Приложение 5. Наставление по применению наборов сывороток сальмонеллезных О-комплексных и монорецепторных О- и H-агглютинирующих для экспресс-идентификации сальмонелл по реакции агглютинации (PA) на стекле

ПРИЛОЖЕНИЕ 5

Наставление по применению наборов сывороток сальмонеллезных О-комплексных и монорецепторных О- и H-агглютинирующих для экспресс-идентификации сальмонелл по реакции агглютинации (PA) на стекле

Общие положения

Наборы сывороток сальмонеллезных O-комплексных и монорецепторных O- и H-агглютинирующих предназначены для экспресс-диагностики по РА на предметном стекле 33 групп сальмонелл, выделяемых от животных, из продуктов животного происхождения и объектов внешней среды.

Сыворотки выпускают наборами N 1 и N 2 в двух коробках (табл. 1).

1. Состав наборов

Набор N 1		Набор N 2
Номер O-комплексных сывороток	Рецепторный состав комплексных сывороток	Монорецепторные сыворотки
		O	H
			первой фазы	второй фазы
1	4, 7, 8, 9, 10, 15, 19	6	i m	e, n, x
2	4, 11, 16, 17, 18, 21, 28	14	c t	2
3	7, 11, 30, 35, 38, 39, 40	46	r p	5
4	8, 16, 30, 41, 42, 43, 44	34	e h	6
5	9, 17, 35, 41, 45, 47, 48	20	l v	(1, 2, 5, 6)
6	10, 18, 38, 42, 45, 50, 52		d
7	15, 21, 39, 43, 47, 50, 53		b
8	19, 28, 40, 44, 48, 52, 53		g

В наборе N 1 имеются по два флакона O-комплексных сывороток N 1, 2, 3, 4 и 5 объемом 4 каждый и по одному флакону сывороток N 6, 7 и 8 объемом 2 каждый.

Этикетки на флаконах и коробках красного цвета.

В наборе N 2 имеется по одному флакону O- и H-монорецепторных сывороток объемом 2 каждый.

Этикетки на флаконах и коробках зеленого цвета.

В каждую коробку с сыворотками вложено наставление по их применению.

На коробках с сыворотками должны быть наклеены этикетки с указанием предприятия-изготовителя и его товарного знака, названия набора, его номера, наименования сывороток и рецепторов, входящих в набор, числа флаконов каждой сыворотки, объема препарата во флаконе, номеров серии, госконтроля и ТУ, даты изготовления, срока годности, условий хранения.

На флаконах с сыворотками должны быть наклеены этикетки с указанием предприятия-изготовителя и его товарного знака, наименования сыворотки и рецептора (для O-комплексных сывороток - номера и рецепторного состава), даты изготовления, номеров серии, госконтроля и ТУ.

Срок годности сывороток, хранящихся при температуре 6-15°С, составляет 3 года.

Вскрытые флаконы с неиспользованной сывороткой плотно закрывают резиновыми пробками и хранят при температуре 4-6°С для дальнейшего использования.

Сыворотка проросшая, мутная, содержащая хлопья, к употреблению не пригодна. На дне флакона допускается выпадение осадка кристаллов борной кислоты, не мешающего учету реакции.

Порядок идентификации культур

Сыворотки используют для идентификации культур бактерий, отнесенных по морфологическим, культуральным и ферментативным свойствам к роду сальмонелла.

Испытуемую культуру выращивают на скошенном мясо-пептонном агаре 18-24 ч при температуре 37-38°С.

Первоначально культуру испытывают с O-комплексными сыворотками. Для этого РА на стекле ставят с каждой из O-комплексных сывороток последовательно, начиная с первой, до получения положительного результата с двумя сыворотками. Серогрупповую принадлежность сальмонелл устанавливают по результатам реакции агглютинации (табл. 2).

При необходимости разделения сальмонелл серогрупп от ; от ; от ; от проводят дополнительное исследование этих культур с монорецепторными O-сыворотками (табл. 3).

2. Серогрупповая принадлежность сальмонелл по результатам PA

Сальмонеллы
агглютинируются комплексными сыворотками	содержат O-антиген	относятся к серогруппе
1 и 2	O4	B
1 и 3	O7	или
1 и 4	O8	или
1 и 5	O9	или
1 и 6	O10
1 и 7	O15	или
1 и 8	O19
2 и 3	O11	F
2 и 4	O16	J
2 и 5	O17	I
2 и 6	O18	K
2 и 7	O21	L
2 и 8	O28	M
3 и 4	O30	N
3 и 5	O35	O
3 и 6	O38	P
3 и 7	O39	Q
3 и 8	O40	R
4 и 5	O41	S
4 и 6	O42	T
4 и 7	O43	U
4 и 8	O44	V
5 и 6	O45	W
5 и 7	O47	X
5 и 8	O48	Y
6 и 7	O50	Z
6 и 8	O52	52
7 и 8	O53	53

3. Дифференциация сальмонелл серогрупп от ; от ; от ; от

Дифференцируемые серогруппы	Реакция с сывороткой	Результат	Серогрупповая принадлежность
и	O14	-
и	O6	+
		-
		+
	O20	-
и		+
	O46	-
и	O34	+
		-
		+

Примечание. (+) - положительная реакция, (-) - отрицательная.

Для определения серотиповой принадлежности сальмонеллы, отнесенные к определенной серогруппе, испытывают с H-моносыворотками 1 и 2-й фаз. При выборе сывороток для реакции исходят из антигенной структуры сальмонелл той группы, к которой отнесена определяемая культура, с учетом вида исследуемого животного.

2.6. Культуры сальмонелл, не идентифицированные имеющимися в наборе сыворотками, следует направлять во Всесоюзный ордена Трудового Красного Знамени государственный научно-контрольный институт ветеринарных препаратов (123022, Москва, Д-22, Звенигородское шоссе, 5).

Техника постановки РА

Из флакона, не захватывая осадка борной кислоты, пастеровской пипеткой набирают сыворотку, одну каплю которой наносят на предметное стекло. Бактериологической петлей в нее вносят 20-24-часовую испытуемую агаровую культуру сальмонелл. Для РА с O-сыворотками культуру берут с верхней части агара, с H-сыворотками - с нижней, вблизи конденсационной жидкости.

Петлю с культурой увлажняют в капле сыворотки, затем культуру тщательно растирают рядом с каплей, смешивают с сывороткой и энергично (6-10 раз) покачивают стекло круговыми движениями.

Агглютинация наступает сразу или не позднее 1-2 мин.

Реакцию учитывают при хорошем освещении. Можно использовать ручную лупу.

O-агглютинат имеет вид плотных, с трудом разбивающихся комочков и зернышек, H-агглютинат - крупных, рыхлых, легко разбивающихся хлопьев.

Агглютинация проявляется в виде склеивания бактериальной массы и полного или частичного просветления жидкости.

При отрицательной реакции культура после тщательного смешивания с каплей сыворотки образует гомогенную взвесь.

При появлении неспецифических реакций или установлении слабой активности сывороток необходимо сообщить об этом в ВГНКИ ветпрепаратов и предприятию-изготовителю.

Одновременно в ВГНКИ ветпрепаратов в соответствии с указанием Главного управления ветеринарии "О порядке предъявления рекламаций на биопрепараты" направляют с нарочным одну коробку с сыворотками.