Приложение А (справочное). Подтверждение с использованием нормально-фазовой хроматографии

Приложение А
(справочное)

Подтверждение
с использованием нормально-фазовой хроматографии

А.1 Реактивы

А.1.1 Подвижная фаза

Смешивают дихлорметан, гексан, изопропанол и уксусную кислоту в объемных соотношениях 485 + 484 + 50 +1, соответственно.

А.1.2 Растворитель для приготовления стандартных растворов

Смешивают хлороформ, гексан и изопропанол в объемных соотношениях 50 + 50 + 3, соответственно, и перемешивают.

А.1.3 Стандартные растворы для подтверждения

Готовят пять стандартных растворов зеараленона со значениями массовой концентрации, приведенными в таблице А.1, для чего разбавляют рабочий стандартный раствор (4.16) или стандартный раствор (А.1.3.1) растворителем по А.1.2.

Таблица А.1 - Приготовление стандартных растворов для подтверждения

Стандартный раствор для подтверждения	Исходный стандартный раствор	Объем исходного стандартного раствора,	Конечный объем,	Номинальное значение массовой концентрации зеараленона,
А.1.3.1 А.1.3.2 А.1.3.3 А.1.3.4 А.1.3.5	4.16 4.16 4.16 4.16 А.1.3.1	2,0 1,5 1,0 1,0 5,0	50 50 50 100 50	0,20 0,15 0,10 0,050 0,020

Все стандартные растворы хранят в холодильнике. Срок хранения растворов - 6 месяцев.

А.2 Колонка

Оборудование для ВЭЖХ, установленное в 5.15, а также:

колонка 5 мкм Zorbax SIL* длиной 250 мм и диаметром 4,6 мм или аналогичная.

А.3 Хроматографический анализ

А.3.1 Условия хроматографического анализа

Подвижная фаза		см. А.1.1
Скорость потока		1,0
Объем инжекции		100
Основа колонки		силикагель
Длины волн детектора (для детектора с двойным монохроматором)		возбуждение - 236 нм эмиссия - 440 нм

А.3.2 Контроль пригодности системы

Вводят 100  стандартного раствора зеараленона концентрации 0,050  (А.1.3.4; 100  содержит 5,0 нг зеараленона). Коэффициент удерживания должен быть не менее 2,0. При необходимости модифицируют подвижную фазу, регулируя содержание изопропанола.

Выполняют два или более вводов стандартных растворов, чтобы убедиться в повторяемости площади пиков в пределах 2%.

Проверяют линейность зависимости значения площади пика от концентрации зеараленона, для чего вводят в хроматограф по 100  каждого стандартного раствора (А.1.3). Строят график, откладывая значения площадей пиков на оси абсцисс, а значения соответствующей им массы зеараленона в нанограммах - на оси ординат. Коэффициент корреляции должен быть не менее 0,999, и при 95%-ном доверительном интервале точка пересечения зависимости с осью у должна включать нуль.

А.3.3 Определение

Вводят 100  анализируемого раствора (при необходимости его разбавляют в соответствии с концентрацией, определенной обращенно-фазовой хроматографией). Каждые две инъекции анализируемого раствора сопровождают инъекцией 100  соответствующего стандартного раствора.

Идентичность подтверждена, если отношение откликов пиков при 236 и 274 нм одинаково для стандартного и анализируемого растворов. Отношение пиков анализируемых проб должно быть в пределах 5% отношения пиков стандартного раствора.