Дата введения: с 1 июля 2004 г.
2. Методика определения флутриафола в зерне гороха, семенах и масле подсолнечника методом газожидкостной хроматографии
2.1. Основные положения
2.1.1. Принцип метода
Метод определения флутриафола в растительных объектах основан на экстракции пестицида органическими растворителями и очистке перераспределением между двумя несмешивающимися жидкими фазами, а также при необходимости, на колонке с силикагелем. Количественное определение проводят методом газожидкостной хроматографии с использованием термоионного детектора (ТИД).
2.1.2. Избирательность метода
Избирательность метода обеспечивается очисткой экстратов анализируемых проб и сочетанием условий хроматографирования. Присутствие других пестицидов, близких по химическому строению и области применения, определению не мешает.
2.1.3. Метрологическая характеристика метода
Метрологическая характеристика метода представлена в таблицах 1 и 2.
Таблица 1
Метрологическая характеристика метода
Объект анализа |
Предел обнаружения, мг/кг |
Диапазон измеряемых концентраций, мг/кг |
Среднее значение определения, % (для каждого объекта n = 24) |
Относительное стандартное отклонение S, % |
Доверительный интервал среднего, n = 24, Р = 0.95 |
горох, зерно |
0.05 |
0.05-0.5 |
83.1 |
5.20 |
4.95 |
подсолнечник, семена |
0.05 |
0.05-0.5 |
80.4 |
5.45 |
4.15 |
подсолнечник, масло |
0.05 |
0.05-0.5 |
79.0 |
5.65 |
4.15 |
Таблица 2
Полнота определения флутриафола в зерне гороха, семенах и масле подсолнечника
Среда |
Внесено, мг/кг |
Найдено, мг/кг |
Стандартное отклонение, |
Полнота определения, % |
горох, зерно |
0.05 |
0.0402 |
0.0031 |
80.4 |
0.1 |
0.0816 |
0.0064 |
81.6 |
|
0.2 |
0.1640 |
0.0100 |
82.0 |
|
0.5 |
0.4275 |
0.0220 |
88.5 |
|
Среднее |
|
|
|
83.1 |
подсолнечник, семена |
0.05 |
0.0380 |
0.0021 |
76.0 |
0.1 |
0.0792 |
0.0072 |
79.2 |
|
0.2 |
0.1648 |
0.0120 |
82.4 |
|
0.5 |
0.3200 |
0.0200 |
83.8 |
|
Среднее |
|
|
|
80.4 |
подсолнечник, масло |
0.05 |
0.0376 |
0.0024 |
75.1 |
0.1 |
0.0792 |
0.0072 |
79.2 |
|
0.2 |
0.1592 |
0.0110 |
79.6 |
|
0.5 |
0.441 |
0.0210 |
82.2 |
|
Среднее |
|
|
|
79.0 |
2.2. Реактивы, материалы
Флутриафол, аналитический стандарт (фирма "Кеминова А/С")
Ацетон, о.с.ч.9-5, ТУ 2633-039-4493179-00 или ч.д.а., ГОСТ 2603-79
Вода дистиллированная, ГОСТ 7602-76
н-Гексан, х.ч., ТУ 6-09-3375-78
Натрий сернокислый безводный, ч.д.а., ГОСТ 4166-76
Натрия хлорид, х.ч., ГОСТ 4233-77.
Стекловата.
Силикагель L 100/400 для хроматографии (0.040-0.063 мм) (Хемапол, Венгрия)
Серная кислота ОСЧ 11-5 ГОСТ 14262-78.
Хлористый метилен, ч.д.а., ТУ-2631-020-11291058-96.
2.3. Приборы и посуда
Газовый хроматограф Цвет-550 М или аналогичный с ТИД и стеклянной насадочной колонкой, длиной 1 м, внутренним диаметром 3 мм.
Весы аналитические ВЛА-200, ГОСТ 34104-80Е или аналогичные.
