Приложение 1. Рецепты питательных сред

Приложение 1

Рецепты питательных сред

Кровяной агар цитратный. (Рецепт 1)

Для приготовления кровяного агара у здоровой коровы из яремной вены берут 250 мл крови в стерильную колбу, в которую предварительно вносят 50 мл стерильно приготовленного 5% раствора лимоннокислого натрия. По мере взятия кровь в колбе смешивают с лимоннокислым натрием путем встряхивания. Полученную цитратную кровь проверяют на стерильность путем посева на МПБ и только после этого используют для приготовления кровяного агара. Цитратная кровь при необходимости может сохраняться в условиях холодильника в течение 10-14 дней. Мясопептонный агар расплавляют в колбе, затем охлаждают до 45°С и стерильной пипеткой вносят в него 10-15% цитратной крови, равномерно смешивая, после чего разливают в чашки Петри по 15 мл. Застывший агар помещают в термостат при температуре 37°С на 24 часа для проверки на стерильность.

Для приготовления кровяного агара может быть использована также дефибринированная кровь барана.

ДНК-новокаиновый агар (Рецепт 2)

К 150 мл расплавленного стерильного 2%-ного МПА (рН 8,6) добавляют 150 мг ДНК, предварительно растворенной в 10 мл (подщелоченной 2 каплями 10%-ного раствора едкого натра) дистиллированной воды, и 3 г (2%) новокаина.

После перемешивания среду прогревают в течение 30 минут в кипящей водяной бане.

К остывшей до 45-50°C среде добавляют 7-8 мл (5%) сыворотки крови крупного рогатого скота и 1,2 мл 10%-ного раствора хлористого кальция, перемешивают и разливают в чашки Петри.

Примечание: ДНК-натриевая соль выпускается научно-производственным объединением "Биохимреактив" Латвийской ССР г. Олайне.

Дифференциально-диагностическая среда (Рецепт 3)

На 1 л дистиллированной воды берут: МПА - 15 г, пептон - 10 г, NaCI - 75 г, маннит - 10 г, фенол-рот - 0,025 г, рН - 7,4.

Агар с ДНК для определения ДНК-азной активности стафилококков. (Рецепт 4)

К 150 мл расплавленного 2%-ного МПА (рН 8,6) добавляют 150 мг - ДНК, растворенной в 10 мл дистиллированной воды, с 2 каплями 10%-ного едкого натрия, среду прогревают 30 мин в кипящей водяной бане, затем охлаждают до 50-60°С и добавляют 1,2 мл 10%-ного стерильного хлористого кальция и 13-14 мл (8-9%) сыворотки КРС или 8 мл (5%) дрожжевого экстракта.

Среда Гисса для определения ферментативных свойств стафилококков. (Рецепт 5)

К полужидкой пептонной среде (1% пептона, 0,5% хлорида натрия, 0,15% агар-агара) рН 7,4, после ее расплавления, добавляют 0,5% маннита и 1% индикатора Андреде, перемешивают, разливают в пробирки по 10 мл. Стерилизуют при 0,5 атм 30 минут, после чего наслаивают стерильное вазелиновое масло высотой 1 см.

Среда для стафилококкового фага (Рецепт 6)

Для приготовления 1 л среды требуются: агар-агара - 12 г, гидролизата Хоттингера - 200 мл, свежей мясной воды - 400 мл, водопроводной воды - 400 мл, глюкозы - 4 г, хлористого кальция - 0,2 г (последний добавляют непосредственно к готовой расплавленной среде перед разливом ее в чашки Петри - 2 мл 10% стерильного раствора).

Среда Карташовой для выделения стрептококков. (Рецепт 7)

К 500 мл готового стерильного мясо-пептонного бульона добавляют 2,5 г лактозы, 1 мл спиртово-водного раствора 1:100 бромкрезолпурпура (после растворения 1 г порошка в 50 мл спирта добавляют 50 мл дистиллированной воды). Колбу со средой ставят в холодную водяную баню доводят до кипения и кипятят 5-7 минут. Охлаждают среду до 50-55°С и добавляют 50 мл сыворотки и 50 Ед/мл неомицина. Среду разливают в стерильные пробирки по 50 мл.

Сывороточно-глюкозовый агар. (Рецепт 8)

МПА - 95 мл

Стериальная сыворотка лошади - 5 мл без консерванта

Глюкоза - 1 г

рН - 7,4.

Глюкозу вносят в МПА перед стерилизацией. Среду стерилизуют при 0,5 атм в течение 30 минут. Перед внесением сыворотки агар расплавляют и охлаждают до 45°C, вносят асептически сыворотку, перемешивают и разливают в чашки или пробирки.

Глюкозный бульон. (Рецепт 9)

В 100 мл МПБ добавляют 1 г глюкозы среду стерилизуют при 0,5 атм в течение 30 минут. РН среды должен быть 7,2-7,4.

Мясо-пептонный бульон с желчью. (Рецепт 10)

К 90 мл стерильного МПБ, рН 7,4, добавляют асептически 10 мл стерильной бычьей желчи, перемешивают, разливают в пробирки и стерилизуют при 0,5 атм 20 минут.

Молоко с метиленовым голубым. (Рецепт 11)

0,2 г метиленового голубого растворяют в 20 мл горячей дистиллированной воды, раствор пропускают через бумажный фильтр и стерилизуют при 0,5 атм 20 минут. К стерильному обезжиренному молоку добавляют 1% приготовленного раствора.

Среда КОДА (Рецепт 12)

Среда выпускается в виде порошка Дагестанским НИИ питательных сред и готовится в соответствии с инструкцией.

Среда Олькиницкого. (Рецепт 13)

К 100 мл стерильного питательного агара добавляют 1 г лактозы, 0,02 г соли Мора, 0,03 г гипосульфита, 1 г сахарозы, 0,1 г глюкозы, 1 г мочевины и 0,4 мл 0,4%-ного раствора фенолового красного. Предварительно растворяют соль Мора с гипосульфитом в одной пробирке с небольшим количеством воды, а в другой - мочевину с углеводами. После растворения все смешивают с агаром и профильтровывают через стерильную марлю. Стерилизуют текучим паром 3 дня подряд по 20 минут. Горячую среду скашивают, оставляя столбик высотой 2 см. Среда прозрачная, имеет красный цвет с коричневым оттенком.

Элективная дифференциально-диагностическая среда для выделения и идентификации грибов рода Candida (ЭДДС). (Рецепт 14)

Элективная дифференциально-диагностическая среда для выделения и идентификации грибов рода Candida обусловлена введением карамели (солод поджаренный при 150-170°C в течение 2,5 час.), что дает обогащение минерального состава среды.

В качестве субстрата употребляется фильтрат сусла, имеющего углеводов 15-17° по Баллингу, и расплавленный в дистиллированной воде агар-агар.

18-20 г агар-агара растворяют при кипячении в 500 мл дистиллированной воды, затем добавляют до 1 л фильтрат сусла, имеющего карамели 6-8%. После установления рН 6,6-6,8 среду разливают в колбы и автоклавируют в автоклаве при 1 атм - 15 минут. Для проверки на стерильность среду ставят в термостат на 24 часа при 37°С. По истечении этого срока ее нагревают до 100°С и остывшую до 47-50°С разливают в чашки Петри или в пробирки. Чашки со средой можно хранить в холодильнике в течение 15-30 дней, защитив от высыхания путем помещения чашек в целлофановые мешки.

Агар Хоттингера. (Рецепт 15)

Среда из триптического перевара мяса (перевара Хоттингера) с содержанием 120-140 мг % аминного азота и 1-2% агара, рН среды 7,2-7,4.