Методические указания по определению симм-триазиновых гербицидов (симазина, атразина, пропазина, прометрина, семерона, мезоранила, метазина, метопротрина, приматола-М) в зерне кукурузы, воде и почве методом газожидкостной хроматографии (утв. Министерством здравоохранения СССР 20 декабря 1976 г. N 2542-76, 28 января 1980 г. N 2145-80)

Краткая характеристика препаратов представлена в таблицах 154 и 155.

Таблица 154

Характеристика гербицидов группы симм-триазинов

Торговое название	Общепринятое название	Химическое название	Брутто-формула	Молекулярная масса	Т. пл.	Давление пара, Па	Растворимость при 20, 27°С, г/100 г
1	2	3	4	5	6	7	8
Гезалакс	Аметрин	2-Изопропиламино-6-метилтио-4-этиламино-1,3,5-триазин		227,3	84-85		0,018 (вода) 1,8 (метанол) 5,8 (хлороформ) 1,2 (эфир)
Мезоранил	Азипротрин	2-Азидо-4-метилтио-6-изопропиламино-1,3,5-триазин		225,3	91-93		0,005 (вода) 2,2 (метанол)
Атразин, гезаприм	Атразин	2-Хлор-4-этиламино-6-изопропиламино-1,3,5-триазин		215,0	176		0,007 (вода) 5,2 (хлороформ) 1,2 (эфир) 1,8 (метанол) 0,036 (пентан)
Семерон	Десметрин	2-Метилтио-4-изопропиламино-6-метиламино-1,3,5-триазин		213,3	84-86		0,058 (вода), хорошо растворим в большинстве органических растворителей
Приматол П, гемазин	Пропазин	2-Хлор-4,6-бис-(изопропиламино)-1,3,5-триазин		229,7	212-214		0,001 (вода) 0,5 (эфир)
Гезагард	Прометрин	2-Метилтио-4,6-бис-(изопропиламино)-1,3,5-триазин		241,4	118-120		0,048 (вода), хорошо растворим в большинстве органических растворителей
Тетразин, бладекс, гезаприм	Симазин	2-Хлор-4,6-бис-(этиламино)-1,3,5-триазин		201,7	223-225		0,5 (вода) 0,03 (эфир)
Игран	Тербутрин	2-Трет-(бутиламино)-4-метилтио-6-этиламино-1,3,5-триазин		241,4	104-105		0,0006 (вода) 0,04 (метанол)

155. Краткая характеристика препаратов

Торговое название препарата	Химическое название	Брутто-формула (молекулярная масса)	Т. пл., °C
Метазин	2-N-Метил-N-циано-4,6-бис-изопропиламино-симм-триазин	(249,4)	112-115
Газаран (метопротрин)	2-Изопротринамино-2-метилтио-6-метоксипропиламино-симм-триазин	(271,4)	68-70
Приматол-М (тербутриазин)	2-Трет-бутиламино-4-хлор-6-этиламино-симм-триазин	(229,8)	177-179

Продолжение

Торговое название препарата	Растворимость в воде при 20°C, мг/л	Растворимость в органических растворителях	МДУ в продуктах питания, мг/кг	ПДК в воде, мг/л; почве, мг/кг
Метазин	10	-	Картофель 0,05	-
Газаран (метопротрин)	320	Хорошая в большинстве органических растворителей	-	-
Приматол-М (тербутриазин)	5	То же	-	-

Примечание. В скобках - общепринятое название препарата.

Принцип метода. Метод основан на извлечении симм-триазиновых гербицидов из зерна кукурузы этилацетатом, из почвы - ацетоном, а из воды - бензолом, очистке экстракта из зерна на колонке с оксидом алюминия, из почвы - перераспределением в хлороводородную кислоту, а затем, после подщелачивания раствора, - в хлороформ с последующим определением ГЖХ с ТИД.

Метрологическая характеристика метода представлена в таблице 156. Предел обнаружения мезоранила, метопротрина 2 мкг, других симм-триазинов 1 мкг в пробе.

Избирательность метода. Метод селективен. Фосфорорганические пестициды не мешают определению. Избирательность метода обеспечивается сочетанием альтернативных колонок с неподвижными фазами равной полярности.

