Приложение N 6. Методические рекомендации по контролю стерильности изделий медицинского назначения

Приложение N 6
к приказу Министерства
здравоохранения СССР
от 17.01.1979 г. N 60

Методические рекомендации
по контролю стерильности изделий медицинского назначения*

1. Общие положения

1.1. Методические рекомендации по контролю стерильности изделий медицинского назначения предназначены для работников бактериологических лабораторий промышленных предприятий, санитарно-эпидемиологических станций, лечебно-профилактических учреждений, осуществляющих контроль стерильности.

1.2. Бактериологические лаборатории промышленных предприятий регулярно проверяют стерильность выпускаемой стерилизованной продукции.

1.3. Бактериологические лаборатории санитарно-эпидемиологических станций и лечебно-профилактических учреждений проводят контроль стерильности изделий медицинского назначения, стерилизуемых в лечебно-профилактических учреждениях.

2. Мероприятия, обеспечивающие асептические условия при посевах

2.1. Требования к помещению для посева на стерильность

Контроль стерильности простерилизованной продукции проводят при условиях, исключающих возможность вторичной контаминации, в специально оборудованных помещениях с соблюдением правил асептики.

Посев исследуемого материала желательно проводить в настольных боксах с ламинарным потоком воздуха. Эти боксы размещают в отдельных помещениях бактериологической лаборатории.

При отсутствии боксов с ламинарным потоком воздуха контроль стерильности проводят в боксированных помещениях (бокс с предбоксником). Общая площадь бокса должна быть не менее 3 кв. м.

2.1.1. В боксированном помещении стены должны быть окрашены масляной краской или выложены кафельной плиткой, не должны иметь выступов, карнизов, щелей, трещин; пол в боксе и рабочий стол должны быть покрыты линолеумом, стенки и ножки стола покрашены масляной краской.

2.1.2. Боксы оборудуют приточно-вытяжной вентиляцией (с преобладанием притока над вытяжкой), в них подается стерильный воздух, прошедший через бактериальные фильтры с материалом Петрянова.

2.1.3. В боксе и предбокснике устанавливают настенные (БОН) и потолочные (ОБП) ультрафиолетовые облучатели из расчета 2 вт. удельной мощности ламп, создающих прямое излучение, на 1 кв. м помещения. Облучатели размещают на высоте 2-2,5 м от пола.

2.2. Подготовка бокса, инструментов и персонала к работе

2.2.1. Ежедневно до проведения работы помещения бокса и предбоксника подвергают тщательной обработке. Стены, пол, поверхности инвентаря протирают 3% раствором перекиси водорода с 0,5% моющего средства (Триас-А, Астра, Лотос). В случае обнаружения в воздухе грибов или споровых форм микроорганизмов влажную уборку проводят 6% раствором перекиси водорода с 0,5% выше перечисленных моющих средств. Описание приготовления дезинфицирующих растворов и правила пользования растворами перекиси водорода изложены в разделе 3.

Внутреннюю поверхность настольного бокса обрабатывают так же, как и помещение бокса. Через 45-60 минут после обработки в бокс вносят все необходимые для работы материалы и инструменты, кроме образцов изделий.

2.2.2. Перед внесением материалов в настольном боксе включают вентиляцию на время, достаточное для обеспечения полного обмена воздуха в нем.

2.2.3. За 1,5-2 часа до начала работы в боксе и предбокснике на 1-1,5 часа включают бактерицидные лампы.

2.2.4. Инструменты, посуду и спецодежду, используемые в работе, предварительно стерилизуют в паровом стерилизаторе. Металлические, стеклянные и тканевые изделия обрабатывают при следующем режиме: температура , время стерилизационной выдержки 20 минут; изделия из резины (перчатки и т.д.) - при температуре в течение 45 минут.

В процессе работы вспомогательный инструмент 2-3 раза заменяют новым стерильным комплектом.

2.2.5. Перед входом в бокс работники лаборатории тщательно моют руки теплой водой с мылом и щеткой, вытирают стерильным полотенцем, надевают в предбокснике на ноги бахилы, стерильные халаты, 4-слойные маски, шапочки, на руки - стерильные перчатки.

2.2.6. В процессе посева в боксе регулярно проверяют обсемененность воздуха. Для этого на рабочий стол ставят 2 чашки с питательным агаром, открывая их на 15 минут, затем чашки помещают в термостат при температуре 37°С на 48 часов.

Допускается рост не более трех колоний неспорообразующих сапрофитов.

В случае роста на чашках более 3 колоний проведение дальнейших работ в данном боксе запрещается, в нем дополнительно проводят тщательную обработку 6% раствором перекиси водорода с 0,5% моющих средств.

3. Приготовление дезинфицирующих растворов и правила пользования растворами перекиси водорода

3.1. Приготовление растворов комплекса перекиси водорода с моющими средствами Триас-А, Астра, Лотос проводят в соответствии с расчетом, приведенным в таблице.

Состав рабочего раствора		Количество пергидроля, воды, моющего средства, необходимое для приготовления 1 л раствора
Концентрация в %		пергидроля в зависимости от концентрации в нем перекиси водорода		Воды в мл	Моющего средства в г
перекиси водорода	моющего средства	концентрация перекиси водорода в пергидроле в %	количество пергидроля в мл на 1 л раствора
3,0	0,5	30,0	100	89,5
		31,0	97	898
		32,0	94	901	5
		33,0	90	905
6,0	0,5	30,0	200	795
		31,0	194	801
		32,0	188	807	5
		33,0	180	815

При приготовлении раствора пергидроль приливают к раствору моющего средства.

3.2. При приготовлении растворов перекиси водорода и работе с 6% растворами руки защищают резиновыми перчатками, а глаза - герметичными очками. При попадании пергидроля на кожу или в глаза их немедленно промывают обильным количеством водопроводной воды. При несоблюдении указанных правил техники безопасности могут развиться дерматиты и конъюнктивиты. Запасы препарата хранят в местах, недоступных для общего пользования, в темной посуде, желательно, при температуре +4°С.