Весы технические ВЛКТ-500, ГОСТ 24104-80.
Мельница лабораторная зерновая ЛМЗ, ТУ 1-01-0593-79.
Установка ультразвуковая "Серьга", ТУ 3.836.008.
Ротационный испаритель вакуумный ИР-1М, ТУ 25-11-917-74 или аналогичный.
Микрошприц МШ-10, МШ-10М, ТУ 2-833-106.
Насос водоструйный, МРТУ 42 861-64.
Колбы плоскодонные на шлифах КШ500 29/32 ТС, ГОСТ 10384-72.
Колбы круглодонные на шлифах КШ50 29-32 ТС, ГОСТ 10384-72.
Воронки лабораторные В-75-110, ГОСТ 25 336-82.
Воронки делительные на 500, 1000 мл ВД-3-500, ГОСТ 8613-75.
Цилиндры мерные на 100 , 500
ГОСТ 1774-74.
Колбы мерные на 100 , ГОСТ 1770-74.
Пипетки на 1, 2, 5, 10 , ГОСТ 22292-74.
Стаканы химические, ГОСТ 25336-82Е.
Колонка стеклянная хроматографическая длиной 30 см, диаметром 10 мм.
2.4. Отбор проб
Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79). Для длительного хранения зерно и семена подсушивают при комнатной температуре в отсутствие света. Сухие образцы могут храниться в течение года. Перед анализом пробы зерна и семян измельчают. Масло хранят в холодильнике.
2.5. Подготовка к определению
2.5.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей.
Органические растворители перед началом работы очищают, сушат и перегоняют в соответствии с общепринятыми методиками. Гексан и дихлорметан встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до прекращения окрашивания свежей порции, затем промывают водой, после чего сушат над щелочью и перегоняют.
2.5.2. Кондиционирование колонки.
Перед началом анализа колонку, заполненную хроматоном N-Super (0.125-0.160 мм) с 5% SE-10, не присоединяя к детектору, кондиционируют в токе инертного газа (азот) при температуре 250°С в течение 8-10 часов.
2.5.3. Приготовление стандартного и градуировочных растворов:
Основной раствор флутриафола готовят, количественно перенося 10 мг аналитического стандарта флутриафола в мерную колбу на 100 мл, растворяют навеску в ацетоне. Из полученного раствора флутриафола с концентрацией 100 мкг/мл готовят рабочие растворы с Концентрациями 1 мкг/мл, 2 мкг/мл, 4 мкг/мл, 10 мкг/мл последовательным разведением в ацетоне.
Для внесения в образец при определении полноты извлечения используют соответствующий стандартный раствор флутриафола в ацетоне.
2.5.4. Построение градуировочного графика.
Для построения градуировочного графика зависимости высоты (площади) пика от концентрации флутриафола в растворе в хроматограф вводят по 1 мкл градуировочных растворов (не менее 3-х параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4-х точек по диапазону измеряемых концентраций), измеряют высоты (площади) пиков и строят график зависимости среднего значения высоты, мм (площади, мв/сек) пика от концентрации флутриафола в градуировочном растворе (мкг/мл).
2.5.5. Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта.
Силикагель прогревают в термостате при 120°С в течение 3-х часов и охлаждают до комнатной температуры. На дно стеклянной колонки помещают стекловату, слой 0.5 см безводного сульфата натрия и заполняют через воронку суспензией 5 г силикагеля в 25 мл гексана при открытом кране колонки, сверху наносят слой 1 см безводного сульфата натрия. Затем колонку промывают 10 мл смеси гексан:ацетон в соотношении 3:2 и закрывают кран, когда уровень растворителя достигнет верхнего края сорбента. Колонка готова к работе.
2.5.6. Проверка хроматографического поведения флутриафола на колонке с силикагелем.