Реактивы и материалы. Ацетон ч.д.а. свежеперегнанный. Хлороформ ч.д.а. свежеперегнанный. Этилацетат ч.д.а. свежеперегнанный. Бензол ч.д.а. свежеперегнанный. Оксид алюминия нейтральный или щелочной, II степени активности по Брокману. Хлороводородная кислота х.ч., 0,1 н раствор. Гидроксид натрия х.ч., 0,5 н раствор. Гидроксид калия х.ч., 4 н раствор. Хлорид натрия х.ч. Сульфат натрия х.ч. Хроматон N-AW-HMDS (0,16-0,20 мм) с 2,5% апьезона L + 2,5% карбовакса 20 М. Хроматон N-супер (0,16-0,20 мм) с 3% SE-30. Хроматон N-AW-HMDS (0,16-0,20 мм) с 2% ПДЭГС. Азот особой чистоты из баллона. Водород, получаемый из баллона или из генератора водорода. Воздух, получаемый из баллона или нагнетаемый компрессором.

156. Метрологическая характеристика метода

Препарат	Объект	Предел определения, мг/кг или мг/л	Среднее значение определения при n = 15, %	Стандартное отклонение при p = 0,95, n = 15, %	Доверительный интервал среднего при p = 0,95, n = 5, %
Пропазин	Зерно	0,04	90,7
	Почва	0,01	79,0
	Вода	0,001	83,7
Атразин	Зерно	0,04	90,7
	Почва	0,01	79,0
	Вода	0,001	84,7
Симазин	Зерно	0,04	83,9
	Почва	0,01	84,9
	Вода	0,001	80,9
Прометрин	Зерно	0,04	87,0
	Почва	0,01	83,5
	Вода	0,001	83,6
Приматол-М	Зерно	0,04	90,7
	Вода	0,001	86,2
Семерон	Почва	0,01	83,3
	Вода	0,001	84,7
Мезоранил	Почва	0,02	80,3
	Вода	0,002	90,7
Метазин	Почва	0,01	80,7
	Вода	0,001	83,7
Метопротрин	Почва	0,02	87,6
	Вода	0,002	79,0	5,9

Стандартные растворы гербицидов в ацетоне: раствор 1 - пропазина, атразина, симазина, прометрина, семерона, приматола-М, метазина - по 100 мкг/мл; метопротрина, мезоранила - по 200 мкг/мл. Для приготовления стандартного раствора 1 в мерную колбу на 100 мл взвешивают последовательно с точностью г по 10 мг пропазина, атразина, симазина, прометрина, семерона, метазина, приматола-М, а затем по 20 мг метопротрина и мезоранила. Содержимое колбы растворяют в небольшом количестве ацетона, а затем доводят до метки тем же растворителем.

Раствор 2 - пропазина, атразина, симазина, прометрина, семерона, приматола-М - по 10 мкг/мл; метопротрина, мезоранила - по 20 мкг/мл. Для приготовления раствора 2 из раствора 1 в мерную колбу на 100 мл пипеткой переносят 10 мл и доводят до метки ацетоном.

Раствор 3 - пропазина, атразина, симазина, прометрина, семерона, приматола-М - по 0,5 мкг/мл (нг/мкл); метопротрина, мезоранила - по 1 мкг/мл (нг/мкл). Для приготовления раствора 3 из раствора 2 в мерную колбу на 100 мл пипеткой отбирают 0,5 мл, доводят до метки ацетоном.

Все растворы стабильны при хранении в холодильнике в течение 6 мес.

Приборы, аппаратура и посуда. Хроматограф "Цвет-106" или аналогичный прибор с ТИД. Аппарат для встряхивания. Ротационный вакуумный испаритель. Генератор водорода. Кофейная мельница. Воронки делительные на 250, 1500 мл. Колбы: мерные на 100 мл; круглодонные на 500 мл; плоскодонные на 100, 500 мл; грушевидные на 50 мл. Мензурки на 25, 50 мл. Пипетки на 1, 10 мл. Пробирки стеклянные. Микрошприц. Почвенное сито.

