Приложение N 1. Бактериологическая диагностика методами окраски бруцелл вида овис

Приложение N 1
к Наставлению по диагностике
инфекционного эпидидимита баранов

1. Методы окраски бруцелл вида овис

Окраска мазков по Стампу. Фиксированный на пламени мазок окрашивают в течение 10 мин раствором карболового фуксина Циля в разведении 1:10, слегка промывают водой и дифференцируют 0,5%-ным раствором уксусной кислоты в течение 30 сек. Вновь тщательно промывают водой и докрашивают 1%-ным раствором метиленового синего в течение 20-30 сек. Краску сливают, мазок промывают водой и просушивают фильтровальной бумагой.

Микроскопическая картина: бруцеллы вида овис - красные, другая микрофлора и фон препарата - синие.

Окраска мазков по Козловскому. Фиксированный на пламени мазок окрашивают 2%-ным раствором сафранина, подогревая до появления пузырьков. Затем мазок быстро промывают водой и дополнительно окрашивают 0,75-1%-ным водным раствором малахитового зеленого в течение 0,5-1 мин. Краску сливают, мазок промывают водой и просушивают фильтровальной бумагой.

Микроскопическая картина: бруцеллы вида овис - ярко-красные, другая микрофлора и фон препарата окрашены в зеленый цвет.

Раствор малахитового зеленого может быть заменен 1%-ным раствором метиленового синего или бриллиантовой зелени.

Окраска мазков по Шуляку-Шин. Фиксированный на пламени мазок окрашивают в течение 2 мин карболовым фуксином Циля, разведенным 1:5, промывают водой и докрашивают в течение 5 мин 2%-ным водным раствором метиленового синего. Краску сливают, мазок промывают водой и подсушивают фильтровальной бумагой.

Микроскопическая картина: бруцеллы вида овис - ярко-красные, другая микрофлора и фон препарата окрашены в сине-голубой цвет.

2. Приготовление питательных сред

Мясная вода. Свежее мясо крупного рогатого скота освобождают от костей, жира и сухожилий и пропускают через мясорубку. 500 г фарша заливают 1 л водопроводной воды и выдерживают в течение 15-18 час. в прохладном месте. Затем настой кипятят в течение 30-40 мин, доливают дистиллированной водой до первоначального объема и фильтруют через ватно-марлевый фильтр или через полотно. Полученную мясную воду стерилизуют при 120° в течение 20 мин.

Печеночная вода. Свежую печень крупного рогатого скота освобождают от жира, канальцев, пленок и пропускают через мясорубку. 500 г фарша заливают 1 л водопроводной воды, настаивают в течение 1 часа и кипятят при помешивании в течение 30 мин. После отстаивания фарш удаляют, а жидкость доливают дистиллированной водой до первоначального объема и фильтруют через ватно-марлевый фильтр. Разливают в колбы, стерилизуют при 112° (0,5 атм) в течение 30-40 мин.

Мясо-пептонный печеночно-глюкозо-глицериновый бульон (МППГГБ). К 610 мл мясной воды добавляют 305 мл печеночной воды, 10 г пептона и 5 г хч хлорида натрия. Фильтруют через нейлоновый или ватно-марлевый фильтр, устанавливают рН 7,2, добавляют 10 г глюкозы и 20 мл глицерина. Среду разливают в пробирки или флаконы и стерилизуют при 110° (0,4 атм) в течение 30 мин рН среды до стерилизации - 7,3-7,4, после стерилизации - 6,8-7,0.

Сывороточно-декстрозный агар. К 835 мл дистиллированной воды добавляют 20 г агар-агара, 10 г пептона, 5 г хч хлорида натрия и 165 мл мясной воды. Смешивают, кипятят до расплавления агара, устанавливают рН 7,8. Затем стерилизуют текучим паром в течение 1 часа, после чего пар закрывают, давление доводят до 2 атм и нагреватель выключают. После автоклавирования среду отстаивают в течение 1 часа, затем фильтруют через ватный или бумажный фильтр, доводят рН до 7,4, разливают в колбы, учитывая объем среды, и стерилизуют при 115° (0,7 атм) в течение 15 мин.

Перед употреблением среду расплавляют, охлаждают до 50° и добавляют к ней нормальную сыворотку крови крупного рогатого скота и раствор декстрозы, профильтрованные через фильтр Зейтца. Конечная концентрация сыворотки в среде должна быть 10%, декстрозы - 1%.

Плотный печеночно-сывороточный и печеночно-а