В подготовленную колонку пипеткой вносят 1 мл стандартного раствора флутриафола и дают впитаться. После этого в колонку вносят 10 мл смеси гексан:ацетон (1:3), элюат отбрасывают. Флутриафол элюируют 40 мл смеси гексан:ацетон (1:5), отбирая фракции по 5 мл, упаривают досуха, остаток растворяют в 1 мл ацетона и хроматографируют Фракции, содержащие флутриафол, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 1 мл ацетона и хроматографируют. Рассчитывают содержание флутриафола в элюате, определяя его полноту извлечения из колонки и необходимый для этого объем элюента.
Примечание: профиль вымывания флутриафола может изменяться при использовании силикагеля новой партии или другой марки.
2.5.7. Подготовка приборов и средств измерения.
Установка и подготовка всех приборов и средств измерения проводится в соответствии с требованиями стандартов и технической документации.
2.6. Проведение определения
2.6.1. Экстракция и очистка экстрактов
2.6.1.1. Зерно гороха. Навеску размолотого в лабораторной мельнице гороха (20 г) помещают в коническую колбу объемом 250 мл и экстрагируют флутриафол 50 мл ацетона на ультразвуковой установке в течение 15 мин. Надосадочную жидкость фильтруют через складчатый фильтр "красная лента" в делительную воронку объемом 500 мл. Экстракцию повторяют дважды порциями по 50 мл ацетона. После третьей экстракции осадок переносят на фильтр, колбу ополаскивают 20 мл ацетона и 50 мл дистиллированной воды и фильтруют смывы через фильтр с осадком. К объединенному экстракту добавляют 50 мл дистиллированной воды и промывают 10 мл гексана, встряхивая делительную воронку в течение 2-х минут. После полного разделения слоев верхний гексановый слой отбрасывают и промывку повторяют дважды порциями по 10 мл гексана. Промытый гексаном водно-ацетоновый экстракт концентрируют на роторном испарителе до объема 130-150 мл и переносят в делительную воронку, ополаскивая концентратор. Переэкстрагируют флутриафол в хлористый метилен трижды порциями по 50 мл, встряхивая воронку в течение 2-х минут. Нижний органический слой фильтруют через слой безводного сульфата натрия, промывают осушитель 10 мл хлористого метилена. Объединенный дихлорметановый экстракт упаривают досуха и растворяют в 1-2 мл ацетона. При необходимости проводят очистку на колонке с силикагелем, по п. 2.6.2.
2.6.1.2. Семена подсолнечника. Навеску очищенных от лузги и размолотых на лабораторной мельнице семян (20 г) помещают в коническую колбу объемом 500 мл и экстрагируют флутриафол 150 мл охлажденной смеси гексан:ацетон в соотношении 2:1 на ультразвуковой установке в течение 15 мин (ванна установки заполнена водой со льдом). Экстракт фильтруют через складчатый фильтр "белая лента" в делительную воронку объемом 1000 мл. Экстракцию повторяют дважды порциями экстрагента по 150 мл, после чего остаток переносят на фильтр, колбу и осадок промывают 20-30 мл экстрагирующей смеси. К объединенному экстракту в делительную воронку добавляют 100 мл дистиллированной воды и встряхивают в течение 2-х минут. После полного разделения фаз нижний водно-ацетоновый объем собирают, при этом эмульсию пограничного слоя разбивают непосредственно перед тем, как предстоит отбор эмульсионного слоя, внесением в него очень малого количества хлористого натрия. Оставшийся в делительной воронке гексановый слой промывают дважды 50 мл водного ацетона (50:50), который собирают. Объединенный водно-ацетоновый экстракт упаривают на роторном испарителе до объема 150-180 мл и переносят в делительную воронку. Флутриафол переэкстрагируют в хлористый метилен трижды порциями по 50 мл, встряхивая делительную воронку в течение 2-х минут. Нижний органический слой собирают, фильтруя через слой безводного сульфата натрия, и выпаривают досуха на роторном испарителе. Сухой остаток растворяют в 1-2 мл ацетона и дальнейшую очистку проводят на колонке с силикагелем (п. 2.6.2).