4. Правила отбора проб для контроля стерильности на промышленных предприятиях

4.1. На промышленных предприятиях контролю подлежит каждая серия изделий, простерилизованных паровым и газовым методами, каждая партия продукции, простерилизованная радиационным методом.

Серией называется количество продукции, простерилизованной паровым или газовым методами за один цикл в одном стерилизаторе; партией называется количество продукции, простерилизованной паровым, газовым, радиационным методами за сутки.

4.1.1. Отбор проб проводят работники бактериологической лаборатории предприятия. При контроле радиационно стерилизованной продукции отбор проб осуществляют не менее 2 раз в различное время суток, пробы отбирают из упаковок, получивших в процессе стерилизации наименьшую дозу стерилизующего агента, при газовой и паровой стерилизации - из разных точек стерилизатора.

4.1.2. На предприятиях-изготовителях отбор проб для первичного контроля на стерильность проводят по формуле , где п - количество изделий в партии или серии.

При радиационном методе стерилизации максимальное количество проб, отбираемых для первичного посева, 40, при газовом и паровом - 13.

Кроме изделий, направленных непосредственно на анализ, отбирают также дубликаты в тройном количестве: две части из них используют в случае необходимости для повторного контроля, одну часть оставляют для арбитражного хранения.

При отсутствии роста в первичных посевах дубликаты, предназначенные для повторного контроля, подлежат реализации.

При отборе проб следует руководствоваться таблицами 4.1. и 4.2.

4.1.3. Вопрос о возможности сокращения количества контролируемых на стерильность изделий (количество партий, количество изделий из серии), выпускаемых конкретными предприятиями, решается Министерством здравоохранения СССР в установленном порядке по представлению соответствующих Министерств по истечении не менее, чем трех лет с начала выпуска продукции, стерилизуемой в одних и тех же аппаратах или установках, по одной и той же технологии, при условии отсутствия за это время нестерильных серий, партий продукции.

Таблица 4.1.
приложения N 6
к приказу Министерства
здравоохранения СССР
от 17 января 1979 г. N 60

Отбор проб для контроля стерильности изделий, простерилизованных радиационным методом на промышленных предприятиях

Количество простерилизованных изделий в шт.		Количество изделий (шт.)
в партии	отбираемое для контроля	первичного посева на стерильность	повторного посева на стерильность (дубликаты)	арбитражного хранения
до 1000	52	13	26	13
2000	72	18	36	18
3000	88	22	44	22
4000	100	25	50	25
5000	112	28	56	28
6000	124	31	62	31
7000	136	34	68	34
8000	144	36	72	36
9000	152	38	76	38
10000 и более	160	40	80	40

Таблица 4.2.
приложения N 6
к приказу Министерства
здравоохранения СССР
от 17 января 1979 г. N 60

Отбор проб для контроля стерильности изделий, простерилизованных паровым и газовым методами на промышленных предприятиях

Количество простерилизованных изделий (шт.)		Количество изделий (шт.) для
в серии	отбираемое для контроля	первичного контроля стерильности	повторного контроля стерильности	арбитражного хранения
до 100	16	4	8	4
200	24	6	12	6
300	28	7	14	7
400	32	8	16	8
500	36	9	18	9
600	40	10	20	10
700	44	11	22	11
800	44	11	22	11
900	48	12	24	12
1000 и более	52	13	26	13

5. Методика и техника посева изделий, простерилизованных на промышленных предприятиях

5.1. Определение стерильности продукции должно проводиться не ранее, чем через 24 часа после стерилизации.

5.2. Для контроля стерильности используют следующие питательные среды:

- сахарный бульон Хоттингера (0,5 и 1% глюкозы);

- тиогликолевую среду;

- бульон Сабуро.

При контроле стерильности изделий, простерилизованных радиационным методом, применяют бульон Хоттингера с 1% глюкозы, простерилизованных газовым и паровым методами - с 0,5% глюкозы.

Одновременный посев изделий (или их отдельных узлов и составных частей) на 3 вышеуказанные среды обязателен. При посеве изделия или его части непосредственно в питательную среду количество среды в пробирке (колбе, флаконе и т.д.) должно быть достаточным для полного погружения изделия или его части.

5.3. Посевы в бульон Хоттингера и тиогликолевую среду выдерживают в термостате при температуре 32°С, бульон Сабуро - при температуре 20-22°C.

Посевы инкубируют в термостате при соответствующей температуре в течение 14 суток при контроле изделий, простерилизованных радиационным и газовым методами, простерилизованных паровым методом - 8 суток.

5.4. Описание состава, способа приготовления и правила контроля стерильности питательных сред, используемых при контроле стерильности изделий медицинского назначения, изложены в разделе 9.

5.5. На пробирках и колбах с посевами делают на этикетках или карандашом по стеклу надписи с указанием даты посева, N партии (серии), N образца и N пробирки (колбы, флакона).

5.6. Методика посева на стерильность различных изделий, выпускаемых промышленностью, имеет специфические особенности. Описание некоторых методик приводится в п.п. 5.7.1.-5.7.28. По мере освоения выпуска других стерилизованных изделий этот раздел должен быть дополнен.

5.7. При контроле продукции, простерилизованной на предприятии-изготовителе, в предбокснике наружную упаковку исследуемых изделий протирают с помощью стерильного пинцета стерильной салфеткой, смоченной 6% раствором перекиси водорода, и оставляют на стерильном лотке на 30 минут, затем ее разрезают и изделие во внутренней упаковке переносят в бокс.

Посевы производит бактериолог с помощью лаборанта, который берет исследуемый пакет, разрезает простерилизованными и фламбированными ножницами (смоченными в спирте и проведенными через пламя горелки) внутренний пакет.

