Приложение. Рецепты приготовления забуференного физиологического раствора и агара Минка

Приложение

Рецепты
приготовления забуференного физиологического раствора и агара Минка

1. Забуференный физиологический раствор

1.1. Для получения забуференного физраствора с рН 7,0-7,2 дистиллированную воду подвергают кипячению в течение 10-15 мин, после чего ее используют для приготовления обычного физраствора, содержащего 0,85% хлорида натрия.

1.2. К 1 куб. дм физраствора добавляют 10 куб. см смеси 1/15 М растворов двузамещенного фосфорнокислого натрия (Na2HPО4 x 12H2О) и однозамещенного фосфорнокислого калия (KН3РО4) в соотношении 7:3 или 8:2 (в зависимости от исходной величины рН воды), компоненты в колбе тщательно размешивают.

1.3. 1/15 М растворы солей готовят следующим образом: в две колбы наливают по 1 куб. дм дистиллированной воды, затем в первую колбу добавляют 23,0 г Na2HPО4 x 12H2О, а во вторую колбу 9,0 г KН2РО4, отверстия колб закрывают резиновыми или корковыми пробками и встряхивают их для размешивания компонентов. Хранят растворы в темном месте при комнатной температуре в течение 6 мес. 

2. Агар Минка для формирования адгезивных антигенов эшерихий К99, F41, F18

2.1. Для приготовления среды вначале готовят следующие исходные растворы:

а) фосфатно-буферный раствор с рН 7,4-7,5. Для его приготовления предварительно получают 1/15 М растворы двузамещенного фосфорнокислого натрия (Na2HPО4 x 12Н2O) и однозамещенного фосфорнокислого калия (KН3РО4). С этой целью добавляют к 1 куб. дм дистиллированной воды 23 г Na2HPО4 (в первую колбу) и 9 г КН2РО4 (во вторую колбу), компоненты растворяют путем встряхивания колб. Колбы с полученными 1/15 М растворами солей закрывают резиновыми или корковыми пробками и хранят в темном месте при комнатной температуре в течение 6 месяцев. Для получения фосфатно-буферного раствора с рН 7,4-7,5 к 1 куб. дм дистиллированной воды добавляют 10 куб. см смеси 1/15 М растворов Na2HPО4 и KН2РО4 в соотношении 9:1, компоненты в колбе тщательно перемешивают.

б) Раствор микроэлементов:

марганец хлористый (МnСl2 х 4Н2О)   - 0,1г,

магний сернокислый (MgSО4 x 7H2О)   - 1 г,

кальций хлористый (CaCl2 х 6Н2О)    - 0,04 г,

железо хлорное (РеС13# х 6Н2О)       - 0,02 г,

вода дистиллированная               - 100 куб. см

Компоненты тщательно перемешивают в воде, отверстие колбы закрывают резиновой или корковой пробкой, хранят раствор микроэлементов при комнатной температуре в течение 1 месяца.

в) 4%-ный раствор агар-агара. Для его приготовления в колбу с 1 куб. дм дистиллированной воды добавляют 40 г предварительно отмытого агар-агара, колбу нагревают до полного расплавления агара, затем фильтруют через ватный фильтр и стерилизуют при 1 атм (121°С) в течение 30 минут. Перед употреблением застывший агар расплавляют в водяной бане.

2.2. Среду Минка готовят по следующему рецепту:

фосфатно-буферный раствор (рН 7,4-7,5)      - 950 куб. см,

раствор микроэлементов                      - 2 куб. см,

40%-ный раствор глюкоз                      - 25 куб. см,

10%-ный раствор дрожжевого экстракта*       - 10 куб. см,

10%-ный раствор гидролизата казеина*        - 20 куб. см

Компоненты в колбе размешивают, затем нагревают смесь до температуры 45-50°С, после чего к ней добавляют 1 дм расплавленного 4%-ного раствора агар-агара.

Готовую среду (2%-ный агар Минка) разливают в колбы по 100-200 куб. см и стерилизуют при 0,5 атм (110°С) в течение 15 мин, хранят среду не более 1,5 мec.

Перед употреблением ее расплавляют в водяной бане и разливают в стерильные чашки Петри.

______________________________

* - для приготовления среды используют экстракт дрожжевой, сухой, очищенный - ТУ 6-09-4510-77 и сухой гидролизат казеина - ТУ 6-09-4764-79.