Приложение O (справочное). Руководство по описанию клеточных компонентов медицинских продуктов

Приложение O
(справочное)

Руководство
по описанию клеточных компонентов медицинских продуктов

O.1 Общие положения

Должна быть установлена полная характеристика клеточного компонента с точки зрения идентификации, чистоты, эффективности, жизнеспособности и соответствия предназначенному использованию. Характеристика должна быть разработана так, чтобы позволить проводить текущий контроль, который применяется для выпуска активных веществ и конечного продукта, а также контроль, проводимый на нескольких этапах процесса для гарантии стабильности партии.

Если биологически активные молекулы (например, факторы роста, цитокины) присутствуют в качестве компонента или осадка от производственного процесса медицинских продуктов на клеточной основе, они должны быть соответствующим образом описаны. Их сопряженные риски должны быть оценены.

Руководство по неклинической характеристике можно найти по ссылке [38].

O.2 Идентификация

Идентификация клеточных компонентов, в зависимости от популяции и происхождения клеток, должна быть охарактеризована с точки зрения фенотипических и/или генотипических профилей (генетический статус/дифференциальный статус). При рассмотрении фенотипа клеток, если обосновано, могут использовать соответствующие маркеры. Эти маркеры могут основываться на экспрессии гена, презентации антигена, биохимической активности, ответе на экзогенные стимулы, способности производить биологически активные или другие измеримые молекулы и т.д. Для адгезивных клеток совместно с другими испытаниями полезным инструментом может являться морфологический анализ.

Если применимо, необходимо предоставить описание процедур, которые могут привести к изменениям характеристик продукта, включая адгезию, абсорбцию, деградацию, представление компонентов в питательной среде.

Для клеточных компонентов аллогенного происхождения, если применимо, идентификация должна включать маркеры гистосовместимости и идентификацию генетических полиморфизмов с конкретными ссылками на предназначенное использование.

O.3 Чистота клеток

По сравнению с химическими веществами для продуктов на клеточной основе чистота является относительным термином. Сложно определить абсолютную чистоту такого продукта. По отношению к клеточным компонентам продуктов на клеточной основе термин "чистота клеток" используют для описания характеристик продукта, связанных с популяцией(ями) клеток, необходимой(ых) для выполнения требований, определенных для предназначенного использования продукта.

Общая популяция клеток может содержать другие клетки, которые имеют различное происхождение и/или степень дифференциации или могут не относиться к предназначенной клеточной популяции. Предусмотренные и непредусмотренные клеточные популяции, представленные в медицинском продукте, должны быть определены, а их количество в конечном продукте следует контролировать соответствующими мерами. Критерии приемки для количества клеток должны быть установлены в каждом случае отдельно.

Что касается смесей клеток и тканей, в тех случаях, когда желаемая биологическая активность и эффективность продукта требует использования сложной смеси клеток или тканей, смесь клеток и/или ткани должна быть охарактеризована, а ее состав - контролироваться соответствующими методами текущего контроля и испытаниями при выпуске продукта.

O.4 Примеси, полученные в ходе процесса

Во время производства медицинского продукта на клеточной основе в конечный продукт может попадать различное количество примесей, связанных с продуктом и процессом. Любые реагенты, известные как вредные для человека, должны быть исследованы в конечном продукте (или в отдельных компонентах, если иное невозможно) и установлены критерии приемки. Должны быть обоснованы допустимые пределы.

Для примесей, связанных с клетками, см. также приложение N.

Для примесей, связанных с матрицей/каркасом/устройством, применяют ИСО 10993.

Для примесей, связанных с обработкой и производством, см. приложение М.

O.5 Жизнеспособность

Независимо от типа клеток популяция клеток может загрязняться нежизнеспособными клетками. Так как жизнеспособность клеток является важным параметром для целостности продукта и непосредственно связана с биологической активностью, необходимо определять соотношение между жизнеспособными и нежизнеспособными клетками и устанавливать соответствующие спецификации.

O.6 Эффективность

O.6.1 Общие положения

Если предназначенное использование продукта связано с определяемой и измеряемой биологической активностью, испытания эффективности должны быть частью процесса менеджмента риском. Испытания эффективности должны проводить, если это действительно требуется и когда применимые системы исследований подходят для получения достоверных результатов, отражающих ситуацию in vivo.

В соответствии с Руководством ICH Q6B (см. ссылку [18]) эффективность определена как количественное измерение биологической активности, основанной на свойствах продукта, которые связаны с соответствующими биологическими свойствами. Настоятельно рекомендуется, чтобы разработка подходящей пробы эффективности начиналась в процессе разработки продукта. Предпочтительно, чтобы подходящая проба эффективности уже была внедрена на момент производства материала для первых клинических исследований, и она должна быть утверждена до проведения основных клинических исследований, если не обосновано иное. Выпуск партии и спецификации срока годности с точки зрения эффективности должны быть определены и уточнены во время разработки продукта, если применимо.