5.7.1. Посев на стерильность полимерных систем для взятия и переливания крови и кровезаменителей одноразового использования (система для переливания крови, кровезаменителей и инфузионных растворов СП-1, система для вливания кровезаменителей и инфузионных растворов с одновременным измерением венозного давления ПК-03, система комбинированная для переливания крови, кровезаменителей и инфузионных растворов КР 11-01).

В пакет наливают 25-30 мл стерильного физиологического раствора, ополаскивают внутреннюю поверхность пакета и наружную поверхность системы, из пакета стерильной пипеткой отбирают часть физиологического раствора, который по 2 мл засевают в 2 пробирки с 10 мл тиогликолевой среды, в 2 пробирки с 10 мл сахарного бульона Хоттингера и 2 пробирки с 10 мл бульона Сабуро.

Не извлекая систему из пакета, стерильными ножницами снимают защитный колпачок с иглы, отрезают иглу и опускают в пробирку с 10 мл сахарного бульона Хоттингера.

Вводят в систему стерильный физиологический раствор, промывают ее, после промывания обрезают противоположный конец системы с иглой и выливают по 1 мл пробирки с 10 мл указанных питательных сред. На каждую среду берут по 2 пробирки.

5.7.2. Посев на стерильность систем для взятия крови СВ-1, систем для растворения сухих лекарственных препаратов, систем-магистралей для переливания раствора из флакона во флакон.

Стерильным пинцетом извлекают изделие из упаковки. Снимают колпачки, отрезают иглы, нарезают трубки на части длиной 2-3 см и погружают все изделие во флакон (колбу) с тиогликолевой средой. Второе изделие засевают на сахарный бульон Хоттингера, третье - на бульон Сабуро. Таким образом для посевов отбирают количество изделий, кратное трем (3, 6, 9 и т.д.).

5.7.3. Посев на стерильность контейнеров полимерных с консервантом для крови одинарных 500 мл однократного применения.

Освобождают изделие в предбокснике от внутренней упаковки, протирают наружную поверхность контейнера 6% раствором перекиси водорода, укладывают на стерильный лоток, укрывают вторым стерильным лотком, после заполнения лотка контейнерами его вносят в бокс и оставляют на 30 минут, после чего проводят посев консерванта на стерильность.

При наличии шариков в контейнере их выдавливают из основания трубки, тщательно ополаскивают внутреннюю поверхность контейнера, передавливая консервант в трубки и обратно в контейнер. Затем снимают колпачок с иглы и через иглу надавливанием на контейнер, расположенный вертикально основанием вверх, свернув всю свободную от консерванта часть контейнера, вытесняют около 2,5 мл консерванта в 2 пробирки с 10 мл сахарного бульона Хоттингера, 2 пробирки с 10 мл бульона Сабуро и 2 пробирки с 10 мл тиогликолевой среды. При наличии в консерванте антибиотика засевают по 2,5 мл консерванта в 2 флакона со 100 мл тиогликолевой среды, 2 флакона со 100 мл сахарного бульона Хоттингера и 2 флакона со 100 мл бульона Сабуро.

Штуцера в предохранительной оболочке срезают стерильными ножницами, желательно изогнутыми; извлекают штуцер пинцетом из предохранительной оболочки и помещают в пробирку с 10 мл тиогликолевой среды.

5.7.4. Посев на стерильность контейнеров полимерных с консервантом для крови и ее компонентов сдвоенных 500/300 мл однократного применения.

Подготовку изделий к посеву проводят в соответствии с п. 5.7.3.

Перед посевом тщательно ополаскивают консервантом обе секции контейнера, передавливая его через соединительную трубку. При наличии в изделии шариков перед посевом выдавливают их в контейнер.

Посев консерванта проводят в соответствии с п. 5.7.3.

5.7.5. Посев на стерильность упакованных пакетов для контейнеров полимерных с консервантом для крови одинарных 500 мл однократного применения и контейнеров полимерных с консервантом для крови и ее компонентов сдвоенных 500/300 мл однократного применения.

В упакованный пакет наливают 25-30 мл стерильного физиологического раствора. Тщательно ополаскивают им внутренние стенки пакета. Затем пипеткой сеют по 2,0 мл физиологического раствора в 2 пробирки с 10 мл тиогликолевой среды, 2 пробирки с 10 мл сахарного бульона Хоттингера и 2 пробирки с 10 мл бульона Сабуро.

5.7.6. Посев на стерильность контейнеров полимерных для компонентов крови одинарных 300 мл однократного применения.

Освобождают изделие от наружного упаковочного пакета. Во внутренний упаковочный пакет наливают 25-30 мл стерильного физиологического раствора, тщательно ополаскивают внутреннюю поверхность пакета и наружную поверхность контейнера. Из пакета пипеткой засевают по 1-2 мл физиологического раствора в 2 пробирки с 10 мл тиогликолевой среды, 2 пробирки с 10 мл сахарного бульона Хоттингера и 2 пробирки с 10 мл бульона Сабуро.

Затем извлекают контейнер, снимают с иглы защитный колпачок, отрезают иглу вместе с полимерным фиксатором и опускают ее в пробирку (флакон) с 10 мл тиогликолевой среды. Вводят через эту трубку пипеткой Мора (или шприцем) 25-30 мл стерильного физиологического раствора и туго завязывают узлом трубку. Тщательно ополаскивают внутренние стенки контейнера. Затем отрезают трубку ниже узла и надавливанием на контейнер вытесняют через трубку 1-2 мл физиологического раствора в 2 пробирки с 10 мл сахарного бульона Хоттингера, 2 пробирки с 10 мл тиогликолевой среды и 2 пробирки с 10 мл бульона Сабуро.

5.7.7. Посев на стерильность контейнеров полимерных для компонентов крови сдвоенных 300/300 мл однократного применения.

Подготовку изделий к посеву проводят в соответствии с п. 5.7.5.

Перед посевом тщательно ополаскивают одну, а затем вторую секцию контейнера 25-30 мл физиологического раствора, введенного в него через трубку после обрезки иглы и посева ее. Физиологический раствор передавливают из секции в секцию через соединительную трубку. При наличии в изделии шариков их выдавливают в контейнер перед ополаскиванием.

