Приложение В (обязательное). Метод определения эффективности бактериальной фильтрации in vitro

Приложение В
(обязательное)

Метод
определения эффективности бактериальной фильтрации in vitro

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Золотистый стафилококк является возбудителем инфекции. Должны быть соблюдены соответствующие положения национального законодательства и инструкции в области гигиены при обращении с патогенными микроорганизмами.

В.1 Принцип метода

Образец материала маски помещают в шестиступенчатый каскадный импактор и аэрозольную камеру. Аэрозоль золотистого стафилококка вводят в аэрозольную камеру и проводят через материал маски и импактор в условиях вакуума. Эффективность бактериальной фильтрации маски представляет собой число КОЕ, проходящих через материал медицинской маски, выраженное в процентах от числа КОЕ, присутствующих в аэрозоле провокационной пробы.

В.2 Реагенты и материалы

В.2.1 Общие положения

В В.2.2 и В.2.3 описаны имеющиеся в продаже растворы триптического соевого агара и триптического соевого бульона. Могут быть использованы другие варианты.

В.2.2 Триптический соевый агар

Формула/л
Ферментативный продукт переваривания казеина	15 г
Ферментативный продукт переваривания соевого шрота	5 г
Хлорид натрия	5 г
Агар	15 г
Конечное значение рН	(7,3  0,2) при температуре 25 °С

В.2.3 Триптический соевый бульон

Формула/л
Ферментативный продукт переваривания казеина	17 г
Ферментативный продукт переваривания соевого шрота	3 г
Хлорид натрия	5 г
Дигидрофосфат калия	2,5 г
Декстроза	2,5 г
Конечное значение рН	(7,3  0,2) при температуре 25 °С

В.2.4 Пептонная вода

Формула/л
Пептон	10 г
Хлорид натрия	5 г
Конечное значение рН	(7,2  0,2) при температуре 25 °С

В.2.5 Культура золотистого стафилококка АТСС 6538, растущая на скошенном триптическом соевом агаре

В.3 Оборудование

В.3.1 Шестиступенчатый каскадный импактор.

В.3.2 Распылитель, способный доставлять частицы среднего размера (3,0   0,3) мкм при контакте с импактором.

В.3.3 Аэрозольная камера, стекло, длина 600 мм, внешний диаметр 80 мм.

В.3.4 Расходомер, способный измерять расход 28,3 л/мин.

В.3.5 Датчик давления, способный измерять давление 35 кПа с точностью  1 кПа.

В.3.6 Колбы Эрленмейера, объем 250 и 500 мл.

В.3.7 Перистальтический или шприцевой насос производительностью 0,01 мл/мин.

В.3.8 Вакуумный насос, способный поддерживать расход 57 л/мин.

В.4 Образцы

Испытуемые образцы должны быть вырезаны из готовой маски. Каждый образец должен быть размером не менее 100 х 100 мм и включать в себя все слои маски в том порядке, в котором они находятся в готовой маске. Количество образцов, которые должны пройти испытания, - не менее пяти, но количество может быть больше при необходимости учитывать приемлемый уровень качества 4 %. Все испытуемые образцы должны быть взяты из репрезентативных участков для включения всех/любых вариантов конструкции. Если не указано иное, испытания должны быть проведены с внутренней стороны медицинской маски, находящейся в контакте с бактериальной провокационной пробой.

Каждый испытуемый образец выдерживают при температуре (21  5) °С и относительной влажности воздуха (85  5) % в течение времени, необходимого для приведения в равновесие с атмосферными условиями до начала испытаний.

В.5 Приготовление бактериальной провокационной пробы

Золотистый стафилококк (см. В.2.4) должен быть инокулирован в 30 мл триптического соевого бульона в колбе Эрленмейера и инкубирован при слабом встряхивании при температуре (37  2) °С в течение (24  2) ч. Затем культуру разводят в пептонной воде до концентрации примерно КОЕ/мл.

Бактериальная проба должна поддерживать концентрацию (2200  500) КОЕ на тест. Бактериальную пробу определяют на основе опыта и предыдущих положительных результатов контрольных чашек (см. В.6.3) и разведение провокационной суспензии корректируют соответственно. Средний размер частиц в бактериальной пробе должен поддерживаться на уровне (3,0  0,3) мкм (см. В.6.9).

В.6 Процедура

В.6.1 Собирают прибор в соответствии со схемой, приведенной на рисунке В.1.

В.6.2 Помещают бактериальную провокационную пробу в распылитель с помощью перистальтического или шприцевого насоса.

В.6.3 Выполняют положительный контроль без испытуемого образца. Начинают моделирование бактериального заражения, включив вакуумный насос, регулируют расход через каскадный импактор до 28,3 л/мин. Добавляют бактериальную пробу на 1 мин. Поддерживают поток воздуха через импактор в течение 2 мин. Затем вынимают чашки из импактора. Убеждаются в том, что каждая чашка пронумерована с указанием положения в импакторе.

В.6.4 Помещают свежие чашки в импактор, фиксируют образец и повторяют описанную выше процедуру.

В.6.5 Повторяют эту процедуру для каждого испытуемого образца.

В.6.6 После испытания последнего образца выполняют дополнительный положительный контроль.

В.6.7 Выполняют отрицательный контроль с прохождением воздуха без добавления бактериальной пробы через каскадный импактор в течение 2 мин.

В.6.8 Инкубируют все чашки при температуре (37  2) °С в течение (48  4) ч.

В.6.9 Для каждого образца и контроля подсчитывают количество колоний в каждой чашке и суммируют результаты для получения общего числа КОЕ, собранных импактором с использованием таблицы преобразования "positive hole"* в соответствии с инструкциями изготовителя каскадного импактора (три - шесть ступеней). Для двух положительных контролей принимают среднее значение двух сумм. Для чашек положительного контроля вычисляют средний размер частиц аэрозоля бактериальной пробы с помощью таблицы преобразования "positive hole" в соответствии с инструкциями изготовителя каскадного импактора.

------------------------------

* См. таблицу преобразования "positive hole" в руководстве пользователя пробоотборника Андерсена.

В.7 Расчет эффективности бактериальной фильтрации

Для каждого образца рассчитывают эффективность бактериальной фильтрации В, %, по следующей формуле:

,

где С - среднее значение количества бактерий для всех чашек для двух положительных контролей;

Т - общее количество бактерий для образца.

В.8 Протокол испытаний

В протоколе испытания должна быть представлена следующая информация:

a) номер и дата настоящего стандарта;

b) номер или код серии испытуемых масок;

c) размеры испытательных образцов и размер тестируемого участка;

d) сторона тестируемого образца, обращенная к провокационному аэрозолю;

e) расход во время испытания;

f) среднее значение общего количества бактерий для двух положительных контролей;

g) среднее число колоний в чашках отрицательного контроля;

h) эффективность бактериальной фильтрации для каждого испытанного образца.

Рисунок В.1 - Принцип работы прибора для испытания эффективности бактериальной фильтрации

1 - приводной механизм; 2 - взвесь бактерий; 3 - распылитель; 4 - фильтр; 5 - аэрозольная камера; 6 - источник воздуха высокого давления; 7 - тестируемый материал; 8 - микробиологический пробоотборник; 9 - выход для раковины; 10 - конденсатор; 11 - вход для холодной воды; 12 - откалиброванный расходомер; 13 - компрессор (вакуумный насос)

Рисунок В.2 - Прибор для испытания эффективности бактериальной фильтрации