Приложение А (обязательное). Графический метод экстраполяции для определения изменения оптической плотности

Приложение А
(обязательное)

Графический метод
экстраполяции для определения изменения оптической плотности

При замене наборов реактивов, используемых для ферментативной реакции, а также при значительных изменениях во времени (через 20 и через 10 мин после добавления фермента ГБДГ) используют графический метод определения величины , экстраполированной к началу ферментативной реакции: через 5-6 мин после внесения реактива 4 (см. 8.6), а затем через каждые 2 мин измеряют оптические плотности раствора с пробой А и контрольного раствора В и строят график зависимости от времени t разности оптических плотностей

,

(А.1)

где А_t и B_t - оптические плотности раствора с пробой и контрольного раствора в момент времени t после добавления реактива 4 (фермента ГБДГ) (см. 7.4.4 или 7.5.5);

А₁ и В₁ - соответствующие оптические плотности растворов непосредственно до добавления реактива 4.

Измерения продолжают до достижения линейной зависимости от времени в течение не менее 4 мин. Значение определяют по графику экстраполяцией линейного участка к началу реакции согласно рисунку А.1 и используют для расчета содержания D-бета-оксимасляной кислоты по формуле (6).

1 - график зависимости в случае наложения на ферментативную реакцию медленно текущей побочной реакции; 2 - график зависимости при отсутствии побочных реакций

Рисунок А.1 - Графическое определение разности оптической плотности, экстраполированной к началу ферментативной реакции