Посев физиологического раствора проводят в соответствии с п. 5.7.6.

5.7.8. Посев на стерильность комплектов полимерных мешков для хранения сухих кровезаменителей.

Перед предбоксником наружную упаковку комплекта полимерных мешков протирают с помощью стерильного пинцета стерильной салфеткой, смоченной 6% раствором перекиси водорода, кладут на стерильный лоток, накрывают стерильной бумагой и вносят в предбоксник, где оставляют на 30 минут. Затем бумагу снимают, разрезают наружную упаковку, вынимают комплект полимерных мешков, помещают их на стерильный лоток и переносят в бокс.

В боксе вынимают полимерный мешок, пипеткой Мора наливают в него 25-30 мл стерильного физиологического раствора, ополаскивают внутреннюю поверхность мешка. Затем стерильной пипеткой отбирают 6 мл физиологического раствора, который по 2 мл засевают в 2 пробирки с 10 мл сахарного бульона Хоттингера, 2 пробирки с 10 мл тиогликолевой среды и 2 пробирки с 10 мл бульона Сабуро.

5.7.9. Посев на стерильность полимерных емкостей разового использования для замораживания биопродуктов и хранения их в замороженном состоянии при температуре - (типа "Гемофлекс").

В упаковку (пакет) наливают 25-30 мл стерильного физиологического раствора, ополаскивают внутреннюю поверхность пакета и наружную поверхность емкости. Из упаковки (пакета) стерильной пипеткой отбирают часть физиологического раствора, который по 2 мл засевают в 2 пробирки с 10 мл тиогликолевой среды, в 2 пробирки с 10 мл сахарного бульона Хоттингера и 2 пробирки с 10 мл бульона Сабуро. Вынимают мешок и, срезав верхнюю часть одной трубки, заливают в нее пипеткой 25-30 мл стерильного физиологического раствора, тщательно ополаскивают им внутренние поверхности емкости, затем располагают емкость основанием вверх и, свернув всю свободную от физиологического раствора часть, надавливанием на емкость вытесняют небольшое количество раствора (по 1-2 мл) в 2 пробирки с каждой из перечисленных сред.

5.7.10. Посев на стерильность катетеров внутривенных.

Снимают колпачки, отрезают иглы, нарезают трубку на части длиной 2-3 см, погружают все изделие во флакон (колбу) с тиогликолевой средой. Второе изделие засевают на сахарный бульон Хоттингера, третье - на бульон Сабуро. Таким образом для посевов отбирают количество изделий, кратное трем (п. 5.7.2.).

5.7.11. Посев на стерильность катетеров: носовых детских, пупочных детских, желудочных детских, носоглоточных, кишечных, ректальных, эндобронхотрахеальных, эпидуральных, лоханочных, почечно-полостных, риноларингологических гортанных, уретральных, мочеточниковых, катетеров для обменного переливания крови, для искусственного вскармливания новорожденных, подключичных.

Стерильным пинцетом извлекают изделие из упаковки. При наличии в изделии металлических вводных устройств (стилетов и т.д.) необходимо их вынуть непосредственно перед посевом. Затем изделие стерильными острыми ножницами разрезают на равные части длиной 3-5 см. Если позволяют размеры изделия, его разрезают внутри упаковки. Части изделия в равном количестве погружают в 3 колбы с сахарным бульоном Хоттингера, тиогликолевой средой и бульоном Сабуро. При наличии в изделии одной иглы, резиновой трубки или канюли (катетер эпидуральный, носовой, подключичный и др.) их погружают в тиогликолевую среду.

5.7.12. Посев на стерильность игл для родничковой пункции.

Извлекают изделие из упаковки, отрезают иглу, разрезают оставшуюся часть изделия на кусочки размером 3-5 см и погружают все изделие во флакон (колбу) с питательной средой. Одно изделие полностью засевают на тиогликолевую среду, второе - на сахарный бульон Хоттингера, третье - на бульон Сабуро. Для посевов отбирают количество игл для родничковой пункции, кратное трем (3, 6, 9 и т.д.).

5.7.13. Посев на стерильность катетеров для длительных внутривенных вливаний (Браунюля).

Извлекают изделие из упаковки, стерильным пинцетом вынимают иглу и опускают ее во флакон (колбу) с питательной средой. Туда же раздельно опускают пластиковый катетер и защитный колпачок. Одно изделие полностью засевают на тиогликолевую среду, второе на сахарный бульон Хоттингера, третье - на бульон Сабуро. Для посевов отбирают количество изделий, кратное трем (п. 5.7.12.).

5.7.14. Посев на стерильность зондов дуоденальных из полимерных материалов, зондов желудочных, трубок интубационных различных номеров.

Вскрывают упаковку и стерильным пинцетом извлекают изделие. Стерильными ножницами разрезают трубку на равные части длиной 3-5 см и погружают их в равном количестве в три флакона с сахарным бульоном Хоттингера, тиогликолевой средой и бульоном Сабуро.

5.7.15. Посев на стерильность электродов эндокардиальных монополярных для временной стимуляции сердца (ЭПВП-1), эндокардиальных монополярных для временной стимуляции сердечной деятельности (ЭВЖР-1), эндокардиальных для постоянной стимуляции сердца (желудочковый, марки ЭКПЖ-1), миокардиальных монополярных для постоянной стимуляции сердца (МЭПР-1).

В предбокснике вынимают изделие в упаковке из коробки, обрабатывают упаковку в соответствии с п. 5.7, вносят изделие в бокс. В боксе стерильными ножницами освобождают изделие от упаковки и удаляют вводное устройство (стилет) при его наличии.

Изделие разрезают стерильными острыми ножницами на отрезки длиной 3-5 см и все их погружают по флакон с питательной средой. Для посева отбирают количество изделий, кратное трем (п. 5.7.12.).