Подготовка к определению. Приготовление носителя с 2,5% апьезона L и 2,5% карбовакса 20 М. В круглодонную колбу на 500 мл берут навеску апьезона L (2,5 г) и карбовакса 20 М (2,5 г), взятую с точностью г, и растворяют в 200 мл хлороформа. В полученный раствор при непрерывном помешивании постепенно высыпают 95 г хроматона N-AW-HMDS (0,16-0,20 мм). Раствор жидкой фазы по объему должен быть в 2 раза больше (минимально) насыпного объема сорбента. С помощью ротационного вакуумного испарителя при слабом нагревании водяной бани растворитель удаляют. После того как носитель при вращении колбы начинает легко осыпаться со стенок колбы, его переносят в фарфоровую чашку и выдерживают в сушильном шкафу при температуре 60-70°C в течение 1 ч. После охлаждения в эксикаторе носитель пересыпают в склянку с плотно закрывающейся пробкой.

Заполнение колонок носителем, кондиционирование колонки и подготовку хроматографа к работе проводят согласно инструкции.

Колонку для очистки экстракта заполняют на высоту 15 см окисью алюминия в этилацетате при открытом кране колонки. Избыток растворителя сбрасывают. Кран колонки закрывают, когда уровень растворителя будет находиться над слоем сорбента на высоте 3-4 мм.

Подготовка проб. Зерно кукурузы измельчают с помощью кофейной мельницы до размера частиц, равных размеру частиц манной крупы. Для анализа берут 25 г измельченного зерна.

Пробу почвы просеивают через почвенное сито и анализируют в естественно-влажном состоянии. Воздушно-сухую почву увлажняют водой из расчета 20% от массы почвы. Для анализа отбирают навеску почвы в 100 г.

Ход анализа. Экстракция. Анализируемую воду (1 л) помещают в делительную воронку, добавляют 1 мл этилового спирта и по каплям 4 н раствор KOH до pH 8-10 и экстрагируют гербициды бензолом четыре раза порциями по 50 мл. Перед каждой экстракцией в воду добавляют по 1 мл этилового спирта. Объединенные бензольные экстракты сушат над безводным сульфатом натрия. Экстракты фильтруют небольшими порциями в грушевидную колбу на 50 мл и с помощью ротационного вакуумного испарителя концентрируют раствор до объема 1-2 мл. Последнюю порцию экстракта упаривают досуха. К сухому остатку пипеткой добавляют 2 мл ацетона, колбу закрывают пришлифованной пробкой и тщательно смывают стенки колбы растворителем. В хроматограф вводят 2-5 мкл полученного раствора.

Навеску почвы (100 г) помещают в плоскодонную колбу на 500 мл, заливают 200 мл ацетона и экстрагируют гербициды в течение 1 ч с помощью механического встряхивания. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в круглодонную колбу на 500 мл. Операцию повторяют еще 2 раза 200 и 100 мл ацетона, встряхивая почву с растворителем по 1 ч. Каждую порцию экстракта концентрируют с помощью ротационного вакуумного испарителя до объема 1-2 мл. К последней порции сконцентрированного экстракта добавляют 30 мл 0,1 н HCl. Раствор фильтруют через бумажный фильтр в делительную воронку на 250 мл и промывают колбу и фильтр двумя порциями по 15 мл 0,1 н HCl. К объединенному солянокислому раствору добавляют 2 мл 4 н раствора KOH до pH 8-10. Гербициды извлекают из водного раствора двойной экстракцией хлороформом порциями по 30 мл. После разделения слоев водный слой отбрасывают, а объединенный хлороформный слой сушат над безводным сульфатом натрия. Высушенный экстракт порциями фильтруют в грушевидную колбу на 50 мл и с помощью ротационного вакуумного испарителя концентрируют экстракт до объема 1-2 мл. Сульфат натрия промывают небольшим количеством хлороформа. Последнюю порцию растворителя отгоняют досуха. К сухому остатку пипеткой добавляют 2 мл ацетона, колбу закрывают пришлифованной пробкой и тщательно смывают стенки колбы растворителем. В хроматограф вводят 2-5 мкл полученного раствора.

