Приложение А (справочное). Медленнотекущие реакции

Приложение А
(справочное)

Медленнотекущие реакции

А.1 Медленнотекущие реакции возникают вследствие присутствия в матрице пробы ферментов, не указанных в стандарте, а также вследствие взаимодействия побочных компонентов матрицы с реактивами, участвующими в ферментативной реакции.

А.2 При проведении запланированной ферментативной реакции оптическая плотность через 10-20 мин принимает постоянное значение, которое зависит от скорости специфичной ферментативной реакции. При появлении медленнотекущей реакции оптическая плотность раствора пробы в кювете меняется с течением времени.

A.3 В случае возникновения медленнотекущей реакции проводят повторные определения оптической плотности раствора пробы в кювете через каждые 2-5 мин. После выполнения пяти-шести повторных определений и при условии достижения постоянного изменения оптической плотности за единицу времени (dA/dt = const) фотометрические измерения прекращают.

Примечание - Этим можно пренебречь, если оптические плотности растворов контроля и пробы измеряют непосредственно друг за другом.

А.4 По полученным данным строят график зависимости оптической плотности А от времени t (см. рисунок А.1). Для определения окончательного значения оптической плотности, используемого при вычислении массовой концентрации по 10.1, экстраполируют кривую на момент внесения фермента в реакционную систему t₀ (см. рисунок А.1). Для получения достоверных результатов испытания пробы разность конечного (A_f) и начального (А_i) значений оптических плотностей должна быть не менее 0,040.

Рисунок А.1 - Определение окончательного значения оптической плотности по кинетической кривой реакции