Откройте актуальную версию документа прямо сейчас
Если вы являетесь пользователем интернет-версии системы ГАРАНТ, вы можете открыть этот документ прямо сейчас или запросить по Горячей линии в системе.
Вход
Купить систему ГАРАНТ
Получить демо-доступ
Узнать стоимость
Информационный банк
Подобрать комплект
Семинары
- Главная
- Межгосударственный стандарт ГОСТ ISO/TS 13136-2016 "Микробиология пищевой продукции и кормов для животных. Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени для определения патогенных микроорганизмов. Горизонтальный метод определения бактерий Escherichia coli, продуцирующих Шига-токсин, в том числе серогрупп О157, О111, О26, О103 и О145" (введен в действие приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 7 ноября 2016 г. N 1606-ст)
- Приложение D (справочное). Внутренний контроль амплификации
Приложение D (справочное). Внутренний контроль амплификации
Приложение D
(справочное)
Внутренний контроль амплификации
Три различных внутренних контроля элементов амплификации (lACs) могут быть использованы в ПЦР в режиме реального времени:
- TaqMan* представляет собой внутренний положительный контроль. Это комплект реагентов, включающий в себя все необходимые реагенты (праймеры,
*, IAC ДНК-мишень и стоп-раствор). IAC ДНК-мишень требует разбавления в 10 раз, для достижения количества копий примерно для 100 ПЦР-реакции. Размер образующегося ПЦР продукта неизвестен.
- Использование формулы pUC 19 на основе внутреннего контроля амплификации IAC [27]. Приблизительно 100 копий целевой ДНК (PUC 19) следует использовать в реакции ПЦР. Размер образующегося ПЦР продукта IAC составляет 119 bp.
- Рекомбинантную плазмиду (имеющую название Piac-STEC) можно использовать в конкретных анализах stx с помощью ПЦР в режиме реального времени. Этот элемент IAC содержит следующий ДНК-фрагмент, клонированный в позицию EcoRI плазмиды pUC19:
5'ATTTTTGTTACTGTGACAGCTGAAGCTTTACGTGAATCGCCAGCGGCATCAGCACCTTGTCGCCTT GCGTATAGATGTTGATCTTACATTGAACTGGGGAATT-3' (жирным шрифтом выделены прямой и обратный stx1/stx2 праймеры, связывающие сайты последовательности; подчеркнутая последовательность: IAC-зонд сайт связывания).
IAC может быть усилен генами stx, используя те же праймеры, для stx генов (см. приложение Е), с теми же условиями и в той же ПЦР-пробирке [14]. Он обнаруживает специфическую ДНК в пробе (5' [Red640]-CAAGGCGACAAGGTGCTGATGCCG-[BHQ2] 3'), включенного в смесь ПЦР в концентрации, идентичной что и для зондов ДНК генов stx1 и stx2 (как помечены [флюоресцином] и [BHQ1] на их 5'- и 3'-концах соответственно). В общей сложности 64 копий IAC следует использовать в реакции ПЦР. Продукт ПЦР МАК96 парных оснований. Производительность в результате stx-IAC ПЦР в режиме реального времени было показано с помощью искусственно и, естественно загрязненных проб пищевых продуктов (см. [5]).
Вторая и третья системы также могут быть использованы в качестве контроля экстракции путем добавления 100 копий плазмиды pUC 19 или plAC-STEC в пробу перед стадией очистки ДНК.