Методические указания по определению синтетических пиретроидов (амбуш, децис, рипкорд, сумицидин) в растениях, почве, воде водоемов методами газожидкостной и тонкослойной хроматографии (утв. Министерством здравоохранения СССР 22 октября 1981 г. N 2473-81)

Методические указания по определению синтетических пиретроидов (амбуш, децис, рипкорд, сумицидин) в растениях, почве, воде водоемов методами газожидкостной и тонкослойной хроматографии*
(утв. Министерством здравоохранения СССР 22 октября 1981 г. N 2473-81)

ГАРАНТ:

См. временные методические указания по определению пиретроидов (перметрина, циперметрина, фенвалерата и декаметрина) в молоке и мясе животных методом газожидкостной хроматографии, утвержденные Минздравом СССР 29 июля 1991 г. N 6093-91

Краткая характеристика препаратов приведена в таблице 70.

Препараты нерастворимы в воде. Хорошо растворяются в ацетоне, спиртах, хлороформе. ПДК в воде водоемов составляет: рипкорда - 0,07 мг/л, сумицидина - 0,05 мг/л.

Принцип метода. Метод основан на определении синтетических пиретроидов методами газожидкостной и тонкослойной хроматографии после извлечения препаратов из анализируемой пробы органическими растворителями (хлороформ, смесь гексана и ацетона, 50%-ный водный раствор ацетона) с последующей очисткой экстрактов перераспределением между двумя несмешивающимися жидкостями и (или) на колонках с адсорбентами.

Метрологическая характеристика метода. Диапазон определяемых концентраций 0,01-0,04 мг/кг (мг/л). Остальные параметры приведены в таблице 71.

Избирательность метода. Хлорсодержащие пестициды определению не мешают.

Реактивы и растворы. Для экстракции и очистки экстрактов. Ацетон ч. Диэтиловый эфир х.ч. н-Гексан ч., х.ч. Сульфат натрия безводный свежепрокаленный. Хлороформ ч. Ацетонитрил ч. Бензол ч.д.а. Хлорид кальция х.ч., 0,05%-ный раствор. Оксид алюминия для хроматографии II степени активности. Хлорид натрия ч.

70. Характеристика пиретроидов

Общепринятое название (торговое название)	Брутто формула	Химическое название	Молекулярная масса	Давление паров, Па	ДСД, мг/кг	МДУ в картофеле, мг/кг
Перметрин (амбуш)		диметилциклопропанкарбоновой кислоты 3-феноксибензиловый эфир	391,28	(25°С)	0,035	0,05
Циперметрин (рипкорд, цимбуш)		(1RS)-Цис,транс-3-(дихлорвинил)-2,2-диметилциклопропанкарбоновой-1 кислоты эфир	416	(70°С)	0,003	0,01
Фенвалерат (сумицидин)		(RS)-2-Метил-(4-хлорфенил) бутановой кислоты эфир	405		0,034	0,01
Декаметрин (децис, дельтаметрин)		(1R)-Цис-3-(2,2-дибромо-винил)-2,2-диметилциклопропанкарбоновой кислоты эфир	505,2	(25°С)	0,003	0,01

71. Метрологическая характеристика методов определения синтетических пиретроидов

Препарат	Анализируемый объект	Среднее значение определения, %		Относительное стандартное отклонение		Доверительный интервал среднего при n = 5, p = 0,95, %
		ТСХ	ГЖХ	ТСХ	ГЖХ	ТСХ	ГЖХ
Амбуш	Вода			2,3	5,7
	Почва			3,6	5,2
	Картофель			3,2	5,7
Рипкорд	Вода			2,5	4,3
	Почва			3,1	5,3
	Картофель			3,2	4,3
Сумицидин	Вода			3,1	1,7
	Почва			3,2	3,0
	Картофель			3,7	2,2
Децис	Вода			2,2	3,2
	Почва			3,4	3,7
	Картофель			3,6	2,8

Для метода ТСХ. Пластинки "Силуфол" . Аммиак ч., 25%-ный водный раствор. Нитрат серебра. Фосфорно-молибденовая кислота ч.д.а. Спирт этиловый 96%-ный.

Проявляющие реагенты: N 1 - 0,5 г нитрата серебра растворяют в 5 мл дистиллированной воды, прибавляют 7 мл 25%-ного раствора аммиака и доводят объем раствора до 100 мл ацетоном; N 2 - 10%-ная фосфорно-молибденовая кислота в этиловом спирте.

