Приложение Б (справочное). Медленнотекущие реакции

Приложение Б
(справочное)

Медленнотекущие реакции

Б.1 Медленнотекущие реакции возникают вследствие присутствия в матрице пробы ферментов, не указанных в стандарте, а также вследствие взаимодействия побочных компонентов матрицы с реактивами, участвующими в ферментативной реакции.

Б.2 При проведении запланированной ферментативной реакции оптическая плотность через 10-20 мин принимает постоянное значение, которое зависит от скорости специфичной ферментативной реакции. При появлении медленнотекущей реакции оптическая плотность раствора пробы в кювете меняется с течением времени.

Б.3 В случае возникновения медленнотекущей реакции проводят повторные определения оптической плотности раствора пробы в кювете через каждые 2-5 мин. После выполнения пяти-шести повторных определений и при условии достижения постоянного изменения оптической плотности за единицу времени (dA/dt = const) фотометрические измерения прекращают.

Примечание - Этим можно пренебречь, если оптические плотности растворов контроля и пробы измеряются непосредственно друг за другом.

Б.4 По полученным данным строят график зависимости оптической плотности А от времени t (см. рисунок Б.1). Для определения окончательного значения оптической плотности, используемого для вычисления массовой концентрации уксусной кислоты (см. 10.1), экстраполируют кривую на момент внесения фермента в реакционную систему t₀ (см. рисунок Б.1). Для получения достоверных результатов разность конечного A_f и начального A_i значений оптических плотностей должна быть не менее 0,040.

Рисунок Б.1 - Определение окончательного значения оптической плотности по кинетической кривой реакции