Проба, демонстрирующая биологическую активность, должна быть основана на предполагаемом биологическом эффекте, который в идеале должен быть связан с клиническим ответом.

В основном можно выделить два типа проб эффективности:

1) пробы in vitro, использующие системы клеток, и

2) пробы in vivo, использующие животные модели.

Системы in vitro являются более предпочтительными, хотя пробы эффективности in vivo могут также быть полезными, особенно при доступности экспериментальных животных моделей.

Для определения эффективности продукта необходимо контролировать основные клеточные функции, такие как жизнеспособность, самообновление, смерть и дифференциация, во время производства, оценок стабильности и в момент выпуска, используя суррогатные маркеры и соответствующие технологии, например, микроматричный анализ профиля экспрессии генов, потоковый цитометрический иммунофлуоресцентный анализ, клонирование клеток, полимеразная цепная реакция (ПЦР) и многие другие.

Обычно маркеры чистоты и маркеры эффективности не должны быть смешаны в одной пробе, однако этот подход может быть применим при утверждении.

В ссылке [39] обращено внимание на медицинские продукты на клеточной основе для иммунотерапии, однако принципы, включая подготовку эталонного препарата, также полезны для менеджмента риском других продуктов на клеточной основе. Как описано в указанных руководствах, для надлежащего определения эффективности продуктов во время разработки может потребоваться комбинация нескольких методов. Некоторые пробы могут быть востребованы для контроля изменений процесса, в то время как другие больше подходят для испытаний на момент выпуска продукции.

Эффективность стволовых клеток при этом не рассматривают.

O.6.2 Клетки для восстановления/регенерации тканей

Испытания in vivo могут либо проводиться на соответствующей животной модели, имитирующей предназначенное клиническое восстановление/регенерацию ткани, либо основываться на способе действия (например, эктопическая модель). Проба in vitro может быть основана на экспрессии маркеров, для которых продемонстрировано, что они напрямую или косвенно (суррогатные маркеры) связаны с предназначенной биологической активностью, таких как маркеры клеточной поверхности, маркеры активации, профиль экспрессии конкретных генов. Также в качестве основного принципа испытания эффективности можно использовать физиологический ответ при определенных условиях, таких как дифференциация определенных типов клеток и/или выделение ткани специфичных белков (например, внеклеточных матричных компонентов). Производители должны тем не менее гарантировать, что метод описания характеристических свойств соответствует предполагаемому биологическому эффекту in vivo. Пробу эффективности следует проводить, используя определенное количество клеток, и, если возможно, количественно оценивать по сравнению с подходящим эталонным препаратом. Эффективность может быть вычислена на основании измеренного эффекта за определенный период времени.

O.6.3 Клетки с преимущественно метаболической/фармакологической функцией

Клетки, содержащиеся в медицинском продукте на клеточной основе, могут быть химически обработаны или модифицированы in vitro для экспрессии некоторых требуемых белков, таких как факторы роста, антигены клеточной поверхности или другие молекулы, для поддержания биологического ответа настолько долго, насколько необходимо в новой микросреде. Следовательно, разрабатываемая проба эффективности должна быть способна оценивать связанные с активностью аспекты активного вещества, которые могут не полностью состоять из неповрежденных жизнеспособных клеток, но также из других компонентов.

Если предназначенная биологическая функция медицинского продукта на клеточной основе, в первую очередь, основана на способности клеток выделять конкретные молекулы, например, для восстановления нарушения обмена веществ, стимуляции роста или выведения метаболитов, то проба его эффективности будет основана на определении выделяемых активных молекул и ожидаемой биологической активности. Она может проводиться с использованием общепринятых надежных количественных и качественных аналитических методов (анализ белков, идентификация нуклеиновых кислот, жидкостная хроматография высокого разрешения и т.д.). Те же молекулы можно также оценивать на предмет функционирования в системах животных моделей, предполагая, что активное вещество выделяется из медицинского продукта на клеточной основе в биологические жидкости (плазма, цереброспинальная жидкость, моча или тканевая жидкость).

O.6.4 Клетки для иммунотерапии

Пробы на эффективность медицинских продуктов на клеточной основе, предназначенных для иммунотерапевтического использования, основаны на сложных иммунных механизмах, которые могут быть осложнены образованиями мультиантигена и присущей вариативностью исходного материала. Специальное руководство по медицинским продуктам на клеточной основе для иммунотерапии приведено в ссылке [39].