5.7.16. Посев на стерильность имплантируемых стимуляторов сердца.

Стерильными ножницами разрезают внутреннюю упаковку, руками в стерильных перчатках извлекают стимулятор. В течение 30 сек. протирают поверхность стимулятора стерильной, смоченной в стерильном физиологическом растворе марлевой салфеткой (размером 5x5 см), которую помещают в пробирку с 15 мл физиологического раствора и встряхивают в шуттель-аппарате в течение 10 минут. Затем стерильной пипеткой отбирают физиологический раствор и засевают его по 2 мл в 2 пробирки с 10 мл каждой из сред (п. 5.7.1.).

5.7.17. Посев на стерильность манжеток для новорожденных.

Из упаковки стерильным пинцетом извлекают изделие и помещают в колбу с 50 мл физиологического раствора. Колбу с изделием встряхивают на шуттель-аппарате в течение 10 минут. По окончании встряхивания из колбы стерильно извлекают пипеткой физиологический раствор и засевают его по 2 мл в пробирки с тиогликолевой средой, сахарным бульоном Хоттингера и бульоном Сабуро. Объем питательной среды в пробирках по 10 мл.

5.7.18. Посев на стерильность насадочных частей автоматических шприцев.

Перед посевом наружную поверхность отобранных образцов насадочных частей автоматических шприцев протирают стерильными салфетками, смоченными 6% раствором перекиси водорода. Стерильным пинцетом открывают крышку насадочной части и далее стерильной иглой или металлическим стержнем прорывают тонкий участок дна чехла и выталкивают содержимое в стерильный сосуд, производят посев содержимого по 2 мл в 2 пробирки с 10 мл каждой из сред, указанных в п. 5.2. С помощью стерильного пинцета отсоединяют иглу с иглодержателем от капсулы и помещают в пробирку с тиогликолевой средой.

5.7.19. Посев на стерильность шприцев однократного применения "Рекорд".

Стерильными ножницами вскрывают упаковку и с помощью пинцета извлекают поочередно поршень шприца, придерживая цилиндр в упаковке, затем цилиндр и иглы (при их наличии). Все указанные части шприца погружают в один флакон (колбу) с питательной средой. Для посева отбирают количество изделий, кратное трем (п. 5.7.12.).

5.7.20. Посев на стерильность игл инъекционных разового использования.

Ножницами отрезают одну секцию упаковки с одной иглой. Стерильными ножницами вскрывают упаковку со стороны выхода иглы из колпачка и с помощью пинцета извлекают поочередно иглу, придерживая колпачок в упаковке, затем извлекают колпачок и погружают их в одну пробирку (флакон) с питательной средой. Для посева отбирают количество изделий, кратное трем (п. 5.7.12.).

5.7.21. Посев на стерильность клипс нейрохирургических (МРТУ 64-12581-72), игл инъекционных трубчатых к шприцам типа "Рекорд" (МРТУ 42-440-64), съемных лезвий для скальпеля (ГОСТ 1435-54), пульпоэкстракторов (МРТУ 64-1-1085-63), копий-скарификаторов для прокола пальца (ТУ 62-1-100-72), скобок танталовых для сшивающих аппаратов, боров зубных (МРТУ 64-1903-73).

Стерильными ножницами вскрывают упаковку, с помощью пинцета извлекают изделие и погружают его в пробирку с питательной средой. Для посева отбирают количество изделий, кратное трем (п. 5.7.12).

5.7.22. Посев на стерильность спиц для скелетного вытяжения (МРТУ 64-1-452-69).

Стерильными ножницами вскрывают упаковку и стерильным пинцетом вынимают изделие из упаковки. Стерильной марлевой салфеткой, смоченной в стерильном физиологическом растворе (размер салфетки 5х5 см, на смачивание одной салфетки требуется 0,5 мл раствора), тщательно протирают изделие в течение 30 сек. и затем полностью погружают салфетку в тиогликолевую среду. Смывы с других изделий соответственно погружают в сахарный бульон Хоттингера и бульон Сабуро. Таким образом для посева отбирают количество изделий, кратное трем (п. 5.7.12.).

5.7.23. Посев на стерильность игл атравматических с шовным материалом.

Разрезают внутреннюю упаковку, стерильным пинцетом извлекают иглу из пакета. Поместив изделие в стерильную чашку Петри, перегибают бумагу поперек расположения шовного материала, снимают иглу и нить с этикеточной бумаги. Далее осторожно с помощью двух пинцетов захватывают изделие и помещают в пробирку с сахарным бульоном Хоттингера. Следующее изделие помещают в тиогликолевую среду и третье изделие в бульон Сабуро. Для посевов на стерильность отбирают количество изделий, кратное трем.

5.7.24. Посев на стерильность контрацептивов полиэтиленовых (МРТУ 64-1-175-68).

Стерильными ножницами срезают часть упаковки и стерильным пинцетом вынимают изделие. Затем режут изделие на три равные части и каждую из них погружают соответственно в пробирку с тиогликолевой средой, сахарным бульоном Хоттингера и бульоном Сабуро.

5.7.25. Посев на стерильность липкой полимерной пленки для закрытия операционного поля.

Вскрывают упаковку, с помощью стерильного пинцета извлекают пленку из упаковки. От каждой пленки, не разворачивая ее, стерильными ножницами отрезают 3 полоски шириной около 1 см и длиной около 4 см (ширина отрезаемой полоски должна быть немного меньше диаметра используемой для посева пробирки). От вырезанных полосок отделяют липкую полимерную пленку, опускают ее и бумагу-подложку в одну широкую пробирку (флакон). Посев проводят на 3 питательные среды (п. 5.2.).

5.7.26. Посев на стерильность пленки-повязки липкой для закрытия локальных ожогов и ран.

