Приложение А (справочное). Мониторинг хроматографических характеристик колонки

Приложение А
(справочное)

Мониторинг хроматографических характеристик колонки

А.1 Проверку оптимальности хроматографических условий (хроматографических характеристик колонки) проводят по хроматограмме градуировочного раствора N 4 с помощью программного обеспечения или вручную по показателям в соответствии с таблицами А.1 и А.2.

Таблица А.1* - Времена удерживания, число теоретических тарелок и коэффициент асимметрии хроматографических пиков

Компонент	Время удерживания, мин	Число теоретических тарелок N	Коэффициент асимметрии As
4-гидроксибензойная кислота	4,22 0,30	12 638	1,88
Бензойная кислота	5,36 0,25	19 080	1,91
Сорбиновая кислота	6,04 0,25	17 358	1,74
Метил-4-гидроксибензоата	8,07 0,25	15471	1,55
Этил-4-гидроксибензоата	11,45 0,20	14 071	1,41
н-пропил-4-гидроксибензоата	18,12 0,30	12 829	1,28
н-бутил-4-гидроксибензоата	30,81 0,45	12 520	1,25

* Значения получены при использовании хроматографической колонки Zorbax SB С 8 фирмы Agilent. Информация является рекомендуемой, приведена для удобства пользователей настоящего стандарта.

Таблица А.2 - Разрешение хроматографических пиков консервантов

Компоненты	Разрешение Rs
4-гидроксибензойная кислота/бензойная кислота	6,36
Бензойная кислота/сорбиновая кислота	3,33
Сорбиновая кислота/метил-4-гидроксибензоат	3,45
Метил-4-гидроксибензоат/этил-4-гидроксибензоат	9,88
Этил-4-гидроксибензоат/н-пропил-4-гидроксибензоата	1,28
н-пропил-4-гидроксибензоата/н-бутил-4-гидроксибензоат	1,44

А.2 Время удерживания соответствующего компонента определяют непосредственно из хроматограмм двух параллельных измерений одной пробы. В случае обнаружения отклонения времен удерживания более чем на 5 % от ранее установленного для любого консерванта проводят контроль стабильности градуировочной характеристики согласно 6.6.

В случае невыполнения условий неравенства (3) заново устанавливают градуировочную характеристику во всем диапазоне измерений. В случае выполнения условий неравенства (3) допускается программное изменение времен удерживания консервантов.

А.3 Число теоретических тарелок рассчитывают по формуле

,

(А.1)

где 16 и 5,545 - множители, вытекающие из свойств кривой нормального распределения;

- время удерживания пика, мин;

- ширина пика у основания, мин;

- ширина пика на его полувысоте, мин.

Колонка считается удовлетворительной, если найденное число теоретических тарелок составляет не менее 90 % от приведенного в таблице А.1.

А.4 Разрешение R_s вычисляют по формуле

,

(А.2)

где , - времена удерживания разделяемых полностью или критически (не полностью) компонентов, мин;

, - ширина пиков у основания, мин.

По результатам двух параллельных измерений вычисляют средние значения R_s для пары разделяемых полностью или критически (не полностью) компонентов (n, n + 1). Колонка считается удовлетворительной при значениях R_s n, n + 1  1,0.

А.5 Коэффициент асимметрии A_s вычисляют по формуле

,

(А.3)

где А - "левый" отрезок, образованный на горизонтальной линии, проведенной на высоте 10 % от основания пика и разделенной вертикалью, опущенной из вершины пика, мин;

В - "правый" отрезок, образованный на горизонтальной линии, проведенной на высоте 10 % от основания пика и разделенной вертикалью, опущенной из вершины пика, мин.

А.6 Колонку считают удовлетворительной при значении коэффициента асимметрии, не превышающем 2,5.

А.7 Контроль стабильности хроматографической колонки в процессе эксплуатации проводят не реже одного раза в две недели.