Для метода ГЖХ. Неподвижные фазы: 5% SE-30 на хроматоне N-AW-HDMC (0,16-0,20 мм); 3% OV-1 на хроматоне N-AW-НDMS (0,125-0,160 мм); 5% ПМС-100 на хроматоне N-AW (0,100-0,125 мм). Азот особой чистоты.

Стандартные растворы: N 1 - основной стандартный раствор пиретроидов в гексане (500 мкг/мл). Хранят в холодильнике в течение 6 мес.; N 2 - стандартный раствор пиретроидов в гексане или бензоле (10 мкг/мл). Хранят в холодильнике в течение 2 недель.

Приборы и посуда. Колбы: конические на 50 и 250 мл; круглодонные со шлифами для отгонки растворителей; мерные. Делительные воронки на 50; 100 и 250 мл. Воронки. Колонки для адсорбционной хроматографии длиной 30 см с диаметром 15 мм. Аппарат для встряхивания колб. Прибор для отгонки растворителей (ротационный вакуумный испаритель). Камера хроматографическая. Микропипетки на 0,1-0,2 мл. Хроматоскоп (хемоскоп). Пульверизатор стеклянный. Микрошприцы на 10 мкл. Газовый хроматограф "Цвет", "Газохром" с ДЭЗ (ДПР).

Подготовка к анализу. Приготовление хроматографической колонки. В колонку помещают ватный тампон, последовательно 3-4 г сульфата натрия, 5 г оксида алюминия, 2 г безводного сульфата натрия.

Ход анализа. Экстракция и очистка экстрактов. Пробу воды (500 мл) помещают в делительную воронку, добавляют 10 г хлорида натрия, хорошо перемешивают и трижды экстрагируют хлороформом порциями по 50 мл. Пропускают экстракт через слой сульфата натрия и упаривают до объема 0,3-0,5 мл при температуре бани не выше 50°С, а затем досуха на воздухе. Остаток в колбе растворяют в 1 мл гексана и хроматографируют (ТСХ и ГЖХ).

Измельченную пробу растительного материала (овощи, фрукты, зеленая масса) массой 25 г помещают в коническую колбу, заливают 50 мл 50%-ного водного ацетона, встряхивают в течение 1 ч. Экстракцию повторяют трижды. Экстракты фильтруют через бумажный фильтр, объединяют и помещают на 1 ч в холодильник. При выпадении осадка пробу следует отфильтровать вторично. Объединенный фильтрат переносят в делительную воронку и экстрагируют пиретроиды 30 мл гексана. Встряхивают 5-10 мин, отделяют гексан, а водный раствор встряхивают еще дважды с 30 мл гексана. Объединяют гексановую фракцию, сушат безводным сульфатом натрия и концентрируют до объема 0,3-0,5 мл на ротационном испарителе при температуре бани не выше 50°С затем на воздухе досуха. Остаток в колбе растворяют в 1 мл гексана и хроматографируют (ГЖХ и ТСХ). Если конечные экстракты получились недостаточно чистые, их дополнительно очищают с помощью ацетонитрила или методом колоночной хроматографии. В первом случае к сухому остатку в колбу добавляют 3-5 мл ацетонитрила, встряхивают 1-2 мин. Переносят ацетонитрил количественно (смывая колбу 1-2 мл свежего ацетонитрила) в делительную воронку и приливают 50 мл 2%-ного раствора хлорида натрия. Пиретроиды дважды экстрагируют гексаном порциями по 30 мл, встряхивая по 1-2 мин. Пиретроиды переходят в гексан, коэкстрактивные вещества остаются в водном растворе. Объединенный гексановый экстракт сушат безводным сульфатом натрия, упаривают досуха. Остаток растворяют в 1 мл гексана и хроматографируют.

Для очистки экстракта подготовленную колонку промывают 30-40 мл хлороформа или бензола, элюат отбрасывают. Вносят в колонку остаток пробы после упаривания (если растворитель был удален досуха, остаток растворяют в 1-2 мл гексана) порциями по 1-2 мл гексана, дают раствору впитаться и элюируют пиретроиды 50 мл бензола. Элюат концентрируют досуха. Остаток растворяют в 1 мл гексана и хроматографируют.