Стерильными ножницами разрезают упаковку, пинцетом вынимают пленку-повязку и слегка заворачивают липкую часть пленки вовнутрь. Затем изделие помещают в широкогорлую колбу (флакон) со 100 мл питательной среды. Одно изделие полностью засевают на тиогликолевую среду, другое - на сахарный бульон Хоттингера, третье - на бульон Сабуро. Для посевов отбирают количество изделий, кратное трем (3, 6, 9 и т.д.). После посева колбы тщательно встряхивают до полного погружения пленки-повязки в питательную среду и помещают в термостат.

5.7.27. Посев на стерильность чашек Петри пластмассовых различного диаметра.

Стерильными ножницами вскрывают упаковку, извлекают чашку Петри, помещают ее на стерильный лоток, 2/3 объема чашки заполняют стерильным физиологическим раствором, закрывают чашку крышкой и несколько раз вращают круговыми движениями в горизонтальном направлении. Затем отбирают физиологический раствор пипеткой и по 2 мл его засевают в 2 пробирки с тиогликолевой средой, 2 пробирки с бульоном Сабуро и 2 пробирки с сахарным бульоном Хоттингера (по 10 мл среды в каждой пробирке).

При контроле стерильности чашек Петри небольшого диаметра (40 мм и менее) весь физиологический раствор из одной чашки засевают в одну пробирку (флакон) с 10 мл тиогликолевой среды. Во вторую пробирку (флакон) с сахарным бульоном Хоттингера делают посев из второй чашки. Из третьей чашки Петри делают посев физиологического раствора в пробирку (флакон) с бульоном Сабуро. Таким образом при контроле чашек Петри небольшого диаметра для посевов отбирают количество изделий, равное трем.

5.7.28. Посев на стерильность простого и хромированного кетгута в консервирующем растворе.

Нити кетгута извлекают стерильным пинцетом из ампулы или пакета и у пламени горелки (делать осторожно - консервант легко воспламеняется!) разрезают стерильными ножницами над пробиркой с питательной средой на отрезки длиной 1-2 см и засевают равными частями в 2 пробирки с 10 мл тиогликолевой среды, 2 пробирки с сахарным бульоном Хоттингера и 2 пробирки с бульоном Сабуро, как указано выше в п. 5.7.27.

6. Правила отбора проб для контроля стерильности в лечебно-профилактических учреждениях

6.1. Объектами бактериологического контроля в лечебно-профилактических учреждениях являются:

- хирургические инструменты;

- шприцы, иглы;

- системы переливания крови многоразового использования;

- зонды, катетеры, бужи, резиновые перчатки и другие изделия из резины и пластикатов;

- хирургический шовный материал, подготавливаемый к использованию в лечебно-профилактических учреждениях (кетгут, шелк, лавсан);

- различная аппаратура (аппараты экстракорпорального кровообращения и др.);

- перевязочные материалы;

- операционное белье.

6.2. В лечебно-профилактических учреждениях, имеющих централизованные стерилизационные отделения, контролю на стерильность подлежит не менее 1% от числа одновременно простерилизованных изделий одного вида.

6.3. В лечебно-профилактических учреждениях, не имеющих централизованных стерилизационных отделений и осуществляющих стерилизацию в хирургических отделениях, контролю стерильности подлежат не менее 3 предметов одного вида медицинского инструментария и не менее 3 предметов одного наименования изделий из текстиля.

6.4. Бактериологический контроль, осуществляемый санитарно-эпидемиологической станцией, проводят не реже 2 раз в год, лечебно-профилактическим учреждением - не реже 1 раза в месяц.

6.5 Забор проб на стерильность производит специально выделенный лаборант санитарно-эпидемиологической станции или операционная сестра под руководством сотрудника бактериологической лаборатории.

6.6. При централизации процессов стерилизации все изделия, подлежащие контролю, направляют в бактериологическую лабораторию в упаковке, в которой осуществляли их стерилизацию (пакеты, стерилизационные коробки-биксы, мягкая упаковка). Перед доставкой в лабораторию стерильные изделия в упаковке дополнительно завертывают в стерильную простыню или наволочки. После проведения контроля стерильности все изделия, за исключением перевязочных материалов подлежат обязательному возврату лечебно-профилактическому учреждению для последующего использования.

6.7. При стерилизации изделий в хирургическом отделении забор проб производят в чистой операционной в стерильные емкости с соблюдением строжайших правил асептики непосредственно перед проведением операции.

7. Методика и техника посева изделий, простерилизованных в лечебно-профилактических учреждениях

7.1. Для контроля стерильности используют среды, указанные в п. 5.2. Культивирование посевов осуществляют в соответствии с п. 5.3.

7.2. Контроль стерильности изделий проводят путем погружения в питательные среды. В исключительных случаях, когда необходимо проверить стерильность инструмента больших размеров, пробы забирают методом смыва стерильной салфеткой размером 5x5 кв. см, предварительно увлажненной стерильным физиологическим раствором или стерильной водопроводной водой.

7.3. Перед посевом исследуемый материал вносят в предбоксник, предварительно снимая наружную мягкую упаковку. В предбокснике пакеты, биксы протирают снаружи с помощью стерильного пинцета (корнцанга) стерильной салфеткой (ватным тампоном), обильно смоченной 6% раствором перекиси водорода, перекладывают на стерильный лоток и оставляют на 30 минут. При поступлении изделий в мягкой упаковке первый слой снимают в предбокснике и изделия во внутренней упаковке сразу переносят в бокс.

7.4. Посевы на стерильность проводит бактериолог с помощью лаборанта.

7.4.1. Посев на стерильность хирургических инструментов.

Хирургические инструменты с помощью стерильного пинцета извлекают из бикса или мягкой упаковки и целиком погружают в пробирки с питательными средами. В отдельных случаях, если все простерилизованные инструменты в одной упаковке крупных размеров (иглодержатели, ранорасширители и т.д.), производят смывы с поверхности 3 инструментов одного наименования стерильными салфетками, смоченными в стерильном физиологическом растворе или стерильной водопроводной воде, и погружают салфетку в пробирки с тиогликолевой средой, сахарным бульоном Хоттингера и бульоном Сабуро.