Навеску измельченного зерна кукурузы (25 г) помещают в плоскодонную колбу на 250 мл, заливают 50 мл этилацетата и экстрагируют гербициды в течение 1 ч с помощью механического встряхивания колбы. Экстракт фильтруют в круглодонную колбу на 250 мл. Экстракцию проводят еще 2 раза этим же количеством растворителя. Объединенный экстракт упаривают до объема 1-2 мл при помощи ротационного вакуумного испарителя. Остаток количественно при помощи ацетона переносят в пробирку, помещают ее на водяную баню с температурой 70-80°C и отгоняют растворитель до объема ~2 мл. Сконцентрированный экстракт количественно переносят на хроматографическую колонку с оксидом алюминия. Гербициды элюируют из колонки 100 мл этилацетатом и со скоростью 60 кап./мин в грушевидную колбу. Этилацетат добавляют в колонку небольшими порциями. Элюат концентрируют с помощью ротационного вакуумного испарителя досуха. К сухому остатку пипеткой добавляют 2 мл ацетона, колбу закрывают пришлифованной пробкой и тщательно смывают стенки колбы растворителем. В хроматограф вводят 2 мкл полученного раствора. В случае получения очень жирных экстрактов проводят дополнительную очистку с хлороводородной кислотой, как описано для почвы.

Условия хроматографирования. Хроматограф "Цвет-106" с ТИД. Скорость протяжки ленты самописца 0,33 см/мин.

Колонка I основная, стеклянная, длиной 180 см, внутренним диаметром 3,5 мм заполнена хроматоном N-AW-HMDS (0,16-0,20 мм) с 2,5% апьезона L + 2,5% карбовакса 20 М.

Колонка II альтернативная, стеклянная, длиной 150 см, внутренним диаметром 3,5 мм заполнена хроматоном N-AW-HMDS (0,16-0,20 мм) с 2% ПДЭГС.

Колонка III альтернативная, стеклянная, длиной 150 см, внутренним диаметром 3,5 мм заполнена хроматоном N-супер (0,16-0,20 мм) с 3% SE-30.

Другие условия хроматографирования приведены в таблице 157.

157. Условия хроматографирования

Параметры	Колонка I 2,5% апьезона L + карбовакс 20 М	Колонка II 2% ПДЭГС	Колонка III 3% SE-30
Рабочая шкала электрометра, А
Температура, °C:
колонки	230	180	180
испарителя	220	200	200
Скорость потока, мл/мин:
азота	60	75	60
водорода	16	18	15
воздуха	150	180	150
Время удерживания, мин-с:
пропазин	2-33	4-33	3-30
приматол-М	2-50	-	-
атразин	3-06	6-10	3-29
симазин	3-47	8-10	3-19
прометрин	4-00	6-10	6-30
семерон	4-51	9-20	5-27
мезоранил	6-37	17-15	4-40
метопротрин	9-50	31-10	18-40
метазин	13-10	29-35	11-28

В хроматограф вводят 2-5 мкл рабочего раствора. Линейность детектирования сохраняется в пределах: для пропазина, проматола-М, атразина, симазина, прометрина, семерона, метазина - 1-80 нг, метопротрина и мезоранила - от 2 до 200 нг.

Если при введении в хроматограф получаются слишком большие пики или происходит "зашкаливание", готовят более разбавленные растворы, добавляя в конечный рабочий раствор пипеткой дополнительное количество ацетона.

Обработка результатов анализа. Количественное определение проводят методом соотношения со стандартами по высоте пиков.

Содержание гербицидов в анализируемой пробе (С, мг/кг или мг/л) вычисляют по формуле:

,

где , - высоты пиков соответственно анализируемой пробы и стандарта, мм; - объем аликвоты, вводимой в хроматограф, мкл; - конечный объем рабочего раствора, мл; - содержание гербицида в стандарте, нг; P - навеска или объем анализируемой пробы, г или мл (для почвы в пересчете на воздушно-сухую навеску).

Требования безопасности. Необходимо соблюдать правила безопасности, принятые для работы с пестицидами и легковоспламеняющимися жидкостями.