Пробу почвы (20 г) помещают в коническую колбу, заливают 50 мл смеси ацетона и хлорида кальция (1:1), встряхивают в течение 1 ч. Экстракцию повторяют трижды. Экстракты фильтруют, объединяют, переносят в делительную воронку и экстрагируют пиретроиды 30 мл гексана. Встряхивают 5-10 мин, отделяют гексан, а водный раствор встряхивают еще дважды с 30 мл гексана. Объединяют гексановую фракцию, сушат безводным сульфатом натрия и концентрируют досуха. Остаток в колбе растворяют в 1 мл гексана и хроматографируют. Если конечные экстракты получились недостаточно чистыми, их дополнительно очищают с помощью ацетонитрила или методом колоночной хроматографии (так же, как при анализе растительного материала).

Условия хроматографирования (метод ГЖX). В хроматограф последовательно вводят по 5 мкл стандартного раствора N 2 и пробы. Носитель - хроматон N-AW-HDMC (0,16-0,20 мм). Шкала электрометра А. Линейный диапазон детектирования 3-15 нг. Нижний предел определения (нг): амбуш - 10, рипкорд - 3, сумицидин - 5, децис - 5. Время удерживания пиретроидов приведено в таблице 72.

72. Время удерживания пиретроидов при различных условиях хроматографирования

Препарат	Неподвижная фаза
	5% SE-30*	3% OV-1**
Амбуш	1 мин 24 с	1 мин 57 с
Рипкорд	2 мин 30 с	2 мин 20 с
Сумицидин	3 мин 06 с	-
Децис	3 мин 36 с	3 мин 30 с

______________________________

* Длина колонки 0,5 м. Температура (°С): испарителя - 240, колонки - 220, детектора - 250. Скорость потока азота 60 мл/мин.

** Длина колонки 1 м. Температура (°С): испарителя - 270, детектора - 280. Скорость потока азота 30 мл/мин.

Для идентификации амбуша (перметрина) может быть использована колонка длиной 1 м с 5% ПМС-100 на хроматоне N-AW. Температура испарителя и детектора 270°С, колонки - 240°С. Скорость азота 60 мл/мин. Время удерживания амбуша 7 мин 30 с.

Тонкослойная хроматография. Экстракт после определения методом ГЖХ упаривают до 0,2-0,3 мл и количественно наносят на хроматографическую пластинку "Силуфол". Помещают пластинку в камеру, содержащую смесь растворителей гексан - ацетон (4:1). После развития хроматограммы и высушивания на воздухе пластинку обрабатывают одним из проявляющих реагентов.

При обработке раствором нитрата серебра после облучения УФ-светом в течение 5 мин пиретроиды проявляются в виде серо-черных пятен. Нижний предел определения рипкорда 3 мкг, амбуша, дециса, сумицидина - 5 мкг.

При обработке 10%-ным раствором фосфорно-молибденовой кислоты в этиловом спирте нижний предел определения составляет 3-10 мкг.

Хроматограммы на пластинках "Силуфол" до опрыскивания проявляющими реагентами можно просматривать в хроматоскопе. В УФ-свете ( нм) пиретроиды обнаруживаются в виде темных пятен на флуоресцирующем фоне. Предел обнаружения - 3 мкг. Величины пиретроидов на пластинках "Силуфол" при использовании в качестве подвижного растворителя смеси гексана с ацетоном (4:1) равны: для амбуша - 0,61, рипкорда - 0,44, сумицидина - 0,34, дециса - 0,45.

Обработка результатов анализа. При использовании метода ГЖX количественное определение проводят путем сравнения пиков пробы и стандарта (при условии, что пики близки по величине и определение ведется в диапазоне линейности детектора). Количественную оценку пиков хроматограммы проводят по площади пика, рассчитывая ее как произведение высоты пика на ширину, измеренную на половине высоты.

Количество препарата в пробе (X, мг/кг или мг/л) рассчитывают по формуле

,

где - количество препарата во введенном в хроматограф стандартном растворе, нг; - площадь пика стандартного раствора пиретроида, введенного в хроматограф, ; S - площадь пика исследуемого раствора, ; - объем экстракта, введенный в хроматограф, мкл; - объем анализируемого экстракта после упаривания, мл; Р - навеска или объем анализируемой пробы, г или мл.

При использовании метода ТСX содержание препарата в пробе (X, мг/кг или мг/л) рассчитывают по формуле

,

где A - количество препарата, найденное путем сравнения размера или интенсивности пятен пробы и стандартного раствора, мкг; Р - навеска анализируемой пробы, г или мл.

Требования безопасности. Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями и токсичными веществами.

______________________________

* Разработаны Д.Б. Гиренко, М.А. Клисенко, (ВНИИГИНТОКС); Т.М. Петровой, Е.Г. Красниковой (ВИЗР); А.Ф. Скурьят, Е.М. Бунякиной (БелНИИЗР).