2.6.1.3. Масло подсолнечника. 20 г масла помещают в делительную воронку объемом 500 мл, добавляют 100 мл охлажденной смеси гексан:ацетон в соотношении 2:1 и осторожно круговыми движениями перемешивают в течение 2-3 минут. Затем добавляют 50 мл дистиллированной воды и встряхивают воронку в течение двух минут, происходит разделение слоев и перераспределение флутриафола в водно-ацетоновый слой, который собирают. К гексановому слою в делительной воронке добавляют 50 мл водного ацетона (50:50), интенсивно встряхивают и после полного разделения фаз собирают водно-ацетоновый слой. Промывку гексанового слоя повторяют. Собранный объединенный экстракт переносят в чистую делительную воронку и переэкстрагируют флутриафол хлористым метиленом трижды порциями по 50 мл. Органический слой фильтруют через безводный сульфат натрия и выпаривают досуха на роторном испарителе. Сухой остаток растворяют в 1-2 мл ацетона и дальнейшую очистку проводят на колонке с силикагелем (п. 2.6.2).
2.6.2. Очистка экстрактов на колонке с силикагелем
Растворенный в 1-2 мл ацетона сухой остаток пипеткой количественно переносят в хроматографическую колонку, колбочку ополаскивают еще 1-2 мл ацетона и вносят в колонку, после чего открывают кран и дают раствору впитаться в сорбент. Затем в колонку вносят 10 мл смеси гексан:ацетон в соотношении 2:3, элюат отбрасывают. Флутриафол элюируют 15 мл смеси гексан:ацетон в соотношении 1:5, элюат собирают и упаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона и хроматографируют.
2.6.3. Условия хроматографирования
Газовый хроматограф "Цвет-550М" с ТИД или аналогичный. Колонка стеклянная 1 м х 3 мм, заполненная хроматоном N-Super (0.125-0.160 мм) с 5% SЕ-30.
Температура колонки 230°С, испарителя 240°С, детектора 380°C.
Скорость газа-носителя (азот) через колонку 30
Расход водорода 16
Расход воздуха 200
Шкала электрометра .
Объем вводимой пробы 1 мкл. Время удерживания флутриафола 2,28 мин
Нумерация пунктов приводится в соответствии с источником
2.6.6. Обработка результатов анализа
Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки, содержание флутриафола в пробе (X, мг/кг) вычисляют по формуле:
,
где - высота (площадь) пика флутриафола в стандартном растворе, мм;
- высота (площадь) пика флутриафола в анализируемой пробе, мм;
V - объём экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл;
Р - навеска анализируемого образца, г;
С - концентрация флутриафола в стандартном растворе, мкг/мл.
Содержание остаточных количеств флутриафола в анализируемом образце вычисляют как среднее из 2-х параллельных определений.
Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор флутриафола 100 мкг/мл, разбавляют.
3. Требования техники безопасности
При проведении работы необходимо соблюдать требования инструкции "Основные правила безопасной работы в химической лаборатории", общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, а также инструкции по эксплуатации газового хроматографа и электрооборудования до 400 В.
4. Контроль погрешности измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости результатов измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа.
5. Разработчики
Долженко В.И., Цибульская И.А., Карпова Л.М.
Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений, Санкт-Петербург.
Главный Государственный санитарный врач РФ, |
Г.Г. Онищенко |
Если вы являетесь пользователем интернет-версии системы ГАРАНТ, вы можете открыть этот документ прямо сейчас или запросить по Горячей линии в системе.
Методические указания по определению остаточных количеств флутриафола в зерне гороха, семенах и масле подсолнечника методом газожидкостной хроматографии МУК 4.1.1854-04 (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 5 марта 2004 г.)
Текст методических указаний официально опубликован не был
Дата введения: с 1 июля 2004 г.