7.4.2. Методика посева на стерильность игл и шприцев.

Для контроля на стерильность отбирают шприцы малой емкости (1,0 или 2,0 мл) и в условиях бактериологического бокса с соблюдением правил асептики погружают в пробирки с питательными средами отдельно цилиндр, поршень, иглы.

При необходимости контроля шприцев большой емкости (10, 20 мл и более) исследование стерильности производят методом смыва, при этом стерильными салфетками, смоченными в стерильном физиологическом растворе или водопроводной воде, протирают с помощью пинцета внутренние и наружные части шприца и погружают их в 3 питательные среды (п. 5.2.).

7.4.3. Исследование на стерильность систем переливания крови многоразового использования.

От резинового шланга, ближе к игле, отрезают ножницами с помощью пинцета небольшие кусочки (1-2 см) и погружают в пробирки с питательными средами (п. 5.2.), иглу отдельно погружают в тиогликолевую среду.

7.4.4. Посев на стерильность катетеров, резиновых перчаток и других изделий из резины и пластикатов.

Контроль стерильности зондов, катетеров, резиновых перчаток и других изделий из резины производят путем полного погружения мелких изделий в питательные среды (п. 5.2.), от более крупных с помощью стерильного пинцета стерильными ножницами отрезают небольшие кусочки (1-2 см) и погружают в питательные среды.

7.4.5. Посев на стерильность хирургического шовного материала.

Перед посевом емкости с отобранными образцами шовного материала в предбокснике протирают стерильной марлевой салфеткой, обильно смоченной 6% раствором перекиси водорода, и оставляют на 30 минут, затем вносят в бокс.

Подготовленный к работе кетгут в операционном блоке хранят в спиртовом растворе йода. Перед посевом его подвергают специальной обработке для нейтрализации и отмывания нейтрализующего раствора. Моток кетгута, приготовленный для исследования, перекладывают стерильным корнцангом или пинцетом в стерильный 10% раствор гипосульфита натрия. Раствор гипосульфита натрия готовят на дистиллированной воде, разливают в пробирки (колбы) по 20-30 мл, стерилизуют при 120°C 30 минут. Кетгут выдерживают в растворе гипосульфита в течение 24 часов при комнатной температуре (возможно помутнение раствора за счет выпадения серы), затем перекладывают в пробирки с 20-30 мл стерильной дистиллированной воды, где также выдерживают в течение 24 часов при комнатной температуре. Непосредственно перед посевом моток кетгута извлекают стерильным пинцетом и перекладывают в стерильную чашку Петри, с помощью пинцета и ножниц его разрезают на мелкие кусочки длиной 1-2 см и раздергивают для прорастания микроорганизмов изнутри кетгута.

Посев производят в 2 пробирки с тиогликолевой средой, 2 пробирки с бульоном Сабуро и 2 пробирки с сахарным бульоном Хоттингера, помещая в каждую пробирку по 4-5 кусочков исследуемого материала.

Приготовленный к работе шелк (лавсан) в операционных хранят в спиртовом растворе, поэтому перед посевом его помещают на 24 часа в стерильную дистиллированную воду при комнатной температуре. Перед посевом моток шелка (лавсана) перекладывают в стерильные чашки Петри, разрезают на мелкие кусочки длиной 1-2 см. Посев производят так же, как и кетгута.

7.4.6. Исследование на стерильность аппаратов экстракорпорального кровообращения.

Исследование на стерильность аппаратов искусственного кровообращения проводят бактериолог и лаборант лечебно-профилактического учреждения в операционной после асептической сборки аппарата.

Контролю подлежат: смыв из аппарата, перфузат до перфузии, кровь после перфузии.

Стерильный физиологический раствор в количестве не менее 250 мл прогоняют через аппарат, подготовленный к операции, отбирают 100 мл раствора и засевают на питательные среды по 20 мл в 100 мл питательной среды (п. 5.2.). Аналогично производят посев перфузата до перфузии и крови после перфузии.

7.4.7. Посев на стерильность перевязочного материала.

Бинты, ватные шарики, марлевые салфетки, турунды и т.п. отбирают из разных мест биксы стерильным пинцетом.

Мелкие изделия целиком погружают в пробирки с питательными средами. От бинтов (внутренних частей) и крупных марлевых салфеток с помощью стерильных ножниц отрезают кусочки и погружают в пробирки с питательными средами (п. 5.2.). На каждый вид перевязочного материала используют по 2 пробирки каждой среды.

7.4.8. Посев на стерильность хирургического белья.

Простерилизованными и фламбированными ножницами (смоченными в спирте и проведенными через пламя горелки) с помощью пинцета от хирургического белья отрезают небольшие кусочки ткани (завязка, внутренние швы и т.п.) и погружают в пробирки с питательными средами (п. 5.2.), по возможности, не касаясь стенок пробирки (колбы).

8. Учет результатов

8.1. Заключение о стерильности исследуемых образцов, простерилизованных радиационным и газовым методами, делают после 14 суток инкубирования посевов в термостате, стерилизованных паровым и воздушным методами, после 8 суток.

8.2. При отсутствии роста микроорганизмов во всех средах выдают заключение о стерильности изделия, загрузки, серии, партии.

8.3. При прорастании питательной среды хотя бы в одной пробирке проводят повторный контроль стерильности удвоенного количества образцов данной загрузки, серии, партии. Если при повторном посеве новых образцов прорастание не наблюдается, то исследуемую загрузку, серию, партию считают стерильной.

В случае прорастания посевов (помутнение питательной среды, образование пленки, осадка) готовят мазки для бактериоскопического подтверждения роста микробов.

При контроле на стерильность изделий, стерилизованных газовым и паровым методами рост в единичных пробирках вегетативной микрофлоры не учитывают, его относят за счет внесения этой микрофлоры в процессе посева, материал подлежит повторному исследованию.

