стандартных растворов.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

Диапазон определяемых концентраций - 1-10 мкг.

Нижний предел обнаружения 0,5 мкг, для воды 0,05 мг/л, для почвы 0,1 мг/кг, для зерна 0,2 мг/кг.

Размах варьирования R = 95 + 70 = 25.

Среднее значение определения стандартных растворов пестицида - 90% (для воды), 73% (для почвы), 88% (для зерна).

Стандартное отклонение - 6,3% (для воды), 10% (для почвы), 11,45% (для зерна).

Относительное стандартное отклонение - 7% (для воды), 13% (для почвы), 13,1% (для зерна).

Доверительный интервал среднего при p = 0,95 и n = 5, % (для воды), % (для почвы), % (для зерна).

Определению базаграна не мешают арезин, диурон, линурон, монурон, пропанид, солан, фалоран, применяемые на зерновых культурах.

2.2. Реактивы и растворы

Ацетон, х.ч., ГОСТ 2603-71.

Бензол, х.ч., ГОСТ 5955-75.

н-Гексан, х.ч., ТУ 6-09-3375-78.

Гипс (кальций сернокислый ). В течение двух суток прокаливают при 180°С и просеивают через сито 100 меш.

Калий марганцевокислый, ГОСТ 5.1071-71.

Кислота соляная, х.ч., ГОСТ 3118-67.

Кислота соляная, 0,1 н раствор.

Кислота фосфорно-молибденовая, 40% раствор, ТУ 6-09-3540-74.

Натр едкий, ГОСТ 4328-66, 0,2% раствор.

Натрий сернокислый безводный, ГОСТ 4166-76.

Пластинки "Силуфол", 150х150 мм, Т-4-56068-76 (ЧССР).

Силикагель Л (5-40 мк) (ЧССР).

о-Толидин, ч., МРТУ 6-09-6337-69.

Хлороформ, х.ч., ГОСТ 200-15-74.

Этилацетат, х.ч., ГОСТ 5.1070-71.

Эфир диэтиловый (для наркоза), Фармакопея СССР.

Проявляющий раствор N 1. К смеси, состоящей из 46 мл дистиллированной воды и 4 мл концентрированной соляной кислоты, прибавляют 1 г азотистокислого натрия.

Проявляющий раствор N 2, 3 г едкого кали растворяют в 50 мл воды, прибавляют 0,5 г -нафтола.

Проявляющий раствор N 3. 1% водный раствор N-/1-нафтил-этилендиамина дигидрохлорида.

Стандартный раствор базаграна (концентрация 500 мкг/мл).

2,5 мг базаграна (х.ч.) растворяют в ацетоне в мерной колбе на 50 мл.

2.3. Посуда и приборы

Баня водяная, ТУ 64-1-2850-76.

Вакуумно-ротационный испаритель, ИП-ТУ-25-11-310-69, или прибор для отгонки растворителя, МРТУ 25-11-67-67.

Воронка Бюхнера емк. 50-100 мл.

Воронки химические, диаметр 6 см, ГОСТ 86-13-64.

Воронки делительные емк. 100, 250, 500 мл, ГОСТ 10054-75.

Камера для опрыскивания, ТУ-11-430-70.

Камера для хроматографирования размером 150х200, 105х165 мм, ГОСТ 10565-63.

Колбы мерные емкостью 50, 100 мл, ГОСТ 1770-74.

Колбы н/ш емкостью 100, 250, 500 мл, ГОСТ 10394-63.

Колбы круглодонные нш емкостью 150, 250 мл, ГОСТ 10394-63.

Лампа ртутно-кварцевая ОКН-11, ТУ 64-1-1618-72.

Микропипетки, ГОСТ 1770-74 (для нанесения стандартного раствора).

Насос масляный, ГОСТ 8613-64.

Пластинки стеклянные размером 9х12 см.

Пипетки емкостью 1, 5, 10 мл, ГОСТ 1770-74.

Прибор для встряхивания, МРТУ 2451-64.

Цилиндры мерные емкостью 25, 50, 100, 250, 500 мл, ГОСТ 1770-74.

2.4. Подготовка к определению

2.4.1. Приготовление пластинок

Стеклянные пластинки тщательно моют раствором хромовой смеси, промывают проточной водой, затем дистиллированной и сушат. Взвешивают 14 г силикагеля и 1 г гипса, растирают в фарфоровой ступке с 40 мл дистиллированной воды до получения однородной массы. Сорбционную массу равномерно наносят на 5 пластинок, сушат при комнатной температуре 17-20 часов, затем в сушильном шкафу 20 мин при 130-140°С. Пластинки "Силуфол" также активируют при той же температуре.

2.5. Проведение определения

2.5.1. Экстракция

Вода. 200 мл анализируемой воды помещают в делительную воронку, подкисляют серной кислотой до pH = 2; после чего экстрагируют базагран тремя порциями этилацетата или диэтилового эфира по 50 мл каждый раз в течение 3-5 мин. Объединяют экстракты, фильтруют через слой безводного сернокислого натрия. Растворитель упаривают досуха на ротационном испарителе. К охлажденному остатку приливают 0,05-0,1 мл ацетона и наносят на пластинку. Хроматографируют.

