Приложение F (справочное). Тесты in vitro для оценки эмбриотоксичности

Приложение F
(справочное)

Тесты in vitro для оценки эмбриотоксичности

В области онтогенетической токсичности существуют разнообразные альтернативы исследованиям на интактном животном. За последние 30 лет разработан широкий спектр испытаний in vitro с использованием как клеточных, тканевых и органных культур, так и цельных эмбриональных культур. Следуя рекомендациям рабочего семинара ECVAM по репродуктивной токсичности (см. [87]), ECVAM инициировал и спонсировал валидационное исследование трех тестов оценки эмбриотоксичности in vitro. В двух из этих тестов использованы беременные лабораторные животные для получения эмбриональной ткани: либо первичные эмбриональные клетки из микромассы мыши (ММ-тест) (см. [88]), либо эмбрионы крысы в тесте эмбриональной культуры (WEC-тест) (см. [89]-[92]).

В третьем тесте на эмбриональных стволовых клетках, (см. [92]-[95]) использована перманентная линия эмбриональных стволовых клеток мыши (EST-тест). Главной целью валидизации была оценка результативности трех методов in vitro по способности разделять соединения на не эмбриотоксичные, слабо эмбриотоксичные и сильно эмбриотоксичные. Доказано, что все три теста на эмбриотоксичность in vitro применимы к исследованиям разнообразных химических веществ с различным эмбриотоксичным потенциалом (см. [96]). Результаты, полученные при слепом исследовании на определяющей фазе валидационного исследования ECVAM, воспроизводимы как в рамках каждой лаборатории, так и в межлабораторных испытаниях. Конкордантность in vitro и in vivo была хорошей для ES- и WEC-тестов [с одной моделью прогнозируемости (ПМ)] и достаточной для ММ- и WEC-тестов (с другой ПМ) в соответствии с критериями (см. таблицу F.1), определенными командой менеджмента до начала проведения валидационного исследования (см. [96]). Сравнение классификаций in vitro и in vivo, основанных на валидационном исследовании 14 химических веществ, приведено в таблице F.2. Также опубликованы заключительный отчет по результатам валидационного исследования ECVAM, отчет по выбору химических веществ для исследования и три подробных исследования с биостатистикой для каждого из трех тестов оценки эмбриотоксичности in vitro в рамках валидационного исследования (см. [96]-[100]).

В Научном консультативном комитете ECVAM (ESAC) по итогам проведенных исследований пришли к выводу о том, что три теста на эмбриотоксичность in vitro были в достаточной степени валидизированы и могут быть применены при оценке эмбриотоксичного потенциала лекарств и других химических веществ (см. [101]). ESAC рекомендовал создание рабочей группы для разработки руководства по применению трех научно-оцененных методов испытаний в контексте исследования репродуктивной токсичности. Таким образом, ECVAM и ZEBET (Центр документации и оценки альтернатив опытам на животных) провели второе рабочее совещание по эмбриотоксичности для дальнейшей оценки практического применения трех методов оценки эмбриотоксичности in vitro. Результаты данного рабочего семинара опубликованы (см. [102]).

Таблица F.1 - Критерии, определенные группой менеджмента исследования, для оценки результативности испытания

Критерий	Результативность, %
Случайный	33
Обоснованный	65
Хороший	75
Отличный	85

Таблица F.2 - Обобщение результатов классификации (все данные [88])

Классификация	EST	ММ	WE С, %
	%	%	РМ1	РМ2
Прогностическая ценность (не эмбриотоксичный)	72	57	56	70
Прогностическая ценность (слабо эмбриотоксичный)	70	71	75	76
Прогностическая ценность (сильно эмбриотоксичный)	100	100	79	100
Точность (не эмбриотоксичный)	70	80	70	80
Точность (слабо эмбриотоксичный)	83	60	45	65
Точность (сильно эмбриотоксичный)	81	69	94	100
Достоверность	78	70	68	80