8.4. После исследования загрузки, серии, партии в журнале отмечают результаты бактериологического контроля: "стерильно" или "не стерильно".

9. Способ приготовления питательных сред, используемых для контроля эффективности стерилизации

9.1. Тиогликолевая среда.

9.1.1. Состав:

гидролизат казеина (в пересчете на сухой остаток)	15 г
дрожжевой экстракт (10% в пересчете на сухой остаток)	5 г
натрий хлористый	2,5 г
глюкоза	5 г
цистин	0,75 г
тиогликолевая кислота	0,3 мл
раствор резазурина 1:1000 (свежеприготовленный)	1 мл
агар-агар дальневосточный	0,75 г
вода дистиллированная до	1000 мл
рН среды после стерилизации	7,0-7,2.

9.1.2. Приготовление.

Смешивают все компоненты среды, кроме глюкозы и тиогликолевой кислоты.

Цистин предварительно растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды при постепенном добавлении 10-20% раствора едкого натра до его полного растворения. Смесь подщелачивают 10% раствором едкого натра до рН 8,0-8,2, кипятят в котле с паровой рубашкой или на открытом огне при постоянном перемешивании до расплавления агар-агара 5-10 минут или автоклавируют 20 минут при 100°. Прибавляют горячую воду до первоначального объема, вносят глюкозу и тиогликолевую кислоту, фильтруют через полотно "Бельтинг", устанавливают рН 7,2-7,3. Добавляют раствор резазурина, смешивают и разливают в стерильные пробирки по 20 мл. Стерилизуют 20 минут при 120°.

Тиогликолевую среду можно хранить до посева, предохраняя ее от света, при комнатной температуре в течение не более 7 суток со дня приготовления.

Примечание:

допускается приготовление среды без раствора резазурина;

допускается применение других сортов агар-агара, но с заранее оттитрованным количеством.

9.2. Сахарный бульон Хоттингера (с 0,5 и 1,0% глюкозы).

9.2.1. Состав:

мясной перевар по Хоттингеру до разведения
аминного азота на	140-160 мг%
натрий хлористый	0,5%
глюкоза	0,5% (1,0%)
вода дистиллированная	до 1000 мл
рН среды 7,2-7,4

9.2.2. Приготовление.

Смешивают мясной перевар по Хоттингеру с водой в таком соотношении, чтобы в среде содержалось 140-160 мг% аминного азота, добавляют натрий хлористый. Смесь подщелачивают 10% раствором едкого натра до рН 8,0-8,2, кипятят на открытом огне 10 минут или автоклавируют при 100° 10 минут. Если есть выкипание, доводят объем до первоначального кипяченой или дистиллированной водой. Фильтруют через ватный тампон, прибавляют 0,5% (1,0%) глюкозы, устанавливают рН 7,3-7,4 добавлением 5% раствора соляной кислоты. Снова фильтруют через бумажный фильтр или полотно "Бельтинг". Разливают в стерильную посуду. Стерилизуют при 110°С 30 минут.

9.3. Бульон Сабуро.

9.3.1. Состав:

сухой пептон ферментативный	10 г
глюкоза или мальтоза	100 г
вода дистиллированная	до 1000 мл
рН среды после стерилизации	5,5-5,8

9.3.2. Приготовление.

В воду добавляют пептон и кипятят 10 минут. Фильтруют через полотно "Бельтинг". К полученному объему после фильтрации прибавляют глюкозу и мальтозу. Если рН выше, чем 5,7, то следует подкислить 5% раствором соляной кислоты до рН 5,7. Разливают в стерильные пробирки по 10 мл. Стерилизуют при 110°С 30 минут.

9.4. Контроль стерильности питательных сред.

Для контроля стерильности питательные среды после изготовления и стерилизации помещают в термостат при температуре 32°C на 72 часа.

Сахарный бульон Хоттингера и бульон Сабуро контролируют полностью (всю приготовленную серию пробирок, колб, флаконов).

Тиогликолевую среду выдерживать при повышенной температуре до использования не допускается, поэтому от каждой серии отбирают 1% от общего числа пробирок, колб, флаконов и выдерживают их в термостате при температуре 32°C в течение 72 часов. Для контроля стерильности эту часть среды не используют.

9.5. Подготовка посуды.

Новую посуду до мытья кипятят в слабом растворе (1-2%) соляной кислоты во избежание дальнейшего выщелачивания стекла.

Мытье производят ершами с мылом и содой, затем тщательно промывают проточной и ополаскивают дистиллированной водой, что предупреждает выпадение солевых остатков при высушивании.

Подготовленную и высушенную посуду завертывают в бумагу и стерилизуют.

10. Требования по противопожарной технике безопасности и правила пользования огнетушителем ОУ-2

10.1. При работе по контролю стерильности в боксированном помещении необходимо соблюдать правила техники противопожарной безопасности.

10.2. К работе допускают сотрудников, сдавших техминимум по правилам, разработанным администрацией. В правилах должны быть предусмотрены следующие требования: исследования проводить одновременно не менее чем двум специалистам; при возникновении пожара пользоваться средствами тушения.

10.3. Для тушения пожара в боксированном помещении должны быть в наличии противопожарные средства, углекислотные огнетушители типа ОУ-2 из расчета один огнетушитель на предбоксник и бокс.

10.4. При пользовании огнетушителем его подносят как можно ближе к очагу пожара. Левой рукой направляют раструб таким образом, чтобы струя газа попала в очаг пожара, а затем, вращая до отказа маховичок, открывают вентиль.

10.5. Огнетушители размещают так, чтобы они не подвергались воздействию прямых солнечных лучей и тепла нагревательных приборов.

10.6. Углекислотные огнетушители следует не реже одного раза в месяц проверять взвешиванием. В случае обнаружения утечки углекислоты их необходимо дозарядить. Герметичность углекислотного огнетушителя можно проверить нанесением на места соединения деталей мыльной пены или погружением на 2-3 минуты в чистую воду.