Почва (бедная органическими веществами). 50 г измельченной и просеянной почвы заливают в колбе на 500 мл смесью ацетона и воды (1:3) в количестве 200 мл и встряхивают в течение часа. После отстаивания жидкость фильтруют через бумажный фильтр, а остаток дважды промывают той же смесью, встряхивая каждый раз со 100 мл в течение 30 мин. Объединенные экстракты подкисляют конц. соляной кислотой до pH = 1-2 и базагран экстрагируют 40 мл хлороформа трижды каждый раз в течение 3-4 мин. Хлороформные экстракты фильтруют через слой безводного сернокислого натрия и упаривают досуха. Приливают 0,05-0,1 мл ацетона и наносят на пластинку. Хроматографируют.

Растительный материал, зерно. 20 г измельченного образца экстрагируют ацетоном либо диэтиловым эфиром дважды по 40 мл растворителя в течение 60 мин. Фильтруют экстракты через плотный бумажный фильтр на воронке Бюхнера, затем через слой безводного сернокислого натрия. Упаривают досуха. Остаток переносят в колбу, используя 50 мл 2%-ного раствора едкого натра. Затем прибавляют конц. соляную кислоту до pH = 2 и 2,5 мл 40%-ной фосфорно-молибденовой кислоты, тщательно перемешивают раствор и через 25-30 мин фильтруют через плотный бумажный фильтр на воронке Бюхнера. Остаток на фильтре трижды промывают 0,1 н соляной кислотой по 10 мл. Общий фильтрат переносят в делительную воронку и экстрагируют трижды хлороформом (либо диэтиловым эфиром) порциями по 50 мл в течение 5 мин каждый раз. Экстракт сушат над безводным сернокислым натрием и упаривают досуха. Остаток растворяют в 0,05-0,1 мл ацетона и наносят на пластинку. Хроматографируют.

2.5.2. Хроматографирование

Экстракты с помощью пипетки наносят на пластинку с тонким слоем силикагеля либо на пластинку "Силуфол". Рядом с пробами наносят 10 и 20 мкл стандартного раствора базаграна (С = 500 мкг/мл), что соответствует 5 и 10 мкг пестицида. Хроматографируют в смеси растворителей (см. таблицу). Вынимают пластинку, сушат на воздухе и помещают в сушильный шкаф, нагретый до 180°С, выдерживают 30-40 мин. Извлеченные из шкафа пластинки после охлаждения опрыскивают проявляющим раствором N 1, затем раствором N 2 либо раствором N 3. Расход реактивов небольшой.

При наличии базаграна появляется пятно красного цвета (при использовании р-ра N 2) либо фиолетового цвета (при использовании р-ра N 3).

Возможно проявление хроматограмм также следующим образом. После хроматографирования и высушивания пластинку облучают УФ-светом 20-25 мин, затем помещают в камеру, насыщенную парами хлора. Для его получения на дно эксикатора наливают 50 мл насыщенного водного раствора марганцевокислого калия и такой же объем концентрированной серной кислоты. Через 10-15 мин пластинку вынимают, оставляют на воздухе (15 мин для удаления избытка хлора) и затем опрыскивают насыщенным раствором о-толидина в этилацетат. Базагран проявляется в виде сиренево-фиолетовых пятен на светлом фоне ("Силуфол") либо серо-зеленых пятен (слой силикагеля).

Таблица

Значения величин базаграна в тонком слое адсорбента при использовании различных растворителей в качестве подвижной фазы

Адсорбент	Подвижная фаза
	Гексан + ацетон = 1:1	Гексан + ацетон = 2:1	Хлороформ + ацетон = 10:1	Бензол + ацетон = 9:1
Силикагель "Л"	0,62	-	0,46	0,34
"Силуфол"	-	0,51	0,8	0,52

2.6. Обработка результатов анализа

Количественное определение производится путем сравнения площади пятен проб и стандартных растворов. Измерение площади осуществляется с помощью миллиметровой бумаги. Пропорциональная зависимость между площадью пятна и концентрацией препарата наблюдается до 10 мкг. При большем содержании на пластинку наносят часть раствора.

Содержание базаграна в анализируемой пробе в мг/л либо мг/кг (X) рассчитывают по формуле:

где:

A - количество мкг стандартного раствора базаграна;

- площадь пятна стандартного раствора, ;

- площадь пятна пробы, ;

P - вес либо объем пробы, взятой на анализ, в г либо мл.

2.7. Требования техники безопасности

Соблюдать требования техники безопасности, обычно рекомендуемые для работы с органическими растворителями. При работе с кварцевой лампой необходимо пользоваться светозащитными очками.

2.8. Методические указания подготовлены ВНИИ гигиены и токсикологии пестицидов, полимерных и пластических масс Минздрава СССР (д.б.н., проф. М.А. Клисенко, к.х.н. Н.И. Киселевой), ВНИИЗР (к.с.-х.н. В.С. Шустров, к.с.-х.н. М.Ф. Зелениной, Э.В. Кулимцовой, Л.М. Кострикиной), Белорусским НИИ защиты растений (к.б.н. П.М. Кислушко).

Зам. Главного государственного санитарного врача СССР

А.И. Заиченко